CC BY
22
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
грессии выявлены достоверные различия в зависимости от индекса массы тела больных. Так, у больных с нормальной массой тела 3-летняя ВБП составила 69%, что достоверно (p<0,05, Cox'f test) выше таковой для больных с избыточной массой тела и ожирением —— 45 и 33% соответственно (рис. 1).
Заключение. Проведенное нами исследование подтвердило гипотезу об отрицательном влиянии висцерального ожирения
на результаты лечения больных ММ. Анализ 3-летней ВБП показал, что результаты ауто-ТГСК больных ММ, страдающих ожирением, значимо хуже по сравнению с таковыми у пациентов с нормальной массой тела (3-летняя ВБП 33% против 69%). Ожирение является мо -дифицируемым фактором риска, изменение образа жизни и режима питания может способствовать улучшению результатов терапии пациентов с ММ.
Хамаганова Е. Г., Абдрахимова А. Р., Леонов Е. А., Гапонова Т. В., Савченко В. Г.
СЕКВЕНИРОВАНИЕ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ В ^^ТИПИРОВАНИИ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ДОНОРОВ
ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. HLA-типирование методом секвенирования нового поколения — NGS (next generation sequencing) позволяет проводить массовое типирование на уровне от высокого до аллельного разрешения. Типирование доноров и реципиентов гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) на уровне HLA-аллелей улучшает выживаемость после трансплантаций аллогенных ГСК.
Цель работы. Оценить возможности HLA-типирования доноров ГСК методом NGS.
Материалы и методы. HLA-типированы 96 образцов ДНК с реактивами NGSgo (GenDx, Нидерланды) по генам HLA-A, -B, -C, -DQB1, -DRB1. Таргетное обогащение проводили с помощью ло-кус-специфической амплификации (полногенной для генов класса 1, для генов класса 2 — со 2-го по 4-й экзон). Дальнейшая постановка занимала 2 рабочих дня и включала эквимолярное пулирование ампликонов, ферментную фрагментацию, лигирование адаптеров, очистку и отбор фрагментов по размеру, индексирование, пулирова-ние и измерение HLA-библиотек, секвенирование на MiSeq Illumina при помощи MiSeq Reagent Kit v2 (300 cycle), анализ результатов с помощью программного обеспечения NGSengine.
Результаты и обсуждение. Результаты получены для всех 96 образцов, однако три образца удалось ти-пировать лишь частично из-за неудовлетворительного качества ДНК, полученной из замороженных образцов крови. По генам класса 1 результаты получены на уровне 3-го и 4-го полей, класса 2 — 2-го поля. В 4-х образцах были выявлены аллели, отсутствующие в базе IMGT 3.36.0. Три аллеля представлены в GenBank (DDBJ/ ENA/GenBank) для дальнейшей регистрации. Новый аллель, выявленный в гене HLA-A, отличался от аллеля HLA-A*26:01:01:01 синонимичной заменой (G>A) в 3-м экзоне, кодон 182с (рис.), ему присвоен входящий номер LC498984. Два других новых HLA-аллеля были выявлены в генах HLA-C и HLA-DOB1, они отличались от присутствующих в базе HLA аллелей заменами в интронах, им присвоены номера MN427921 и MN432480. Четвертый ранее не описанный аллель был выявлен в гене HLA-DRB1, однако выявленная инсерция находилась в интро-
не, который не мог быть полностью просеквенирован, поэтому этот аллель не представлен в GenBank. 69 образцов ДНК были получены от доноров-башкир. У них установлены 116 пятилокусных HLA-A* -B':;:'-C':;:'-DRBГ;:'-DOBГ;:' гаплотипов. Наиболее частотным у башкир был гаплотип A*02:01:01-BЙ13:02:01:01-CЙ06:02:01:01-DRBГ;07:01 ^0ВГ:'02:02 (5,2%). Все аллели, входящие в этот гаплотип, были наиболее часто встречающимися у башкир в своих генах: А"::'02:01:01
(31,7%); В*13:02:01:01 (14, 8%); С*06:02:01:01 (17,7%); DRB1в07:01 (22,1%); DQB1в02:02 (18,4%).
Заключение. Использование метода NGS и наборов NGSgo позволяет проводить массовое HLA-типирование большого количества образцов ДНК за один рабочий цикл на уровне 3-4-го полей по генам класса 1-го и 2-го поля — по генам класса 2, что оптимально при создании регистров доноров ГСК. NGS позволяет выявлять новые HLA-аллели, связанные с полиморфизмами не только в экзо-нах, но и в интронах генов. Переход с полокусной на мультиплексную амплификацию, как и автоматизация пробоподготовки, позволит сократить время проведения HLA-типирования методом NGS.
Хамаганова Е. Г., Леонов Е. А., Абдрахимова А. Р., Кузьминова Е. П., Ахремцова А. А., Гапонова Т. В., Савченко В. Г. ^^ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ РОССИЙСКИХ ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Число комбинаций из вариантов генов HLA чрезвычайно велико, поэтому подобрать неродственного донора, HLA-совместимого с пациентом, нуждающимся в трансплантации ал-логенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), сложно. Так как распределение вариантов HLA-генов и HLA-гаплотипов отличается у разных этносов, вероятность подобрать донора выше вн утри той этнической группы, к которой относится больной.
Цель работы. Исследовать распределение частот групп аллелей HLA-генов и HLA-гаплотипов у доноров ГСК различной этнической принадлежности, рекрутированных в регистр «НМИЦ гематологии».
Материалы и методы. В исследование включено: 136 башкир из Уфы; 150 бурят из Забайкальского края; 114 осетин из Северной
Осетии-Алании; 157 татар из Нижнего Новгорода и Уфы; 1600 русских из Нижнего Новгорода и 296 — из Забайкальского края. HLA-типи-рование проводили методом гибридизации с олигонуклеотидными зондами (SSO) — Immucor (USA) на платформе мультиплексного флуоресцентного анализатора Luminex по локусам HLA-A*, B*, C*, DRB1*, DOB1* Из 136 башкир 69 были HLA-типированы методом NGS (секвенирования нового поколения) реагентами NGSgo (GenDx, the Netherlands) на платформе MiSeq Illumina, результаты анализировали с помощью программного обеспечения NGSengine. Для включения в исследование все результаты были редуцированы до уровня низкого разрешения (1-го поля). Частоты HLA-гаплоти-пов и групп аллелей HLA-генов определяли с помощью компьютерной программы Arlequin 3.5 методом максимального правдоподобия.
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
Расчет генетических расстояний, полученных на основании частот групп HLA-аллелей, между включенными в исследование популяциями и некоторыми евразийскими популяциями, представленными в базе данных Allele Frequency Net (http://www.allelefrequencies.net), проводили по методу Нея c помощью программы Phylip 3.695, как и построение филогенетических деревьев.
Результаты и обсуждение. Русские из Нижнего Новгорода и Забайкалья мало отличались по частотам групп аллелей HLA-генов друг от друга и от русских из Москвы, ранее исследованных в лаборатории тканевого типирования «НМИЦ гематологии». Характер распределения групп HLA-аллелей у русских был схож с распределением у других восточноевропейских популяций. Русские были близки к полякам, несколько ^большие генетические дистанции отделяли русских от че-
хов. Из включенных в исследование популяций наиболее существенно отличались от русских и друг от друга буряты и осетины (рис.). Буряты по частотам групп аллелей HLA-генов были близки к халха-монголам. Более близки к русским, чем буряты и осетины, были татары. Башкиры располагались между татарами и бурятами. Наиболее распространенные тА-гаплотипы: у русских - As01-Bs08-Cs07-DRBГг03-DOBrг02 (4,5% у нижегородцев; 3,5% у русских из Забайкалья), у башкир и татар - As02-B,;i13-Cs06-DRBГг07-DOBГг02 (6,3 и 4,1% соответственно), у бурят -As23-B,;i44-Cs04-DRBrг07-DOBrг02 (4,7%), у осетин -As30-Bs49-Cs07-DRBГг13-DOBГг06 (9,0%).
Заключение. Российские доноры ГСК, рекрутированные в регистр «НМИЦ гематологии», характеризуются значительным HLA-генетическим разнообразием.
Хоржевский В. А., Гаппоев С. В., Гаркуша Т. А.
УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЙ ПАТОМОРФОЗ МЕГАКАРИОЦИТОВ ПРИ ИСТИННОЙ ПОЛИЦИТЕМИИ И ПЕРВИЧНОГО МИЕЛОФИБРОЗА
ПОД ВЛИЯНИЕМ ПРЕПАРАТОВ ГИДРОКСИМОЧЕВИНЫ
Краевое государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Красноярское краевое патолого-анатомическое бюро»
Введение. Истинная полицитемия (ИП), первичный миело-фиброз (ПМФ) — наиболее часто встречающиеся Ph-негативные миелопролиферативные неоплазии (МПН), характеризующиеся нарушением пролиферации одной или более клеточной линии мие-лопоэза. Одним из химиотерапевтических препаратов для лечения ПМФ и ИП является гидроксимочевина (ГМ). Предполагается, что под влиянием ГМ происходит ингибирование синтеза ДНК, однако достоверно механизм воздействия препарата не изучен.
Цель работы. Оценить явления патоморфоза на ультраструктурном уровне в МЦ под влиянием препаратов ГМ.
Материалы и методы. Исследовано 42 образца костного мозга, полученных от пациентов с ИП (22) и ПМФ (20), методом тре-панобиопсии ости подвздошной кости. В группе пациентов с ИП 12 (1-я группа) пациентов, а в группе с ПМФ 12 (2-я группа) пациентов получали монотерапию гидроксимочевиной в терапевтических дозах на протяжении от 23 до 49 месяцев с полным гематологическим ответом. Остальные пациенты на момент диагностики лечения не получали (ИП — 10 пациентов (3-я группа), ПМФ — 8 пациентов (4-я группа)). Исследование образцов проводилось с применением просвечивающего микроскопа Zeiss Libra 120 Plus в режиме TEM. Морфометрический анализ выполнен с применением программы Olympus iTEM. Статистический анализ проводился методами вариационной статистики для непараметрических величин.
Результаты и обсуждение. При электронно-микроскопическом исследовании МЦ пациентов 1-й и 2-й групп в парануклеарной локали -
зации определялись полости округлой и неправильной формы, различных размеров. В части данных полостей визуализировались участки цитоплазмы, ограниченные собственной мембраной или слоистые массы, пластинки которых имели концентрическое направление, — ауто-фагические вакуоли. Слоистые структуры с концентрически организованными пластинками, напоминающие содержимое аутофагических вакуолей, определялись и вне клеток. Конденсация хроматина в ядрах мегакариоцитов отсутствовала, в ядре визуализировалось ядрышко. В цитоплазме также имелись другие органоиды, такие как митохондрии, демаркационная мембранная система, рибосомы, аппарат Гольджи, альфа-гранулы и другие. В части органоидов имелся отек. Апоптотические тельца отсутствовали образцах всех групп. При сравнительном анализе различий встречаемости ультраструктурных явлений аутофагоцитоза между пациентами 1-й и 2-й групп не выявлено (р > 0,05), тогда как межгрупповой сравнительный анализ выявил достоверные различия по данному признаку между группами пациентов, получавших препараты гидроксимочевины и без лечения. Таким образом при ультраструктурном анализе мегакариоцитов пациентов, получавших препараты ГМ, на первый план выступают признаки активации аутофагоцитоза, чего не наблюдается вне терапии.
Заключение. Полученные результаты позволяют предположить, что препараты ГМ инициируют в МЦ аутофагический ответ. Терапевтическая значимость этого явления не ясна, так как может свидетельствовать как об аутофагической гибели, так и об активации протективных механизмов МЦ.
Хрульнова С. А., Коробова А. Г., Федорова А. В., Фролова И. Н., Клясова Г. А.
ДЕТЕКЦИЯ ГЕНОВ ПРИОБРЕТЕННЫХ КАРБАПЕНЕМАЗ УАСШЕТОБАСТЕЯ БАиИАММ1, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ГЕМОКУЛЬТУРЫ
БОЛЬНЫХ ОПУХОЛЯМИ СИСТЕМЫ КРОВИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России Введение. В последние годы в России, как и в ряде других ных изолятов Acinetobacter Ьаиташги. Устойчивость к карба-стран, наблюдается увеличение карбапенем-нечувствитель- пенемам у А. bau.mann.ii обусловлена преимущественно про-
