Иммунохимический анализ соматического экстракта личинок Anisakis simplex Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Литература: 1. Бекиш О.-Я.Л.,Бекиш В.Я., Побяржин В.В. //Достижения медицинской науки Беларуси. - Витебск - 2006 - С.56-58. 2. Бекиш Мутагенное воздействие мигрирующих личинок аскарид на геном хозяина./ В.Я. //Мат.Конф. «Вирусные инфекции на пороге ХХ1 века; эпидемиология и профилактика». - СПб. - 1999. - С.276. 3. Горохов В.В. //Ветеринария. - 1999.-№5. - С.7-14. 4. Ильинских И.Н. Инфекционная кариопатология/ И.Н. Ильинских, В.В. Новицкий, Е.Н. Ильинских, Н.Н. Ильинских, С.Б. Ткаченко. Под ред. Н.Н.Ильинских. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2005.-168с.: ил. 5. Калинин Л.В. // Автореф. дисс. канд. мед. наук. - Витебск.-1995. - 19с. 6. Поздняковский В.М. и др. - Сибирское университетское издательство. -Новосибирск. - 2005. - 309с. 7. Hamada F.M.A., Abdel-Aziz, F. Badr, A. Moustafa, A. Rashad //Arab.J.Lab. - 1992. - vol. 18. - P.301-311. 8. Herrera L.A. P.Santiago, G. Rojas, P.M. Salazar, P. Tato, J.L. Molinari, D. Schiffmann, P. Ostrovsky //Mutat.res. - 1994. - Vol.305. - P.223-228. 9. Herrera L.A., T. Ramirez, U. Rodriguez et al. //Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg. - 2000. - Vol.94, N1. - P. 61 -65.

Karyopathic effects of Anisakis simplex larvae metabolites on somatic and sex cells of laboratory rats at peroral administration. Sivkova T.N. Perm State Agricultural Academy.

Summary. A. simplex larvae somatic and excretory-secretory metabolites showed a manifested karyopathic effects on both somatic and sex cells of rats. One revealed formation of giant multinuclear cells, nucleoli, disturbances of cell division polarity.

ИММУНОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СОМАТИЧЕСКОГО ЭКСТРАКТА ЛИЧИНОК ANISAKIS SIMPLEX

Сивкова Т.Н.

ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА»

Введение. В настоящее время значительная часть морской рыбы, использующейся для питания человека и кормления домашних животных, заражена личинками анизакид. Для профилактики заражения прибегают к глубокому замораживанию свежевыловленной рыбы, однако известно, что анизакиды способны вызывать также аллергический и иммунный ответ [1,3,4]. В то же время применение иммунологических методов диагностики анизакидоза осложняется отсутствием высокоспецифичного антигена и наличием перекрестных реакций с антигенами других гельминтов, в частности человеческой аскариды и токсокары [2].

370

Целью нашей работы было определение антигенной активности соматического экстракта из личинок анизакид, содержащихся в свежемороженой рыбе, и характеристика данного антигена.

Материалы и методы. Материалом служили личинки третьей стадии нематоды Anisakis simplex, выделенные из свежемороженой путассу (Micromesistius poutassou). Выделенных личинок обрабатывали растворами антибиотиков, гомогенизировали методом многократного замораживания и оттаивания. Экстрагирование проводили стерильным забуференным физиологическим раствором (рН 7,2) в течение 18 часов (АГ1), затем экстракт удаляли и процедуру повторяли еще раз в течение 24 часов (АГ2).

Для определения наличия общих антигенов также готовили экстракт из половозрелых Toxocara canis, выделенных от спонтанно инвазированных собак. Экстрагирование осуществляли однократно в течение 24 часов.

Полученные продукты очищали центрифугированием и определяли в них количество белка биуретовой пробой с помощью коммерческого набора «Ольвекс-диагностикум» на спектрофотометре СФ-26, ЛОМО при длине волны 280 нм.

Для получения гипериммунной сыворотки иммунизировали трех кроликов породы серый великан по методу В.К.Бережко. За весь цикл иммунизации каждый кролик получил не менее 10,0 мг белка-антигена.

Реакцию иммунодиффузии проводили в 1,2%-ном агаровом геле (Difco) на физиологическом растворе. Использовали штамп «семерка», где в центральную лунку вносили антиген, а по периферии - сыворотку в нативном состоянии, а также в разведениях 1/1, 1/2, 1/4 и 1/8.

Результаты. В результате проведения реакции иммунодиффузии мы установили, что полученные нами экстракты личинок анизакид являются антигенами, способными вызывать преципитацию с гипериммунными сыворотками. Все три пробы сыворотки кроликов оказались достаточно активными в нативном состоянии и в разведении 1/1, кроме того, сыворотка крови одного животного реагировала с антигенами в разведении 1/8.

В белковом спектре экстракта АГ1 выявляли в агаровом геле три преципитирующих комплекса, из которых средний давал четкую полосу, а крайние два проявлялись в виде слабых полос.

При анализе белковых компонентов в экстракте АГ2 установили наличие 1-2 полос преципитации, из которых одна была четкой и идентичной средней полосе АГ1.

Постановка реакции с использованием сывороток кроликов, иммунизированных антигенами анизакид, и экстракта, приготовленного из токсокар, дала отрицательный результат.

Вывод. Таким образом, проведенный иммунохимический анализ белкового экстракта из личинок анизакид позволил выявить наличие в его составе не менее трех антигенных компонентов, способных вызывать иммунный ответ у кроликов. Также мы можем предположить, что в составе соматического антигена A.simplex имеется как минимум один компонент,

371

имеющий диагностическое значение в дифференциальной диагностике анизакидоза и токсокароза.

Литература: 1. Цыбина Т.Н. //Медицинская паразитология и

паразитарные болезни. - 2001. - №3. - С.52-53. 2. Iglesias R., J. Leiro, I. Navarrete, M.L. Sanmartin, M.T. Santamarina, F.M. Ubeira // Prasitology research. - 1996. - V.82 (4). - P.378-381. 3. Oshima T. //Prog.Med.Parasitol. Jpn. - 1972. -Vol.4. - P.305-393. 4. Sakanari J.A., H.M. Loinaz, T.L. Deardorff, R.B. Raybourne, J.H. McKerrow, J.G. Frierson //Am.J.Clin.Pathol. - 1988. - Vol.90. - P.107-113.

Immunochemical analysis of somatic extract of Anisakis simplex larvae.

Sivkova T.N. Perm State Agricultural Academy.

Summary. As a result of immunochemical analysis of protein extract of A. simplex larvae one revealed the presence of 3 antigen components capable to induce immune response in rabbits. Possibly one component of somatic A. simplex antigen had a diagnostic value at differential diagnosis of A. simplex and Toxocara canis infections.

ИЗУЧЕНИЕ ТОКСИЧНОСТИ МИКРОФЕНА ДЛЯ РЫБ

Скачков Д.П.

ВНИИ гельминтологии имени К.И.Скрябина

Изучение острой и хронической токсичности микрофена для рыб провели по общепринятым методикам в ЗАО «Шатурские озера» Московской области, в двух сериях опытов на годовиках карпа со средней навеской 111 грамм (1-4). Опыты провели в делевых садках размером 1,5 х 2,5 х 4 м. В каждом садке на глубине 1 м были установлены делевые кормушки диаметром 70 см.

Определение острой токсичности микрофена для рыб провели в трех делевых садках, установленных на 4-ой понтонной линии. С этой целью из садка № 5 с 5-ой понтонной линии провели отлов 108 годовиков карпа общей массой 12 кг. Рыбу разделили на три равноценные группы по 36 годовиков карпа в каждой. Масса каждой группы рыб составила 4 кг. Рыбам первой подопытной группы однократно задали гранулированный корм с микрофеном в соотношении 1:1 (50:50) в дозе 5% от массы рыбы в садке. Доза по ДВ составила 1250 мг/кг. Рыбам второй подопытной группы однократно задали гранулированный корм с микрофеном в соотношении 1:2 в дозе 5% от массы рыбы в садке. Доза по ДВ составила 625 мг/кг. В контрольном садке на протяжении всего опыта проводили кормление рыбы гранулированным комбикормом рецепта К-111, не содержащим препарата, по технологии принятой в хозяйстве. На 6-ой день после применения препаратов провели

372