CC BY
23
УДК 616.521-02(048.8)
Иммуногистохимические исследования пораженной кожи больных микробной и
истинной экземой
Кираван Загер
1МУНОГ1СТОХ1М1ЧН1 ДОСЛ1ДЖЕННЯ УРА-ЖЕНО1' ШК1РИ ХВОРИХ НА М1КРОБНУ ТА СПРАВЖНЮ ЕКЗЕМУ Кираван Загер
Вивчався iмунофенотипiчний склад штин запального шфть-трату хворих на MiKpo6Hy та справжню екзему. При порiвняннi результатiв встановлено, що кожна з форм характеризуемся сво'м iндивiдуальним iмунофенотипiчним профiлем. Зроблено висновок про те, що розвиток процесу за типом мiкробноï ек-земи пов'язаний iз зменшенням чисельностi CD8+ лiмфоцитiв, а становлення i розвиток справжньо''' екземи - iз зменшенням чисельност CD4+ лiмфоцитiв.
IMMUNOHISTOCHEMICAL RESEARCHES OF THE AFFECTED SKIN OF PATIENTS WITH MICROBIAL AND TRUE ECZEMA Kiravan Zager
The immune-and-phenotypic structure of inflammatory infiltrate cells in patients with microbial and true eczema has been studied. The comparison of the results has ascertained that each form is characterized by its individual immune-and-phenotypic type. A conclusion has been done that development of the process in accordance with the type of microbial eczema is connected with diminishing the quantity of CD8+ lymphocytes, and forming and development of true eczema - with diminishing the quantity of CD4+ lymphocytes.
Учитывая результаты проведенных исследований иммунологического аспекта патогенеза экземы, многие исследователи склоняются к мнению, что недостаточность иммунной системы или её расстройства являются центральным звеном патогенеза этого заболевания. Предполагается, что иммунитет своё воздействие на развитие экземы оказывает как эндогенные факторы (расстройства эндокринной и нервной систем, генетические дефекты и т.д.) [1].
Современные исследования подводят нас к представлению, что кожа с её уникальными иммунологическими свойствами, проявляющимися в способности к локальной переработке как внутреннего, так и внешнего антигенного сигнала, является центральным пунктом, в котором дисбаланс или недостаточность местной иммунной системы проявят себя развитием патологических процессов с характерными клиническими проявлениями [2]; при этом доля эндогенного и экзогенного фактора в последующем развитии процесса может быть различной [3]. Изучение иммунитета при экземе путем выяснения степени вовлеченности в иммунный процесс клеток крови не является достаточно полным информативным показателем, поскольку основной иммунный процесс осуществляется непосредственно в коже, и гематологические показатели в этом случае отражают лишь общий настрой иммунной системы организма [4].
Большую важность для понимания патогенеза экзематозного процесса должна иметь оценка иммунного состояния самого поражённого органа - кожи, которые интересно сопоставить с аналогичными показателями в периферической крови. Такой подход к изучению патогенеза экземы позволит не только прояснить возможные условия возникновения вариантов её клинических форм, но позволит также определить направления корригирующей терапии нарушенного звена местной иммунной системы.
Цель исследования - изучение иммунофе-нотипического состава клеток воспалительного инфильтрата больных микробной и истинной экземой.
Материалы и методы. Методом иммуно-гистохимии исследовано 15 биопсий больных микробной и истинной экземой. Биоптический материал брался после письменного согласия пациентов. Контролем служили биоптаты кожи, полученные при косметических операциях. В условиях криостата получали последовательные серийные срезы толщиной до 10 мкм. В исследовании применен стандартный метод биотин-стрептавидин иммунопероксидазного окрашивания (81хер1 АВСотр1ех/НКР, производство БАКО) с использованием хромогенного субстрата - 3-амино-9-этилкарбазол. Фоновое окрашивание проводили гематоксилином. В
1-2 (11)' 2008
исследовании использованы моноклональные антитела СВ3+, СВ4+, СВ8+, СВ1а+ и СВ22+ (БАКО). В последовательных серийных срезах определяли количественные соотношения ре-актогенных клеток. В эпидермальном пласте (в пределах 3 мм) проводили подсчет числа эпителиальных клеток, клеток с характерной экспрессией маркерного антигена. Об изменениях в количественном распределении реактогенных клеток судили по изменениям в процентных соотношениях.
Полученные результаты и их обсуждение. В дермальном компоненте пораженной кожи больных микробной экземой патогистологи-ческие изменения в большинстве случаев проявляли себя сглаженностью сосочков, наличием в верхних отделах дермы отека, расширением сосудов и сосудистых щелей, подчеркнутых образованием интенсивных околососудистых мононуклеарных клеточных инфильтратов. В эпидермисе эпителиальный пласт был неравномерным по толщине, что связано с очаговым проявлением спонгиоза, в местах которого наблюдалась инфильтрация и накопление моно-нуклеарных клеток.
СВ3+ положительные клетки (Г-лимфоциты) составляли основную часть (86,2 ± 2,5 %) клеток воспалительных инфильтратов дермы, которые преимущественно распределялись вокруг сосудов. Разрозненные СВ3+ Г-клетки наблюдались в сосочковом и сетчатом слое дермы, имея тенденцию локализоваться преимущественно по границе с эпидермисом. В эпидермисе СВ3+ Г-лимфоциты наблюдались редко, за исключением очагов спонгиоза, где они проявляли себя тенденцией к внедрению в разрыхленный эпителиальный пласт.
СВ4+ Г-лимфоциты составляли 68,2 ± 2,1 % всего клеточного состава воспалительных инфильтратов. В виде единичных клеток СВ4+ Г-лимфоциты наблюдались в ретикулярном слое дермы, а также по границе с эпидермисом. СВ4+ клетки имели тенденцию внедряться в базальный отдел эпителия, особенно в местах выраженного спонгиоза. Весьма редко СВ4+ Г-лимфоциты наблюдались в толще эпидермиса среди эпителиальных клеток.
СВ8+ Г-лимфоциты преобладающе локализовались в околососудистых инфильтратах, составляя 26,3 ± 2,4 % их клеточного состава. Как и СВ4+ Г-лимфоциты, СВ8+ клетки имели тенденцию мигрировать в субэпителиальный отдел и внедряться в эпителий в местах спон-гиоза. СВ8+ Г-лимфоциты редко наблюдались в глубине эпителиального слоя. Индекс соотношения СВ4+/СВ8+ отмечен на уровне 2,6.
СВ1а+ клетки составляли 18 ± 3,2 % всех клеток инфильтратов дермы. Вне инфильтратов
1-2 (11)' 2008
СВ1 а+ клетки имели тенденцию накапливаться в субэпителиальном отделе, преобладающе в участках, прилегающих к местам спонгиоза. Для этого типа СВ1а+ клеток было характерным проявление реакции не по периферии, а непосредственно в цитоплазме, что подчеркивало и хорошо контурировало овальное ядро клетки. В этих клетках угадывались расходящиеся по межклеточным промежуткам в различных направлениях дендритические структуры.
93,5 ± 4,6 % всех клеток дермы больных истинной экземой экспрессировали НЬЛ-ВЯ антиген на клеточной поверхности или в цитоплазме. Интересно, что положительной активностью экспрессии НЬЛ-ВЯ+ характеризовались как клетки лимфоидного ряда, так и эндоте-лиальные клетки, что подчеркивало сосудистую сеть дермального отдела. Разбросанные в отечной рыхлой строме отдельные НЬЛ-ВЯ+ клетки имели неправильную конфигурацию, обладали дендритическими структурами и выделялись своим относительно большим ядром. В эпидермисе НЬЛ-ВЯ+ клетки составляли 17,4 ± 2,4 % клеток всего эпителиального пласта. Распределялись эти клетки по всему эпителиальному пласту, имея тенденцию к преобладанию в базальных отделах.
СВ22+ клетки (В-лимфоциты) встречались в единичном числе как в глубокой дерме, так и в ретикулярном ее отделе, составляя столь малую долю в исследуемых воспалительных инфильтратах, которая не может быть принята в расчет.
В дермальной части пораженной кожи больных микробной экземой отмечалось формирование воспалительных инфильтратов, распределяющихся вокруг сосудов и сосудистых щелей. В эпидермисе наблюдались очаги спонгиоза, расширение межклеточных щелей, образование пузырьковых элементов.
СВ3+ Г-лимфоциты составляли основную часть воспалительных инфильтратов (83,8 ± 1,7 %), которые преобладающе распределялись вокруг сосудов. Очаговые скопления также наблюдались в верхних отделах дермы, в местах выраженного спонгиоза, в зону которого СВ3+ клетки имели тенденцию внедряться. В эпидермисе СВ3+ клетки встречались в основном в виде единичных, встроенных между кератиноцитами клеток; однако в местах спон-гиоза и пузырьковых элементов СВ3+ клетки наблюдались небольшими группами.
СВ4+ Г-лимфоциты составляли 64,2 ± 2,5 % клеток воспалительных инфильтратов. В виде единичных клеток СВ4+ лимфоциты распределялись в верхнем отделе дермы, преимущественно по границе с эпидермисом, встраиваясь между клетками базального отдела эпители-
ального пласта. Единичные клетки встречались в средних и верхних отделах эпидермиса. Инфильтрация клетками отмечена и в местах дистрофических изменений эпителия.
С08+ Г-лимфоциты составляли довольно малую часть воспалительных инфильтратов -1,5 ± 1,3 %. С08+ клетки постоянно наблюдались в базальных отделах эпидермиса, однако не были отмечены в верхних его отделах даже в условиях спонгиоза или формирования пузырьковых элементов. Индекс соотношения С^4+/С^8+ лимфоцитов отмечен на уровне 5,6.
СБ1а+ клетки составили 9,6 ± 0,9 % клеток дермы. Клетки имели разнообразную конфигурацию, характеризовались большим ядром, ре-актогенной цитоплазмой. В рыхлой дерме, вне связи с сосудом, клетки проявляли себя цитоп-лазматическими выростами, а вблизи сосудов имели округлую форму. В эпидермисе СБ1а+ клетки составляли 22,7 ± 4,8 %.
77 ± 4,1 % клеток дермы экспрессировали ИЬА-ВЯ антиген. ИЬА-ВЯ+ клетки имели различные морфологические свойства; отмечены:
- клетки лимфоцитарного типа, представленные ядром и скудным ободком цитоплазмы;
- клетки с признаками макрофагов;
- клетки, образующие выстилку сосудов - эн-дотелиальные клетки.
В эпидермисе больных микробной экземой ИЬА-ВЯ+ клетки составляли 4,4 ± 3,4 % и обладали четкими дендритическими структурами, характерными для клеток Лангерганса. Распределение клеток в эпидермисе было неравномерным. В местах спонгиоза в ИЬА-ВЯ+ клетках наблюдалось упрощение клеточных структур: клетки имели укороченные отростки, приобретали более округлую, с упрощенной поверхностью форму. Вокруг отдельных ИЬА-ОЯ+ клеток группировались клетки с признаками кератиноцитов, также проявляющих себя ИЬА-ВЯ положительной реакцией. 5-лим-фоциты (СВ22+) наблюдались в единичном числе как в верхнем, так и в нижнем отделе дермы.
Если сопоставить в дерме количество СБ1а+ клеток при микробной и истинной экземе, то обращает на себя внимание меньшее содержание числа таких СБ1а+ клеток при микробной экземе. Наоборот, высокий уровень содержания в дермальной части кожи СБ1а+ положительных клеток может указывать на интенсивный транзит клеток Лангерганса из эпидермиса в регионарный лимфатический узел.
Возможно и другое объяснение: в условиях микробной и истинной экземы снижение экспрессии клетками С01а антигена может отражать высокую степень напряженности процес-
са переработки КЛ антигена, что сопровождается снижением экспрессии С01а комплекса. Действительно, исследования [5] показывают, что трансформация клеток Лангерганса из ан-тигенпроцессирующей формы в антигенпред-ставляющую форму сопровождается снижением экспрессии клеткой С01а антигена. В таком случае меньший уровень экспрессии клетками С01а комплекса в дермальной части при микробной экземе (9,6 %) отражает качественно более быстрый процесс этой трансформации. Однако отмеченные изменения в свойствах экспрессии С01а антигена нуждаются в дальнейшем изучении.
В дермальной части кожи обращает на себя внимание характер изменений в экспрессии комплекса ИЬА-БК клетками воспалительных инфильтратов. Сопоставляя данные по различным группам экземы, необходимо отметить, что число клеток, экспрессирующих ИЬА-БК, при микробной экземе было выше, чем при истинной экземе.
Отмеченные изменения в экспрессии С01а и ИЬА-БК указывают на напряженность воспалительного процесса и отражают особенности каждой из форм экземы.
Анализ изменений в лимфоцитарном звене иммунитета при различных формах экземы показывает, что каждая из форм характеризуется своим индивидуальным иммунофенотипиче-ским профилем.
Прежде всего, необходимо отметить, что 5-лимфоциты практически в экзематозном процессе участия не принимали. Их содержание в воспалительных инфильтратах дермы было настолько малым, что этот тип лимфоцитов не мог быть принят в расчет. Это наблюдение подтверждает данные исследований, в которых также указывается на преобладающее участие в формировании воспалительного очага при контактном дерматите только Г-лимфоцитов [6].
В данном исследовании обращает на себя внимание то, что в формировании воспалительного процесса преобладало накопление СБ3+ Г-лимфоцитов. В воспалительных инфильтратах дермы СВ3+ Г-лимфоциты были основным клеточным компонентом, и их доля в формировании инфильтратов была приблизительно одинакова во всех формах экземы. Результаты данного исследования совпадают с данными исследований [7], которыми установлено, что в условиях контактного дерматита 80 % клеточного состава инфильтратов дермы образованы за счет СВ3+ Г-лимфоцитов. Близки по значению данные [8], согласно которым 97 % клеток, выделенных из экзематозных воспалительных инфильтратов, составляли СВ3+ лимфоциты.
Анализ характера изменений в соотношени-
1-2 (11)' 2008
ях субпопуляций Г-лимфоцитов (CD4+ и CD8+) показывает, что именно здесь наиболее четко проявляют себя различия между формами экземы.
При сопоставлениях, проведенных по группам микробной экземы и истинной экземы, выяснилось, что микробная экзема имеет свои индивидуальные особенности, четко проявляющиеся при сравнении процентных соотношений по CD4+ и CD8+ клеткам. Из анализа следует, что развитие процесса по типу микробной экземы связано с уменьшением численности CD8+ лимфоцитов, а становление и развитие истинной экземы - с уменьшением численности CD4+ лимфоцитов.
Указанная специфичность каждой из форм экземы может быть связана с двумя выводами. 1. Можно предположить, что имеет место:
- снижение реактогенных свойств определенной части Г-лимфоцитов, циркулирующих в крови и проходящих транзитом очаг воспаления;
- их неспособность адекватно реагировать на сигнал клеточных медиаторов очага воспаления и покидать сосудистое русло, за пределами которого участвовать в формировании качественно действенной воспалительной реакции.
Указанная дефектность определенной субпопуляции Г-лимфоцитов должна проявить себя в
ЛИТЕРАТУРА
1. Segre J.A. Epidermal barrier formation and recovery in skin disorders // J. Clin. Invest. - 2006.
- Vol. 116. - P. 1150-1158.
2. Robert C., Kupper T.S. Inflammatory skin diseases, Т cells, and immune surveillance // N. Engl. J.Med. - 1999. - Vol. 341. - P. 1817-1828.
3. Romagnani S. The role of lymphocytes in allergic disease // J. Allergy Clin. Immunol. - 2000.
- Vol. 105. - P. 399-408.
4. Akdis M., Verhagen J., Taylor A., Karamloo F., Karagiannidis C., Crameri R. etal. Immune responses in healthy and allergic individuals are characterized by a fine balance between aller-genspecific Т regulatory 1 and Т helper 2 cells // J. Exp. Med. - 2004. - Vol. 199. - P. 15671575.
нарушении качества воспалительного процесса, который приобретает специфические черты микробной экземы (дефектность CD8+ лимфоцитов) или же истинной экземы (дефектность CD4+ лимфоцитов). В этом плане интересны исследования U. Reinold et al (1991), показавшие, что в условиях атонического дерматита выделенные из крови CD8+ лимфоциты в условиях in vitro были менее чувствительны к действию интерлейкина-2 (IL-2), что проявлялось в снижении пролиферативной активности этих клеток. Высказывается предположение о том, что такая дефектность CD8+ лимфоцитов может быть связана с изменением свойств рецеп-торного поля T-CD8+ клеток или с изменением числа рецепторов.
2. Развитие определенной формы экземы может быть связано с дефектностью самого очага воспаления, неспособного привлекать к участию в воспалительном процессе определенной популяции Г-лимфоцитов (CD4+ - для истинной экземы и CD8+ лимфоцитов - для микробной экземы).
В плане высказанных предположений представляет интерес по каждой из форм экземы сопоставить изменения в соотношениях Г-лим-фоцитарной популяции, наблюдаемые в коже, с изменениями в соотношениях Г-лимфоцитов в крови.
5. Banchereau J., Steinman R.M. Dendritic cells and the control of immunity // Nature. - 1998.
- Vol. 392. - P. 245-250.
6. Traurmann A., Akdis M., Kleemann D. et al. T cell-mediated Fas-induced keratinocyte apop-tosis plays a key pathogenetic role in eczematous dermatitis // J. Clin. Invest. - 2000. - Vol.106. -P. 25-35.
7. Kupper T.S., Fuhlbrigge R.C. Immune surveillance in the skin: mechanisms and clinical consequences // Nat. Rev. Immunol.- 2004. - Vol. 4.
- P. 211-222.
8. Robinson D.S., Larche M., Durham S.R. T-reg cells and allergic disease // J. Clin. Invest. -2004. - Vol. 114. - P. 1389-1397.
