CC BY
28
УДК 616.521-02(048.8)
Иммуногистохимические исследования пораженной кожи больных микробной и
истинной экземой
Кираван Загер
Национальный медицинский университет им. А. А. Богомольца, Киев
1МУНОГ1СТОХ1М1ЧН1 ДОСЛ1ДЖЕННЯ УРАЖЕНО1 ШК1РИ ХВОРИХ НА М1КРОБНУ ТА СПРАВЖНЮ ЕКЗЕМУ Караван Загер
Методом iмунопстохiмN дослiджено 15 бiопсií хворих на мiкробну та справжню екзему. Зроблено висновок про те, що розвиток окремо''' форми екземи може бути пов'язаний з дефектнютю самого вогнища запален-ня, яке неспроможне залучати до запального проце-су окремi популяцп Т^мфоци^в (С04+ ^мфо-ци^в - для справжньо''' та С08+ -лiмфоцитiв - для мiкробноí екземи). У хворих на екзему також вщзна-чено зниження реактогенних властивостей частини Т^мфоци^в, як циркулюють у кровi та проходять транзитом вогнище запалення: неспроможнють 'х адекватно реагувати на сигнал клiтинних медiаторiв вогнища запалення та залишати судинне русло, за межами якого брати участь у формуванн якюно''' дieвоí запально' реакцií.
IMMUNOHISTOCHEMICAL RESEARCHES OF AFFECTED SKIN OF PATIENTS WITH MICROBIC AND TRUE ECZEMA Kiravan Zager
15 biopsies of patients with microbic and true eczema have been investigated using the immunohistochemical method. The conclusion has been drawn that evolution of certain form of eczema can be connected to deficiency of the locus of the inflammation being unable to engage certain population of T-lymphocytes (CD4+ -lymphocytes for true eczema and CD8+ - for microbic eczema) in the inflammatory process. The reactogenic properties deterioration of part of T-lymphocytes circulating in blood and going as transit ones through the locus of inflammation (namely, their disability to respond adequately to a signal of cellular mediators of the locus of inflammation, to leave a vascular bed and beyond the bounds of which to participate in formation of qualitatively effective inflammatory reaction) also has been marked at the eczema patients.
Учитывая результаты проведенных исследо ваний иммунологического аспекта патогенеза экземы, многие исследователи склоняются к мнению, что недостаточность иммунной системы или её расстройства являются центральным звеном патогенеза этого заболевания. Предполагается, что через иммунитет свое воздействие на развитие экземы оказывают эндогенные факторы (расстройства эндокринной и нервной систем, генетические дефекты и т.д.) [1].
Современные исследования подводят нас к представлению, что кожа с её уникальными иммунологическими свойствами, проявляющимися в способности к локальной переработке как внутреннего, так и внешнего антигенного сигнала, является центральным пунктом, в котором дисбаланс или недостаточность местной иммунной системы проявят себя развитием патологических процессов с характерными клиническими проявлениями [2]; при этом доля эндогенного
и экзогенного факторов в последующем развитии процесса может быть различной [3].
Изучение иммунитета при экземе путем выяснения степени вовлеченности в иммунный процесс клеток крови не является достаточно полным информативным показателем, поскольку основной иммунный процесс осуществляется непосредственно в коже, и гематологические показатели в этом случае отражают только лишь общий настрой иммунной системы организма [4].
Большую важность для понимания патогенеза экзематозного процесса должна иметь оценка иммунного состояния самого поражённого органа - кожи, результаты которые интересно сопоставить с аналогичными показателями в периферической крови. Такой подход к изучению патогенеза экземы позволит не только прояснить возможные условия возникновения вариантов её клинических форм, но также и определить направления корригирующей терапии нарушенного
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология 1-4 (10)' 2007
звена местной иммунной системы.
Цель исследования - изучение иммуно-фенотипического состава клеток воспалительного инфильтрата больных микробной и истинной экземой.
Материалы и методы. Методом иммуно-гистохимии исследовано 15 биопсий больных микробной и истинной экземой. Биоптический материал брался после письменного согласия пациентов. Контролем служили биоптаты кожи, полученные при косметических операциях. В условиях криостата получали последовательные серийные срезы толщиной до 10 мк. В исследовании применен стандартный метод био-тинстрептавидин-иммунопероксидазного окрашивания (81хер1 ЛБСошр1ех/НКР, производство БЛКО) с использованием хромогеного субстрата - 3-амино-9-этилкарбазол. Фоновое окрашивание проводили гематоксилином. В исследовании использованы моноклональные антитела СБ3+, СБ4+, СБ8+, СВ1а+ и СШ2+ (БЛКО).
В последовательных серийных срезах определяли количественные соотношения реактоген-ных клеток. В эпидермальном пласте (в пределах 3 мм) проводили подсчет числа эпителиальных клеток, клеток с характерной экспрессией маркерного антигена. Об изменениях в количественном распределении реактогенных клеток судили по изменениям в процентных соотношениях.
Полученные результаты и их обсуждение. В дермальном компоненте пораженной кожи больных микробной экземой патогистологичес-кие изменения в большинстве случаев проявляли себя:
- сглаженностью сосочков;
- наличием в верхних отделах дермы отёка;
- расширением сосудов и сосудистых щелей, подчеркнутых образованием интенсивных околососудистых мононуклеарных клеточных инфильтратов.
В эпидермисе эпителиальный пласт был неравномерным по толщине, что связано с очаговым проявлением спонгиоза, в местах которого наблюдалась инфильтрация и накопление моно-нуклеарных клеток. СВ3+ -положительные клетки (Г-лимфоциты) составляли основную часть (86,2 ± 2,5 %) клеток воспалительных инфильтратов дермы, которые преимущественно распределялись вокруг сосудов.
Разрозненные С^3+-лимфоциты наблюдались в сосочковом и сетчатом слое дермы, имея тенденцию локализоваться преимущественно по границе с эпидермисом. В эпидермисе СВ3+-лимфоциты наблюдались редко, за исключением очагов спонгиоза, где они проявляли себя тенденцией к внедрению в разрыхленный эпители-
альный пласт. С^4+-лимфоциты составляли 68,2 ± 2,1 % всего клеточного состава воспалительных инфильтратов. В виде единичных клеток С^4+-лимфоциты наблюдались в ретикулярном слое дермы, а также по границе с эпидермисом. С^4+клетки имели тенденцию внедряться в базальный отдел эпителия особенно в местах выраженного спонгиоза. Весьма редко СБ4+-лимфоциты наблюдались в толще эпидермиса среди эпителиальных клеток.
С^8+-лимфоциты преобладающе локализовались в околососудистых инфильтратах, составляя 26,3 ± 2,4 % их клеточного состава. Как и С^4+-лимфоциты, С08+ клетки имели тенденцию мигрировать в субэпителиальный отдел и внедряться в эпителий в местах спонгиоза. С^8+-лимфоциты редко наблюдались в глубине эпителиального слоя. Индекс соотношения С^4+/С^8+ отмечен на уровне 2,6.
СО!а+-клетки составляли 18 ± 3,2 % всех клеток инфильтратов дермы. Вне инфильтратов СО!а+-клетки имели тенденцию накапливаться в субэпителиальном отделе, преобладающе - в участках, прилегающих к местам спонгиоза. Для этого типа СО!а+-клеток было характерным проявление реакции не по периферии, а непосредственно в цитоплазме, что подчеркивало и хорошо контурировало овальное ядро клетки. В этих клетках угадывались расходящиеся по межклеточным промежуткам в различных направлениях дендритические структуры.
93,5 ± 4,6 % всех клеток дермы больных истинной экземой экспрессировали НЬЛ-БЯ антиген на клеточной поверхности или в цитоплазме. Интересно, что положительной активностью экспрессии НЬЛ-ОЯ+ характеризовались как клетки лимфоидного ряда, так и эндотелиальные клетки, что подчеркивало сосудистую сеть дер-мального отдела. Разбросанные в отечной рыхлой строме отдельные НЬЛ-ОЯ+-клетки имели неправильную конфигурацию, обладали дендритическими структурами и выделялись своим относительно большим ядром.
В эпидермисе НЬЛ-ВЯ+-клетки составляли 17,4 ± 2,4 % клеток всего эпителиального пласта. Распределялись эти клетки по всему эпителиальному пласту, имея тенденцию к преобладанию в базальных отделах. С022+-клетки (5-лимфоциты) встречались в единичном числе как в глубокой дерме, так и в ретикулярном ее отделе, составляя столь малую долю в исследуемых воспалительных инфильтратах, что не можгу быть приняты в расчет.
В дермальной части пораженной кожи больных микробной экземой отмечалось формирование воспалительных инфильтратов, распределяющихся вокруг сосудов и сосудистых щелей. В эпидермисе наблюдались:
1-4 (10)' 2007
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
- очаги спонгиоза;
- расширение межклеточных щелей;
- образование пузырьковых элементов.
СВ3+-лимфоциты составляли основную часть
воспалительных инфильтратов (83,8 ± 1,7 %), которые преобладающе распределялись вокруг сосудов. Очаговые скопления также наблюдались в верхних отделах дермы, в местах выраженного спонгиоза, в зону которого СВ3+-клет-ки имели тенденцию внедряться. В эпидермисе СВ3+-клетки встречались, в основном, в виде единичных, встроенных между кератиноцитами клеток; однако в местах спонгиоза и пузырьковых элементов СВ3+-клетки наблюдались небольшими группами.
СВ4+-лимфоциты составляли 64,2 ± 2,5 % клеток воспалительных инфильтратов. В виде единичных клеток СВ4+-лимфоциты распределялись в верхнем отделе дермы, преимущественно по границе с эпидермисом, встраиваясь между клетками базального отдела эпителиального пласта. Единичные клетки встречались в средних и верхних отделах эпидермиса. Инфильтрация клетками отмечена и в местах дистрофических изменений эпителия.
СВ8+-лимфоциты составляли довольно малую часть воспалительных инфильтратов -11,5 ± 1,3 %. СВ8+-клетки постоянно наблюдались в базальных отделах эпидермиса, однако не были отмечены в верхних его отделах даже в условиях спонгиоза или формирования пузырьковых элементов. Индекс соотношения СВ4+/СВ8+ лимфоцитов отмечен на уровне 5,6.
СВ/а+-клетки составили 9,6 ± 0,9 % клеток дермы. Клетки имели разнообразную конфигурацию, характеризовались большим ядром, ре-актогенной цитоплазмой. В рыхлой дерме, вне связи с сосудом клетки проявляли себя цитоп-лазматическими выростами, а вблизи сосудов имели округлую форму.
В эпидермисе СВ/а+-клетки составляли 22,7 ± 4,8 %. 77 ± 4,1 % клеток дермы экспрес-сировали НЬЛ-ВЯ-антиген. НЬЛ-ВЯ+-клетки имели различные морфологические свойства -отмечены:
- клетки лимфоцитарного типа, представленные ядром и скудным ободком цитоплазмы;
- клетки с признаками макрофагов;
- клетки, образующие выстилку сосудов -эндотелиальные клетки.
В эпидермисе больных микробной экземой НЬЛ-ВЯ+-клетки составляли 4,4 ± 3,4 % и обладали четкими дендритическими структурами, характерными для клеток Лангерганса.
Распределение клеток в эпидермисе было неравномерным. В местах спонгиоза в НЬЛ-ВЯ+-клетках наблюдалось упрощение клеточных структур: клетки имели укороченные отростки,
приобретали более округлую, с упрощенной поверхностью форму. Вокруг отдельных НЬЛ-ВЯ+-клеток группировались клетки с признаками ке-ратиноцитов, также проявляющих себя НЬЛ-ВЯ-положительной реакцией. 5-лимфоциты (СВ22+) наблюдались в единичном числе как в верхнем, так и в нижнем отделе дермы.
Если сопоставить в дерме количество СВ/а+-клеток при микробной и истинной экземе, то обращает на себя внимание меньшее содержание числа таких СВ/а+-клеток при микробной экземе. Наоборот, высокий уровень содержания в дермальной части кожи Са/а-положительных клеток может указывать на интенсивный транзит клеток Лангерганса из эпидермиса в регионарный лимфатический узел.
Возможно и другое объяснение: в условиях микробной и истинной экземы снижение экспрессии клетками Са/а-антигена может отражать высокую степень напряженности процесса переработки КЛ антигена, что сопровождается снижением экспрессии Са/а-комплекса. Действительно, исследования [5] показывают, что трансформация клеток Лангерганса из антигенпроцес-сирующей формы в антигенпредставляющую форму сопровождается снижением экспрессии клеткой Са/а-антигена. В таком случае меньший уровень экспрессии клетками Са/а-комплекса в дермальной части при микробной экземе (9,6 %) отражает качественно более быстрый процесс этой трансформации. Однако отмеченные изменения в свойствах экспрессии СВ1а-антигена нуждаются в дальнейшем изучении.
В дермальной части кожи обращает на себя внимание характер изменений в экспрессии комплекса НЬЛ-ВЯ-клетками воспалительных инфильтратов.
Сопоставляя данные по различным формам экземы, необходимо отметить, что число клеток, экспрессирующих НЬЛ-ВЯ, при микробной экземе было выше, чем при истинной экземе.
Отмеченные изменения в экспрессии СВ/а и НЬЛ-ВЯ указывают на напряженность воспалительного процесса и отражают особенности каждой из форм экземы.
Анализ изменений в лимфоцитарном звене иммунитета при различных формах экземы показывает, что каждая из форм характеризуется своим индивидуальным иммунофенотипическим профилем.
Прежде всего, необходимо отметить, что 5-лимфоциты практически в экзематозном процессе участия не принимали. Их содержание в воспалительных инфильтратах дермы было настолько малым, что этот тип лимфоцитов не мог быть принят в расчет. Это наблюдение подтверждает данные исследований, в которых также указывается на преобладающее участие в фор-
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология 1-4 (10)' 2007
мировании воспалительного очага при контактном дерматите только Т-лимфоцитов [6].
В данном исследовании обращает на себя внимание то, что в формировании воспалительного процесса преобладало накопление CD3+-лимфоцитов. В воспалительных инфильтратах дермы CD3+-лимфоциты были основным клеточным компонентом, и их доля в формировании инфильтратов была приблизительно одинакова во всех формах экземы. Результаты данного исследования совпадают с данными исследований [7], которыми установлено, что в условиях контактного дерматита 80 % клеточного состава инфильтратов дермы образованы за счет CD3+-лимфоцитов; близки по значению данные [8], согласно которым 97 % клеток, выделенных из экзематозных воспалительных инфильтратов, составляли CD3+-лимфоциты.
Анализ характера изменений в соотношениях субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+) показывает, что именно здесь наиболее четко проявляют себя различия между формами экземы.
При сопоставлениях, проведенных по группам больных микробной экземы и истинной экземы, выяснилось, что микробная экзема имеет свои индивидуальные особенности, четко проявляющиеся при сравнении процентных соотношений по CD4+- и CD8+-клеткам. Из анализа следует, что развитие процесса по типу микробной экземы связано с уменьшением численности CD8+-лимфоцитов, а становление и развитие истинной экземы - с уменьшением численности CD4+-лимфоцитов.
Указанная специфичность каждой из форм экземы может быть связана с двумя выводами.
1. Можно предположить, что имеет место ЛИТЕРАТУРА
1. Segre J.A. Epidermal barrier formation and recovery in skin disorders // J. Clin. Invest. - 2006. - Vol. 116. - P. 1150-1158.
2. Robert C., Kupper T.S. Inflammatory skin diseases, Т cells, and immune surveillance // N. Engl. J. Med. - 1999. - Vol. 341. - Р. 1817-1828.
3. Romagnani S. The role of lymphocytes in allergic disease // J. Allergy Clin. Immunol. - 2000. -Vol. 105. - P. 399-408.
4. Akdis M, Verhagen J, Taylor A, Karamloo F, Karagiannidis C, Crameri R et al. Immune responses in healthy and allergic individuals are characterized by a fine balance between allergen-specifk Т regulatory 1 and Т helper 2 cells // J. Exp. Med. - 2004. - Vol. 199. - Р. 1567-1575.
снижение реактогенных свойств определенной части Т- лимфоцитов, циркулирующих в крови и проходящих транзитом очаг воспаления - их неспособность адекватно реагировать на сигнал клеточных медиаторов очага воспаления и покидать сосудистое русло, за пределами которого участвовать в формировании качественно действенной воспалительной реакции. Указанная дефектность определенной субпопуляции Т-лим-фоцитов должна проявить себя в нарушении качества воспалительного процесса, который приобретает специфические черты микробной экземы (дефект CD 8+-лимфоцитов) или же истинной экземы (дефектность CD4+-лимфоцитов). В этом плане интересны исследования (U. Remold et al, 1991) показавшие, что в условиях атонического дерматита выделенные из крови CD8+-лимфоциты в условиях in vitro были менее чувствительны к действию интерлейкина-2 (IL-2), что проявлялось в снижении пролифера-тивной активности этих клеток. Высказывается предположение о том, что такая дефектность CD8+-лимфоцитов может быть связана с изменением свойств рецепторного поля Т-8 клеток или с изменением числа рецепторов.
2. Развитие определенной формы экземы может быть связано с дефектностью самого очага воспаления, неспособного привлекать к участию в воспалительном процессе определенной популяции Т-лимфоцитов (CD4+-лимфоцитов -для истинной экземы и CD8+ лимфоцитов - для микробной).
В плане высказанных предположений представляет интерес по каждой из форм экземы сопоставить изменения в соотношениях Т-лим-фоцитарной популяции, наблюдаемые в коже, с изменениями в соотношениях Т-лимфоцитов в крови.
5. Banchereau J., Steinman R.M. Dendritic cells and the control of immunity // Nature. -1998. -Vol. 392. - P. 245-250.
6. Traurmann A., Akdis M., Kleemann D. et al. Т cell-mediated Fas-induced keratinocyte apoptosis plays a key pathogenetic role in eczematous dermatitis // J. Clin. Invest. - 2000. - Vol. 106. -P 25-35.
7. Kupper T.S., Fuhlbrigge R.C. Immune surveillance in the skin: mechanisms and clinical consequences // Nat. Rev. Immunol. - 2004. -Vol. 4. - P. 211-222.
8. Robinson D.S., Larche M., Durham S.R. T-reg cells and allergic disease // J. Clin. Invest. -2004. -Vol. 14. - P. 1389-1397.
1-4 (10)' 2007
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
1З1
