CC BY
5
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
37
и подкожно-жировая клетчатка обычного гистологического строения без воспалений.
Заключение: Предложенная комбинированная терапия в группе А+ЛП показала свою эффективность при заживлении МЛП тяжелой степени. Изолированное использование АМ также показало свою эффективность — применение способствовало заживлению тканей и сокращению площади язвенной поверхности.
Литература:
1. Agraval U, Rundle P, Rennie IG et al. Eye (Lond). 2017 Jun;31(6):884-889.
2. Meiler D, Pauklin M, Thomasen H et al. Dtsch Arztebl Int. 2011 Apr;108(14):243-8.
ВЛИЯНИЕ СТЕРИЛИЗАЦИИ В СРЕДЕ СВЕРХКРИТИЧЕСКОГО ДИОКСИДА УГЛЕРОДА НА КАЧЕСТВО КОНСЕРВИРОВАННЫХ АЛЛОГЕННЫХ СУХОЖИЛИЙ
А.А. Будаев1, Н.В. Боровкова1, А.Ю. Николаев2, М.С. Макаров1, М.В. Сторожева1, Т.В. Черненькая1
1 ГБУЗ НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского ДЗ г. Москвы, Москва, Россия
2 Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН, Москва, Россия
e-mail: BudaevAA@sklif.mos.ru
Ключевые слова: сверхкритический, диоксид углерода, трансплантат, сухожилия, аллогенный, стерилизация.
Цель исследования — оценить стерильность, токсичность и целостность ткани трансплантатов аллогенных сухожилий при использовании разных режимов обработки в среде сверхкритического диоксида углерода (СК СО2).
В работе исследовали 42 образца сухожилий m. tibialis anterior длинной 5 см, полученных от тканевых доноров. Образцы трансплантатов обрабатывали 10% диметил-сульфоксидом 30 минут, помещали в криопробирки объемом 5 мл с перфорированной винтовой крышкой и упаковывали в комбинированный плоский пакет для газовой стерилизации с индикатором. В зависимости от режима стерилизации, образцы разделили на несколько групп: 1 и 4 группы — 6 часов, 100 атм., 2 и 5 группы — 10 часов, 100 атм., 3 и 6 группы — 72 часа, 75 атм. В группах 1-3 проводился медленный сброс давления СО2 (декомпрессия), в 4-6 группах — быстрый. В качестве контроля использовали 6 образцов нативных сухожилий. После стерилизации трансплантаты 1-6 групп хранили при температуре -80оС в течение 14 суток, затем размораживали при +4оС. Стерильность сухожилий оценивали по стандартной методике с использованием тиогликоле-вой среды и бульона Сабуро. Гистологические препараты сухожилий окрашивали гематоксилин-эозином, также оценивали интенсивность автофлуоресценции коллаге-новых волокон. Исследование токсичности проводили в культуре мультипотентных мезенхимальных стромаль-ных клеток костного мозга человека.
После вскрытия реакторов для стерилизации в среде СК СО2 у групп образцов с режимом быстрой декомпрессии выявлены разрывы и намокание упаковочного пакета, у большинства криопробирок сорваны крышки, сухожилия находились на бумажной подложке пакета. В группах с медленной декомпрессией целостность пакетов, пробирок и ткани визуально была не нарушена.
На всех образцах сработал индикатор газовой стерилизации. При бактериологическом посеве трансплантаты из групп с медленной декомпрессией были стерильными, с быстрой декомпрессией — нестерильными. Коллагеновые волокна сухожилий 1-3 групп сохраняли свою целостность и топографию, были параллельно ориентированы и содержали незначительные локальные разрывы, интенсивность их автофлуоресценции соответствовала норме. В сухожилиях 4-6 групп отмечали выраженную отечность, наличие декондесированных волокон с распадом на отдельные фибриллы, обширные разрывы, интенсивность автофлуоресценции коллагена была снижена в 2,1-3,5 раза. Исследование in vitro показало, что все исследуемые типы трансплантатов не оказывали токсического действия на клетки.
Таким образом, режимы стерилизации сухожилий в среде СК СО2 с медленной декомпрессией обеспечивают стерильность трансплантатов и позволяют эффективно сохранить архитектонику ткани.
ИММУНОСУПРЕССИВНАЯ АКТИВНОСТЬ ИНДУЦИРОВАННЫХ МИКРОВЕЗИКУЛ
А.А. Будюкова, С.В. Курбангалеева, М.О. Гомзикова
Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, Казань, Россия
e-mail: budYukova.02@gmail.com
Ключевые слова: естественные везикулы, индуцированные микровезикулы, мезенхимные стволовые клетки, цитохала-зин В.
Клеточная терапия на основе мезенхимных стволовых клеток (МСК) сопряжена с определенными рисками. Однако, везикулы, высвобождаемые МСК, сохраняют терапевтический потенциал родительских клеток. При этом они не несут риска онкотрансформации и являются безопасным терапевтическим инструментом. Главное препятствие для внедрения везикул в клиническую практику — это их ограниченный выход. Метод, разработанный Pick et al., позволяет получить индуцированные микровезикулы (МВ) с помощью цитохалазина В (ЦВ) в большом количестве за счет блокировки полимеризации актиновых филаментов цитоскелета [1]. Было показано, что естественные везикулы, полученные из МСК, демонстрируют иммуносупрессивную активность на дендритных клетках, Т и В-лимфоцитах, макрофагах [2]. Однако, обладают ли подобной способностью индуцированные МВ (далее МВ-ЦВ) оставалось до настоящего времени неизученным. Поэтому мы оценили иммуномодулирую-щую активность МВ-ЦВ, выделенных из МСК, на моно-нуклеарных клетках периферической крови человека (МКПК) in vitro.
МКПК были изолированы из крови с использованием Фиколла путем центрифугирования в градиенте плотности. МВ-ЦВ были получены из МСК жировой ткани человека, обработанных 10 мкг/мл цитохалазина В. МКПК были окрашены CFDA SE, затем инкубированы с 10 мкг/ мл МВ-ЦВ в течение 24 ч и проанализированы с помощью проточного цитофлуориметра BD FACS Aria III.
Фитогемагглютинин (ФГА) способен индуцировать активацию и пролиферацию лимфоцитов in vitro. ФГА (10 мкг/мл) использовался в качестве контроля как активатор, так как было показано, что он повышает экспрессию CD25, являющегося маркером ранней активации лейкоцитов. Иммуноокрашивание с использованием
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
