CC BY
29
Кусая Н.В. и соавт. ХАРАКТЕРИСТИКА СООТНОШЕНИЯ МАРКЕРОВ АКТИВАЦИИ И АПОПТОЗА В КРОВИ...
УДК 616.5-002-02-092
Характеристика соотношения маркеров активации и апоптоза в крови пациентов с демодикозной инвазией
Кусая Н.В., Маркелова Е.В., Юцковский А.Д.
ГОУВПО ВГМУРосздрава, Владивосток
ХАРАКТЕРИСТИКА СП1ВВ1ДНОШЕННЯ МАРКЕР1В АКТИВАЦП ТА АПОПТОЗУ В КРОВ1 ПАЦ16НТ1В З ДЕМОДИКОЗНОЮ 1НВАЗ16Ю
Кусая Н.В., Маркелова О.В., Юцкiвськiй А.Д.
Дослщжено iмунологiчнi показники у 125 па^енив з демодикозом. Показано, що при розвитку демодикозно'1' iHBa3iï несприятливим вважаеться пiдвищення рiвня CD25+, HLA-DR+, CD95+ маркерiв, зниження стввщно-шень CD4+/CD95+, CD8+/CD95+, пiдвищення стввщ-ношень CD16+/CD95+, CD22+/CD95+, CD25+/CD95+. Зроблено висновок про те, що пщвищення маркерiв активацп i готовностi до апоптозу може свщчити про поширенiсть i тяжкють патологiчного процесу, асоцмо-ваного з демодикозною iнвазiею i переважним розви-тком iмунноï вiдповiдi за змшаним типом.
DESCRIPTION OF THE ACTIVATION AND APOPTOSIS MARKERS CORRELATION IN BLOOD OF PATIENTS WITH DEMODECTIC INVASION
Kusaya N.V., Markelova E.V., Yutskovskiy A.D.
The immunological indices have been explored at 125 patients with demodicosis. It is shown that under development of demodectic invasion the increase of the level of CD25+, HLA-DR+, CD95+ markers, decline of the correlations CD4+/CD95+, CD8+/CD95+, increase of the correlations CD16+/CD95+, CD22+/CD95+, CD25+/CD95+ are considered unfavorable. A conclusion is done that the activation markers' increase and readiness to apoptosis can be evidence of the dissemination and severity of the pathological process associated with demodectic invasion and prevailing development of immune answer of mixed type.
Заболевания, обусловленные паразитировани-ем клещей-железниц называют демодикозом. Данная патология характеризуется длительным рецидивирующим течением и преимущественной локализацией на коже лица, что является физической и психоэмоциональной проблемой для пациента [1, 2].
В общей структуре заболеваний кожи демодикоз составляет около 3 %, а в структуре акнеформных дерматозов - более 10 % [3]. Между тем вопрос о степени патогенности клещей всё еще неоднозначно расценивается исследователями. Так, одни полагают, что клещи рода Демодекс могут существовать на коже, не вызывая патологических изменений; вызывать развитие дерматоза; отягощать течение фоновых заболеваний кожи (акне, розацеа) [4]. Другие же расценивают клеща, как резидуаль-ного представителя микрофлоры кожи [5].
Вместе с тем у многих исследователей не вызывает сомнения, что клещ сенсибилизирует продуктами своей жизнедеятельности с развитием выраженной воспалительной реакции [6, 7].
Имеются данные, что процессы, происходящие в эпидермисе и дерме, находят отражение в иммунном ответе всего организма [2]. Иммунные механизмы в эпидермисе устанавливают равновесие между сенсибилизирующими и стабилизирующими сигналами, что ведет к эффективному иммунологическому представлению гаптенов, микробов и опухолевых антигенов [8].
Распознавание и элиминация антигена и развитие иммунных реакций по гуморальному или клеточному типу реагирования, как известно, составляют основную функцию лимфоцитов. Они достоверно отличаются по генетическим и функциональным характеристикам, дифференцируют их по поверхностным мембранным (дифферен-цировочным) маркерам - СО антигенам. Именно анализ количества клеток, определение вида СО маркеров, позволяют характеризовать тип, силу и характер иммунного ответа. Оценка субпопуляций лимфоцитов в сыворотке крови пациентов с демодикозом, свидетельствующей о снижении содержания абсолютного и относительного числа
содержания Г-лимфоцитов, посвящено немало исследований [9, 10]. Между тем, принимая во внимание факт, что клетками, стимулирующими антителообразование и цитотоксичность, являются Г-лимфоциты, несущие дифференцировоч-ные антигены С£>3+/С£>25+ и С£3+/#1А-Ш+, а изменение уровня этих показателей характеризует функциональное состояние Г-лимфоцитов, осуществляется контроль за реализацией иммунного ответа, мы сочли целесообразным оценить соотношение маркеров активации и апоптоза в сыворотке крови пациентов с демодикозом, что и стало целью исследования.
Материалы исследования. Обследовано 125 пациентов (93 женщины и 32 мужчины в возрасте от 16 до 54 лет) с различными формами воспалительных заболеваний кожи лица, наблюдавшихся на базе МУПВ «Врачебная косметоло-гическая лечебница». Длительность заболевания составляла от 2 месяцев до 10 лет и зависела от вида дерматоза:
- в группе с демодикозом она составила 5,26 ± 0,78 месяца;
- на фоне угревой болезни - 26,79 ± 3,84;
- на фоне розацеа - 35,83 ± 4,11 месяца.
В группы исследования включались пациенты с обострением заболевания сроком от 14 до 30 дней. Группу контроля составили 50 здоровых добровольцев (студенты медуниверситета, клиенты станции переливания крови). Все пациенты обследованы по стандартной методике с одновременным тщательным анализом анамнеза, клинических и лабораторных показателей. Диагноз устанавливали на основании жалоб, анамнеза заболевания, клинико-лабораторных данных, общеклинических и специальных методов исследования. У всех наблюдаемых пациентов диагноз подтвержден данными соскоба, с верификацией типовой принадлежности возбудителя, количественными показателями и оценкой степени активности демодекса. Пациенты консультированы смежными специалистами: гастроэнтерологом, гинекологом, аллергологом-иммунологом.
Исходя из состояния кожного покрова, основного ведущего клинического признака наблюдавшихся больных, мы разделили их на 4 группы:
- 1 группу составили 30 пациентов с проявлением преимущественно в центральной «Т» зоне (лоб, нос, медиальные поверхности щек и подбородок), не имеющие до этого патологических изменений на коже;
- 2 группу - 37 пациентов с вторичным де-модикозом на фоне акне, с преимущественной
локализацией процесса на коже лба, латеральной поверхности щек, шеи;
- 3 группу - 23 пациента с вторичным демо-дикозом на фоне розацеа;
- 4 группу составили 35 пациентов с легкой и среднетяжелой угревой болезнью, без признаков клещевой инвазии.
Результаты и обсуждения. При анализе дифференцировочного маркера СВ25+ клеток выявлено достоверное повышение как относительных, так и абсолютных показателей во всех группах исследования. Так, наибольшие значения зарегистрированы в группе больных с вторичным демодикозом на фоне розацеа (относительные - 28,17 ± 2,54 %; абсолютные -0,51 ± 0,06х109/л;р < 0,001), причем они статистически значимо отличались от показателей в группе с угревой болезнью (соответственно, 20,07 ± 1,44 % и 0,34 ± 0,02х109/л,р < 0,01). Есть сведения, что одним из этиопатогенетических факторов развития розацеа является нарушение со стороны желудочно-кишечного тракта, такие как активизация патогенной флоры и нарушение в выработке вазоактивного пептида и других гормоноподобных веществ, что приводит к неоангиогенезу; по нашему мнению, повышение рецепторов к ИЛ-2 может косвенно подтверждать данный процесс. Также в исследовании были выявлены достоверные различия относительных величин между группами с первичным демоди-козом и вторичным демодикозом на фоне розацеа (19,77 ± 2,08 % и 28,17 ± 2,54 %, соответственно) и абсолютных показателей в группах с первичным демодикозом и угревой болезнью (0,44 ± 0,03х109 и 0,34 ± 0,02х109,р < 0,05) (Рис. 1, а, б).
Другим важным показателем функциональной активности состояния Г-лимфоцитов является ИЬА-ВЯ+. В результате исследования выявлено достоверное повышение ИЬА-ВЯ+ во всех группах сравнения как относительных, так и абсолютных значений. Так, наибольший показатель зафиксирован в группе пациентов с демодикозом на фоне розацеа - 27,9 ± 2,07 % в сравнении с 14,00 ± 0,5 % в крови здоровых (р < 0,001). И наоборот, наиболее низкий, среди показателей групп исследования, отмечен в группах больных:
- с угревой болезнью - 23,13 ± 1,29 % (р < 0,001);
- с демодикозом - 24,56 ± 1,1 % (р < 0,001);
- с демодикозом на фоне угревой болезни -27,23 ± 4,04 % (р < 0,01).
Наибольшие абсолютные значения зарегистрированы в группе больных с демодикозом -0,50 ± 0,03 х109/л против 0,26 ± 0,03 х 109/л в крови
Кусая Н.В. и соавт. ХАРАКТЕРИСТИКА СООТНОШЕНИЯ МАРКЕРОВ АКТИВАЦИИ И АПОПТОЗА В КРОВИ.
0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
0 44 0,51
0,4 0,34
0,15
3
группы
30 25 20 г§ 15 10 5 0
28,17
19,77
21,81
20,07
9
—
2 3 4
группы
б
1
2
4
5
1
5
а
30 25 20 г§ 15 10 5 0
27,23 27,9
24,56 23,13
14
12 3 4
группы
0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
0,5 0,46 0,48
0,26
3
группы
Группы: 1 - демодикоз;
2 - демодикоз / угревая болезнь;
3 - демодикоз / розацеа;
4 - угревая болезнь;
5 - здоровые.
а) абсолютные значения СБ25+ в исследуемых группах (группам 1-4 соответствует р < 0,001);
б) относительные значения СБ25+ в исследуемых группах (группам 1-4 соответствует р < 0,001);
в) относительные значения ИЬА-БЯ+ в исследуемых группах (группам 1, 3, 4 соответствует р < 0,001; группе 2 - р < 0,01);
г) абсолютные значения ИЬА-БЯ+ в исследуемых группах (группам 1, 3 соответствует р < 0,001; группам 2, 4 - р < 0,01);
Рисунок 1. Абсолютные (в 109/л) и относительные (%) значения СБ25+ и ИЬА-БЯ+ в исследуемых группах
здоровых (р < 0,001) (Рис. 1, в, г).
Структурно-функциональный гомеостаз клеток и тканей состоит из сложного запрограммированного взаимодействия процессов обновления и отмирания клеток. Запрограммированная гибель клеток - апоптоз; значение апоптоза в поддержании гомеостаза трудно переоценить. Показатель отражает уровень негативной активации и готовности к апоптозу лимфоцитов, гранулоцитов, моноцитов. По уровню клеток, экспрессирующих этот маркер, можно судить о тяжести воспалительного процесса [11]:
- при повышении количества С095+ возможно развитие аутоиммунного типа патологии;
- при снижении характерны лимфопролифе-ративные процессы.
В результате исследования нами выявлено статистически значимое повышение С095+ в группе больных с первичным демодикозом и угревой болезнью, причем у пациентов с угревой болезнью уровень С095+ превышал значения у пациентов с демодикозом как абсолютных, так и относительных показателей (1,32 ± 0,41х109/л, 22,77 ± 1,84 % и 0,41 ± 0,04х109/л, 19,57 ± 0,75 %, соответственно, р < 0,05).
По данным корреляционного анализа маркеров активации и апоптоза, выявлены следующие изменения:
1
2
4
5
5
в
г
а) в группе пациентов с первичным демоди-козом выявлена:
- обратная корреляционная связь между СВ8+ и СВ95+ (г = - 0,77, р < 0,05);
- прямая корреляционная связь между:
1) СВ25+ и СВ95+ (г = 0,96,р < 0,005);
2) СВ16+ и СВ95+ (г = 0,72, р < 0,05);
- отсутствие связи между:
1) СВ4+ и СВ95+ (г = 0,54, р > 0,05);
2) СВ22+ и СВ95+ (Г = 0,72, р > 0,05);
б) в группе пациентов с вторичным демо-дикозом на фоне угревой болезни корреляционной связи между СВ4+ и СВ95+, СВ8+ и СВ95+, СВ 16+ и СВ95+, СВ22+ и СВ95+, СВ25+ и СВ95+ выявлено не было;
в) в группе пациентов с вторичным демодико-зом на фоне розацеа выявлена сильная обратная связь между:
- СВ8+ и СВ95+ (г = - 0,98, р < 0,01);
- СВ22+ и СВ95+ (Г = - 0,89, р < 0,05);
- СВ25+ и СВ95+ (/ = - 0,98, р < 0,01); корреляционной связи между СВ4+ и СВ95+, СВ 16+ и СВ95+ выявлено не было (р>0,05).
г) в группе пациентов с угревой болезнью выявлены корреляционные связи между:
- СВ22+ и СВ95+ (г = 0,53, р < 0,05);
- СВ16+ и СВ95+ (г = 0,36, р < 0,05); между другими маркерами корреляционной связи выявлено не было.
Таким образом, анализируя полученные данные, выявили корреляционную зависимость между СВ95+ и другими маркерами лимфоцитов:
- СВ8+, СВ25+ - в группах пациентов с демо-
дикозом и демодикозом на фоне розацеа;
- СВ 16+ и СВ95+ - в группах пациентов с демодикозом и угревой болезнью;
- СВ22+ и СВ95+ -в группах пациентов с де-модикозом на фоне розацеа и угревой болезнью, -
и отсутствие зависимости между СВ4+/СВ95+ во всех группах обследованных больных. В группе с демодикозом на фоне угревой болезни корреляционной зависимости выявлено не было. Данные показатели могут указывать на усиление активации и, в то же время, готовности к апоптозу для поддержания динамического равновесия, тогда как в группе с демодикозом на фоне угревой болезни данные показатели могут указывать на недостаточность взаимосвязей иммуноакти-вированных клеток в результате длительного подострого течения дерматоза на фоне низких антигенных нагрузок клеща.
Также для оценки оппозиционных маркеров лимфоцитов нами были проанализированы их соотношения относительно один другого. В результате исследования обнаружено, что соотношение СВ4+/СВ95+достоверно не отличалось у пациентов обследованных группах по сравнению с группой контроля (р > 0,05), за исключением больных с демодикозом на фоне розацеа (табл. 1). Соотношение СВ8+/СВ95+ превышало показатели здоровых обследованных в группе пациентов с угревой болезнью и достоверно снижалось в группе пациентов с демодикозом на фоне ро-зацеа (р < 0,05-0,001), причем этот показатель был достоверно ниже, чем в группе пациентов с демодикозом. Соотношения СВ16+/СВ95+,
Таблица 1 - Соотношение маркеров активации и апоптоза у пациентов исследуемых групп
Группы обследованных СВ4+ СВ95+ СВ8+ СВ95+ СВ16+ СВ95+ СВ22+ СВ95+ СВ25+ СВ95+
Здоровые 1,7±0,25 1,1±0,03 0,51±0,02 0,49±0,01 0,33±0,05
Больные с демодикозом 2,00±0,29 1,49±0,22 Л-р<0,01 1,33±0,24*** 1,63±0,28 **** 1,4±0,26****
Больные с демодикозом на фоне угревой болезни 1,88±0,35 1,5±0,36 0,82±0,11** р3-Л<0,05 1,24±0,24*** 1,2±0,23****
Больные с демодикозом на фоне розацеа 0,66±0,08** 0,56±0,09**** р0-р<0,001 1,02±0,04**** Л-р<0,001 0,77±0,12* Л-р,<0,001 0,99±0,15****
Больные с угревой болезнью 2,17±0,44 1,63±0,25* 1,48±0,24**** 1,19±0,2 **** 1,06±0,16****
Примечание: * -р < 0,05;
** -р < 0,01;
*** -р < 0,005;
**** -р < 0,001;
р2-р4 - демодикоз/демодикоз на фоне розацеа;
р3-р4 - демодикоз на фоне акне/демодикоз на фоне розацеа;
р3-р5 - демодикоз на фоне акне/угревая болезнь;
р4-р5 - демодикоз на фоне розацеа/угревая болезнь.
Кусая Н.В. и соавт. ХАРАКТЕРИСТИКА СООТНОШЕНИЯ МАРКЕРОВ АКТИВАЦИИ И АПОПТОЗА В КРОВИ...
CD22+/CD95+, CD25+/CD95+ достоверно превышали эти индексы в группе здоровых по сравнению со всеми группами обследованных пациентов (р < 0,05-0,001) (табл. 1).
Таким образом, в результате исследования установлено, что при развитии демодикозной инвазии неблагоприятным считается:
- повышение уровня CD 25+, HLA-DR+, CD95+маркеров;
- снижение соотношений CD 4+/CD 95+, CD8+/CD95+;
- повышение соотношений CD 16+/ CD95+,
ЛИТЕРАТУРА
1. Вострокнутова Т.М. Клещи-железницы и проблемная кожа лица / Т. М. Вострокнутова, М. А. Мокроносова // Лечащий врач. - 2007.
- № 9. - С.10-12.
2. Akilov O. E. A clinico-patological of human de-modecosis / O. E. Acilov, Yuri S. Butov, Kosta Y. Mumcuoglu // J. der Deutschen Dermatologischen Gesellschaft. - 2005. - Bd. 8. - S. 607-614.
3. Самцов А.В. Акне и акнеформные дерматозы / А. В. Самцов. - М: ООО «ЮТКОМ», 2009.
- 288 с.
4. Бутов Ю.С. Клинические особенности и вопросы классификации демодикоза кожи / Ю.С. Бутов, О.Е. Акилов // Рос. журн. кожн. и венерич. болезней. - 2003. - № 2. - С.53-58.
5. Верхогляд И.В. Современная антипаразитарная терапия демодикоза / И.В. Верхогляд // Клинич. дерматол. венерол. - 2006. - № 4. -С.89-90.
6. Гумерова Е.И. Результаты исследований местного иммунитета при демадекозном блефароконъюнктивите / Е.И. Гумерова, В.Б. Мальханов, Н.Е. Шевчук // Вестн. офтальмологии. - 2004.- № 5.- С. 16-18.
7. Бутов Ю.С. Опыт применения крема розамет
CD22+/CD95+, CD25+/CD95+.
Повышение маркеров активации и готовности к апоптозу может свидетельствовать о распространенности и тяжести патологического процесса, ассоциированного с демодикозной инвазией и преимущественным развитием иммунного ответа по смешанному типу. Представляется актуальным изучение взаимосвязи между типом иммунного реагирования и тяжестью патологического процесса у различных групп населения, а также изучение влияния данного типа иммунного реагирования на течение заболевания.
при лечении некоторых дерматозов / Ю.С. Бутов, Е.Н. Волкова // Вестн. дерматол. венерол. - 2005.- № 6.- С. 52-54.
8. Родионов А.Н. Дерматогистопатология: Руко-
вод. для врачей. /А.Н. Родионов, К.И. Разна-товский - СПб., 2006. - 224 с.
9. Ягофаров Ф. Ф. Иммунореабилитация больных
демодикозом / Ф.Ф. Ягофаров // Тез. докл. 4 Междунар. конгр. «Иммунореабилитация и реабилитация в медицине». - Сочи, 5-9 июля 1998 г. // Int. J. Immunorehabil. - 1998. -№ 8 - С. 45.
10. Forton F. Density of Demodex folliculorum in rosacea: a case control study using standardized skin-surface biopsy / F. Forton, B. Siys // Bt. J. Dermatology. - 1993. - P. 650-659.
11. Никулин Б.А. Оценка и коррекция иммунного статуса / Б.А. Никулин. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 376 с.
12. Юцковский А.Д. Дерматозы лица: клинико-патогенетические и иммунологические аспекты / А.Д. Юцковский, Я.А. Юцковская, Н.В. Кусая, ЕВ. Маслова, Н.Б. Метляева, ЕВ. Наход // Тихоокеанский мед. журнал. - 2008. - № 3. - С. 78-82.
