Иммунологический метод оценки зараженности рыбной продукции nhhhhkamhawisaki's simplex Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ОЦЕНКИ ЗАРАЖЕННОСТИ РЫБНОЙ ПРОДУКЦИИ ЛИЧИНКАМИ,4^/&4ЯК SIMPLEX

Бережно В.К. *, Сиекоеа Т.Н.**, Успенский A.B.*, Прохорова Т.С.**, Лазарева О.Н.**

*ФГБНУ «ВНИИ фундаментальной и прикладной паразитологии животных и

растений им. К.И. Скрябина» "Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.Н. Прянишникова (tatiana-sivkova@yandex.ru)

Введение. Анизакидоз относится к числу наиболее распространенных паразитозов морских рыб, возбудителями которых являются личинки анизакид -Anisakis simplex, A. schupakovi и Pseudoterranova decipiens [2, 3, 4, 6]. О достаточно высокой экстенсивности инвазии анизакидами имеются данные в отношении таких видов рыб как путассу (91%); сельдь (41%); минтай (25%); сайда и скумбрия (28%); треска (25%).

Экспериментальными исследованиями установлено, что рыбная продукция от интенсивно зараженной анизакидами рыбы отличается низкими показателями качества и питательной ценности [7], а также она более интенсивно обсеменена микрофлорой, что отрицательно сказывается на сроках ее хранения [4]. Помимо этого, анизакиды представляют большую опасность для здоровья человека и животных, и в последние годы анизакидоз становится важной проблемой медицинской паразитологии [4, 5, 8].

Особенно участились случаи заболеваемости анизакидозом в связи с увеличением потребления в пищу блюд из сырой и полусырой рыбы, что чаще всего происходит в странах, где придерживаются традиционной японской и китайской кухни [5, 10, 11].

Личинки анизакид, внедряясь в слизистую и подслизистую оболочки, вызывают воспалительную реакцию со всеми вытекающими последствиями вплоть до некроза и перфорации кишечной стенки.

Нельзя не учитывать также, что анизакидоз - это заболевание с выраженным аллергическим компонентом, поскольку в зараженной анизакидами рыбной продукции сохраняются соматические белки и продукты метаболизма, которые могут оказывать токсическое и аллергизирующее воздействие на организм вплоть до развития ревматоидного синдрома.

Цель настоящего исследования заключалась в определении зараженности рыбной продукции анизакидами на основании иммунореакции.

Материалы и методы. Материалом для приготовления антигена служили личинки A.simplex 3-й стадии, полученные из тушек инвазированной анизакидами рыбы. Извлеченных личинок тщательно многократно промывали водой с антибиотиками и противогрибковым препаратом из расчета 2000 ЕД/мл пенициллина, 1 мг/мл стрептомицина и 2500 ЕД/мл нистатина. После обработки гельминтный материал промывали стерильным 0,9%-ным раствором хлорида натрия и готовили из него белков-антигенный экстракт по методу Бережно В.К. с соавт. [1].

В качестве иммунной реакции использовали реакцию иммунодиффузии в агаровом геле (РИД). Источником антител в РИД служила гипериммунная кроличья сыворотка, которую предварительно получали иммунизацией кроликов [1]. На весь цикл иммунизации каждый кролик получил по 10 мг белка-антигена в комплексе с адъювантом Фрейнда. Антигеном в РИД служила жидкость, полученная при размораживании зараженной и незараженной (контроль) анизакидами рыбной продукции. Для исследования использовали рыбную продукцию из путассу.

Результаты и обсуждение. Оценка активности полученных гипериммунных сывороток показала, что, несмотря на одинаковое количество введенного каждому кролику белка-антигена из личинок. A.simplex, иммунный ответ у них отличался. Отличие было как по количеству проявившихся в РИД преципитирующих комплексов антиген-антитело, так и по четкости проявления полос преципитации, соответствующих этим комплексам. Эти данные, безусловно, характеризуют индивидуальную реактивность кроликов. Тем не менее, используя в дальнейшем референс полученных гипериммунных сывороток, мы провели оценку зараженности анизакидами рыбной продукции из путассу РИД в варианте "тройка", используя в качестве антигена жидкость, полученную при размораживании этой продукции.

В варианте "тройка" в одну из лунок вносили гипериммунную кроличью сыворотку (референс), во вторую - жидкость, полученную при размораживании зараженной анизакидами рыбной продукции из путассу, а в третью - аналогичную жидкость из незараженной рыбы (контроль).

В результате между гипериммунной сывороткой и жидкостью из зараженной рыбы получена четкая полоса преципитации, что является подтверждением присутствия в анализируемой рыбной продукции антигенов личинок A.simplex 3-й стадии. В то же время реакция между этой же антисывороткой и жидкостью, полученной из незаряженной анизакидами рыбной продукции из путассу, показала отрицательный результат, т.е. отсутствие полосы преципитации. Таким образом, полученный результат является убедительным доказательством того, что соматические и экскреторно-секреторные продукты личинок анизакид попадают и сохраняются в зараженной рыбной продукции. Продолжительное потребление такой продукции может вызывать патологические изменения в пищеварительном тракте, а также оказывать токсическое и аллергизирующее воздействие у сенсибилизированных пациентов (8, 9, 10). Полученные гипериммунные сыворотки к антигенам личинок анизакид в РИД показали отрицательный результат с антигеном из Toxocara canis, что является подтверждением специфичности реакции. В то же время есть данные об антигеном сходстве между A.simplex и другими аскаридатами [9].

Исходя из полученных данных, можно сделать заключение о возможности определения зараженности рыбной продукции анизакидами РИД, используя для этой цели гипериммунную кроличью антисыворотку к белково-антигенному экстракту из личинок A.simplex 3-й стадии в качестве источника антител и жидкость, полученную при размораживании рыбной продукции, в качестве антигена. Проявление между этими реагентами реакции полосы преципитации свидетельствует о присутствии в исследуемой продукции антигенов анизакид.

Литература: 1.Бережко В.К., Хайдаров К.А., Дахно И.С., Шкурка Е.П. //Матер, докл. научи, конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -2008,- вып. 9. - С. 69-73. 2.Беспрозванных В.В.//Мед. паразитология и паразит, болезни. - 2003. - № 3. - С. 21-24. З.Витомскова Е.А., Довгалев А.С.//Мед. паразит, и паразит, болезни. - 2001. - № 2. - С. 31-34. 4.Гаевская А.В. Анизакидные нематоды и заболевания, вызываемые ими у животных и человека. - Севастополь: ЭКОСИ - Гидрофизика. - 2005. - 223 с. 5.Добряков Е.Ю., Ермоленко А.В. //Мед. паразитол. и паразит, болезни. - 2008 - №4. - С. 11-14. б.Карманова И.В., Линова Г.П.//Мед. паразитол. и паразит, болезни - 2002. - №3. - С. 19-21. 7.Сапунов А.Я., Дубинина М.Е., Гугушвили Н.Н. и др.//Матер. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2010,- вып. 11. - С. 401-405. 8.Сивкова Т.Н., Бережко В.К. Кариопатическое и патоморфологическое действие продуктов метаболизма личинок анизакид - Монография - ФГБУО ВПО Пермская ГСХА. - 2011. -132 с. 9.1glesias R., I. Leiro, M.L. Navarrete et al.//Parasitilogy research. - 1996. - V. 82 (4). - P. 378-381. lO.Sakanari J.A., Loinaz H.M., Deardorff T.L. et al. //Am. J. Clin. Pathol. - 1988. - V. 90. - P. 107-113. 1 l.Sugimachi K., Inokuchi K., Ooiwa T. et al.//J. Am. Med. Assoc. - 1985. -V. 253. - P. 1012-1013.

Immunological method for assessing of fish product contamination by Anisakis simplex larvae. Berezhko V.K., Sivkova T.N., Uspensky A.V., Prokhorova T.S., Lazareva O.N. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants; D.N.Pryanishnikov Perm State Agricultural Academy.

Summary. One represents the results on the determination of fish product contamination by Anisakis simplex using reaction immunodiffusion in agar gel (RID). The method is based on the detection of 3 stage A. simplex larvae antigens in fish production. RID is carried out with rabbit hyperimmune antiserum.