CC BY
9
и подкожно-жировая клетчатка обычного гистологического строения без воспалений.
Заключение: Предложенная комбинированная терапия в группе А+ЛП показала свою эффективность при заживлении МЛП тяжелой степени. Изолированное использование АМ также показало свою эффективность — применение способствовало заживлению тканей и сокращению площади язвенной поверхности.
Литература:
1. Agraval U, Rundle P, Rennie IG et al. Eye (Lond). 2017 Jun;31(6):884-889.
2. Meiler D, Pauklin M, Thomasen H et al. Dtsch Arztebl Int. 2011 Apr;108(14):243-8.
ВЛИЯНИЕ СТЕРИЛИЗАЦИИ В СРЕДЕ СВЕРХКРИТИЧЕСКОГО ДИОКСИДА УГЛЕРОДА НА КАЧЕСТВО КОНСЕРВИРОВАННЫХ АЛЛОГЕННЫХ СУХОЖИЛИЙ
А.А. Будаев1, Н.В. Боровкова1, А.Ю. Николаев2, М.С. Макаров1, М.В. Сторожева1, Т.В. Черненькая1
1 ГБУЗ НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского ДЗ г. Москвы, Москва, Россия
2 Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН, Москва, Россия
e-mail: BudaevAA@sklif.mos.ru
Ключевые слова: сверхкритический, диоксид углерода, трансплантат, сухожилия, аллогенный, стерилизация.
Цель исследования — оценить стерильность, токсичность и целостность ткани трансплантатов аллогенных сухожилий при использовании разных режимов обработки в среде сверхкритического диоксида углерода (СК СО2).
В работе исследовали 42 образца сухожилий m. tibialis anterior длинной 5 см, полученных от тканевых доноров. Образцы трансплантатов обрабатывали 10% диметил-сульфоксидом 30 минут, помещали в криопробирки объемом 5 мл с перфорированной винтовой крышкой и упаковывали в комбинированный плоский пакет для газовой стерилизации с индикатором. В зависимости от режима стерилизации, образцы разделили на несколько групп: 1 и 4 группы — 6 часов, 100 атм., 2 и 5 группы — 10 часов, 100 атм., 3 и 6 группы — 72 часа, 75 атм. В группах 1-3 проводился медленный сброс давления СО2 (декомпрессия), в 4-6 группах — быстрый. В качестве контроля использовали 6 образцов нативных сухожилий. После стерилизации трансплантаты 1-6 групп хранили при температуре -80оС в течение 14 суток, затем размораживали при +4оС. Стерильность сухожилий оценивали по стандартной методике с использованием тиогликоле-вой среды и бульона Сабуро. Гистологические препараты сухожилий окрашивали гематоксилин-эозином, также оценивали интенсивность автофлуоресценции коллаге-новых волокон. Исследование токсичности проводили в культуре мультипотентных мезенхимальных стромаль-ных клеток костного мозга человека.
После вскрытия реакторов для стерилизации в среде СК СО2 у групп образцов с режимом быстрой декомпрессии выявлены разрывы и намокание упаковочного пакета, у большинства криопробирок сорваны крышки, сухожилия находились на бумажной подложке пакета. В группах с медленной декомпрессией целостность пакетов, пробирок и ткани визуально была не нарушена.
На всех образцах сработал индикатор газовой стерилизации. При бактериологическом посеве трансплантаты из групп с медленной декомпрессией были стерильными, с быстрой декомпрессией — нестерильными. Коллагеновые волокна сухожилий 1-3 групп сохраняли свою целостность и топографию, были параллельно ориентированы и содержали незначительные локальные разрывы, интенсивность их автофлуоресценции соответствовала норме. В сухожилиях 4-6 групп отмечали выраженную отечность, наличие декондесированных волокон с распадом на отдельные фибриллы, обширные разрывы, интенсивность автофлуоресценции коллагена была снижена в 2,1-3,5 раза. Исследование in vitro показало, что все исследуемые типы трансплантатов не оказывали токсического действия на клетки.
Таким образом, режимы стерилизации сухожилий в среде СК СО2 с медленной декомпрессией обеспечивают стерильность трансплантатов и позволяют эффективно сохранить архитектонику ткани.
ИММУНОСУПРЕССИВНАЯ АКТИВНОСТЬ ИНДУЦИРОВАННЫХ МИКРОВЕЗИКУЛ
А.А. Будюкова, С.В. Курбангалеева, М.О. Гомзикова
Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, Казань, Россия
e-mail: budYukova.02@gmail.com
Ключевые слова: естественные везикулы, индуцированные микровезикулы, мезенхимные стволовые клетки, цитохала-зин В.
Клеточная терапия на основе мезенхимных стволовых клеток (МСК) сопряжена с определенными рисками. Однако, везикулы, высвобождаемые МСК, сохраняют терапевтический потенциал родительских клеток. При этом они не несут риска онкотрансформации и являются безопасным терапевтическим инструментом. Главное препятствие для внедрения везикул в клиническую практику — это их ограниченный выход. Метод, разработанный Pick et al., позволяет получить индуцированные микровезикулы (МВ) с помощью цитохалазина В (ЦВ) в большом количестве за счет блокировки полимеризации актиновых филаментов цитоскелета [1]. Было показано, что естественные везикулы, полученные из МСК, демонстрируют иммуносупрессивную активность на дендритных клетках, Т и В-лимфоцитах, макрофагах [2]. Однако, обладают ли подобной способностью индуцированные МВ (далее МВ-ЦВ) оставалось до настоящего времени неизученным. Поэтому мы оценили иммуномодулирую-щую активность МВ-ЦВ, выделенных из МСК, на моно-нуклеарных клетках периферической крови человека (МКПК) in vitro.
МКПК были изолированы из крови с использованием Фиколла путем центрифугирования в градиенте плотности. МВ-ЦВ были получены из МСК жировой ткани человека, обработанных 10 мкг/мл цитохалазина В. МКПК были окрашены CFDA SE, затем инкубированы с 10 мкг/ мл МВ-ЦВ в течение 24 ч и проанализированы с помощью проточного цитофлуориметра BD FACS Aria III.
Фитогемагглютинин (ФГА) способен индуцировать активацию и пролиферацию лимфоцитов in vitro. ФГА (10 мкг/мл) использовался в качестве контроля как активатор, так как было показано, что он повышает экспрессию CD25, являющегося маркером ранней активации лейкоцитов. Иммуноокрашивание с использованием
моноклональных антител CD4, CD19 и CD8 проводили на 3-й день после активации лимфоцитов. ФГА увеличил экспрессию маркера активации CD25 на Т-хелперах (CD4+CD25+; 86,6 ± 5,1%), B-клетках (CD19+CD25+; 90,7 ± 3,41%), и Т-цитотоксических лимфоцитах (CD8+CD25+; 87,36 ± 3,35%). Предобработка МКПК микровезикулами с последующей активацией ФГА ин-гибировала экспрессию CD25 среди всех рассматриваемых субпопуляций лимфоцитов: на Т-хелперах (37,56 ± 9,14%), B-клетках (44,93 ± 8,05%) и Т-цитотоксических лимфоцитах (19,96 ± 2,44%).
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что МВ-ЦВ МСК проявляют иммуносупрессивную активность на мононуклеарных клетках периферической крови человека. Исследование выполнено за счет средств гранта Российского научного фонда № 21-75-10035, в рамках Программы стратегического академического лидерства Казанского федерального университета (ПРИ0РИТЕТ-2030).
Литература:
1. Pick H., Schmid E.L., Tairi A.P., et al. J.Am. Chem. Soc. 2005. V.
127. P. 2908-2912.
2. Di Trapani M., Bassi G., Midolo M., et al. Sci. Rep. 2016. V. 6. P.
24120.
ДИОПСИД КАК НОСИТЕЛЬ
РЕКОМБИНАНТНОГО BMP-2 ДЛЯ
РАЗРАБОТКИ НОВЫХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ
РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ
И.Н. Булыгина1, 2, Ф.С. Сенатов1, 2,
П.А. Орлова1, А.В. Жулина1, М.С. Попонова1,
Т.М. Грунина1, 3, К.Е. Никитин1, Н.В. Струкова1,
М.С. Генералова1, А.В. Рязанова1, Р.
Чоудхари4, 5, А.В. Громов1, А.С. Карягина1, 3, 6
1 НИЦ эпидемиологии и микробиологии
им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России, Москва, Россия
2 Национальный исследовательский технологический университет «МИСиС», Москва, Россия
3 Всероссийский НИИ сельскохозяйственной биотехнологии Москва, Россия
4 Рижский технический университет, Рига, Латвия
5 Балтийский центр передового опыта в области биоматериалов, Штаб-квартира в Рижском техническом университете, Рига, Латвия
6 НИИ физико-химической биологии
им. А.Н. Белозерского, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: ibulygina@misis.ru
Ключевые слова: силикатная керамика, диопсид, BMP-2.
Создание новых биоматериалов для регенеративной медицины направлено на улучшение свойств существующих материалов и конструкций с целью достижения ускоренной или же более качественной регенерации дефекта. Сверхвысокомолекулярный полиэтилен (СВМПЭ) уже зарекомендовал себя в качестве эффективного материала для реконструкции хряща, обеспечивая поверхность с низким коэффициентом трения. Однако исследования последних лет позволяют использовать пористый СВМПЭ и композиционный материал на основе СВМПЭ с добавлением гидроксиапатита также при регенерации костной ткани [1]. Одним из перспективных направлений в биомедицине является изучение свойств материалов
с альтернативными наполнителями, которые, благодаря своим уникальным характеристикам, могут обеспечить создание новых композиционных материалов с улучшенными свойствами. В качестве возможного наполнителя может рассматриваться диопсид (CaMgSi2O6), демонстрирующий осаждение апатита на поверхности при инкубации в растворе, имитирующем внеклеточную жидкость организма, что делает его многообещающим кандидатом для реконструкции костных дефектов [2]. Помимо этого, диопсид обладает хорошими сорбцион-ными свойствами по отношению к костному морфоге-нетическому белку-2 (BMP-2), использование которого сопряжено с повышением регенеративного потенциала. В настоящей работе на первом этапе был получен диоп-сид с помощью ранее опробованного золь-гель метода с окислительно-восстановительными реакциями с использованием дополнительной стадии механоактива-ции [3]. Полученная фракция представляла собой мезо-пористые микрочастицы диопсида. Далее были получены композиционные материалы на основе СВМПЭ и диоп-сида. Для этого проводилась механоактивация порошков диопсида и СВМПЭ и их смешение с солью в планетарной шаровой мельнице, с последующим термопрессованием и обессоливанием. Полученные пористые композиционные материалы были охарактеризованы посредством сканирующей электронной микроскопии. На последнем этапе была продемонстрирована возможность использования разработанного имплантируемого материала на основе СВМПЭ, диопсида и BMP-2 для регенерации костной ткани на моделях in vivo. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ 22-15-00216.
Литература:
1. Senatov F., Amanbek G., Orlova P. et al. MS&E:C. 2020. V. 111.
P. 110750.
2. Choudhary R., Venkatraman S.K., Bulygina I. et al. MS&E:C.
2021. V. 118. P. 111456.
3. Choudhary R., Venkatraman S.K., Bulygina I. et al. JofACS.
2020. V. 8(3). P. 862-87
НОВЫЕ НЕКОДИРУЮЩИЕ РНК,
АССОЦИИРОВАННЫЕ С ГЛИОЛБЛАСТОМОЙ
О.Ю. Буренина1, Ю.П. Рубцов2,
М.С. Павлюков2, О.Е. Мусатова2, Т.С. Зацепин3,
М.П. Рубцова3, О.А. Донцова1, 3
1 Сколковский институт науки и технологий, Москва, Россия
2 МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
3 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, Россия
e-mail: alunit@inbox.ru
Ключевые слова: длинные некодирующие РНК, альтернативный сплайсинг, онкомаркеры, глиобластома.
Некодирующие РНК (нкРНК) — это, как правило, ре-гуляторные молекулы, не подвергающиеся трансляции. Уровень их экспрессии зачастую чувствителен к малейшим изменениям в метаболизме клетки, в том числе обусловленных канцерогенезом. Ассоциированные с тем или иным видом рака днРНК могут быть использованы как специфичные онкомаркеры, а также как мишени для направленной терапии.
Ранее мы охарактеризовали новую печень-специфичную нкРНК HELIS [1], ген которой окружен неизвестными
