CC BY
22
Заключение. Предлагаемая схема иммунизации позволяет в короткий период (18 дней) получить О-антисы-норотки к У еШетсоНИса в титрах 1:3200-1:6400, пригодные для диагностического серотипиропания. Обнаруженное сходство антигенов У еШегосоНИса 1Р846(0:18) м У. р±-еш1о1иЬегси1ох1х 1 серовара представляет интерес, поскольку У.етегосоКиса серовара 0:18 относится к клиническим штаммам I биотипа, вызывающим тяжелую форму гастроэнтерита в Америке.
Определение абсолютного количества аллергенспецифических Иг Е-антител методом ИФА
Головин Г.Г., Ермолов В.В., Герпазнсва В.Б.,
Райкис Б.Н.
ФГУП "Аллерген", г. Ставрополь
При разработке иммуноферментиых тест-систем (ИФТС) для определения аллергенспецифических Иг Е-антител к пыльце злаковых трав и деревьев оценку уровня Иг Е-антител к этим аллергенам в сыворотках больных и здоровых людей проводили в сравнении со стандартизованной сывороткой больных, чувствительных к указанным аллергенам. В стандартизованной сыворотке содержание аллергенспецифических Иг Е соответствовало 4 классу, определенному в радиоаллергосорбент-иом тесте. Для отработки параметров референс-систе-мы необходимо было провести первичную стандартизацию сывороток, уровень Иг Е которых соответствовал 4 классу в РАСТ, т. е. определить абсолютное количество аллергенспецифических Иг Е-антител. При этом мы использовали ИФТС для определения общего Иг Е и аллергенспецифических Иг Е-антител.
На первом этапе в лунках стрипов, сенсибилизированных соответствующими аллергенами, инкубировали сыворотки крови больных с высокой чувствительностью к данному аллергену. После инкубации с аллергосорбентом подсчитывали количество аллергенспецифических Иг Е, связавшихся с аллергеном, и тех, что остались в растворе. Для оценки количества Иг Е-антител, связавшихся с аллергеном, их элюировали с поверхности твердой фазы путем добавления в лунки фосфатносолевого буферного раствора рЫ 11.0. Далее элюаты отбирали из лунок, и содержание ИгЕ в них определяли иммуноферментным анализом.
После удаления элюатов подсчитывали количество оставшихся на поверхности лунок неэлюированных Иг Е-антител. Количество неэлюированных Иг Е-аитител определяли путем сравнения уровней сигналов иммуно-ферментной реакции исследуемых образцов и разных концентраций стандарта общего ИгЕ на калибровочной кривой.
Таким образом, процедура определения абсолютного количества аллергенспецифических Иг Е-антител методом элюции с твердофазного аллергена состоит из
определения количества аллергенспецифических Иг Е. зафиксированных на аллергене, и Иг Е-антител, не связавшихся с аллергеном.
Разработка референс-системы в иммуноферментном тесте для определения аллергенспецифических Иг Е-антител
Головин Г.Г., Ермолов В.В., Гсрвазиепа В.Б.,
РаПкис Б.Н.
ФГУП “Аллерген" г. Ставрополь
В разработанной ранее и выпускаемой в промышленных масштабах иммуноферментной тест-системе для определения аллергенспецифических Иг Е-антител в качестве референс-системы использовали твердую фазу с аллергеном амброзии и пул сывороток крови с максимально высоким уровнем Иг Е-антител, специфичных к амброзии. Применение такой референс-системы обусловлено широким распространением амброзии, особенно в южных регионах страны, наличием большого количества больных, чувствительных к амброзии и имеющих высокий уровень аллергенспецифических Иг Е-антител в крови. Но эта референс-система имеет существенный недостаток, который заключается в том, что для изготовления референс-препарата необходимо использование сыворотки больных с высоким уровнем Иг Е-антител, соответствующем 4 классу в радиоаллергосорбентном тесте (РАСТ). Такая концентрация аллергенспецифических Иг Е-антител выявляется в крови у относительно небольшого количества пациентов. Это существенно усложняет выпуск данного реагента в промышленных масштабах. Поэтому нами была поставлена задача: разработать референс-систему на основе более доступных реагентов.
С этой целью мы попытались обосновать возможность замены в рефереис-системе сыворотки больных с высоким уровнем Иг Е-антител, специфичных к амброзии на пул сывороток с высоким уровнем общего Иг Е, а аллергены на твердой фазе - на моноклональные анти-Иг Е антитела. Такая замена теоретически обоснована тем, что обе реакции - между аллергеном на твердой фазе и аллергенспецифнческими антителами п первом случае и между моноклональными анти-Иг Е антителами, иммобилизованными на твердой фазе и общим Иг Е во втором случае проявляются одним и тем же обнару-ж и ва ю щи м р еа ге нто м - ко и ь ю гатом м о но кл о нал ь и ы х ан ги-Иг Е антител и фермента. В качестве стандарта в разрабатываемой рефереис-системе брали пул сывороток больных аллергическими заболеваниями с общим уровнем ИгЕ 200-8000 КЕ/л, который разводили до содержания ИгЕ 75-100 КЕ/л. Концентрацию Иг Е в сыворотках, пуле и приготовленных образцах стандартов определяли набором IgE EIA kit фирмы Эббот (США). Стандарт использовали цельным и разводили в 5; 25 и 50 раз.
