CC BY
8
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
на трансплантацию аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК). Согласно рекомендациям Международной рабочей группы по изучению ММ 2016 г., проведение ауто-ТГСК возможно пациентам с диализ-зависимой почечной недостаточностью. Выполнение ауто-ТГСК в ряде случаев приводит к восстановлению почечной функции и отмене гемодиализа.
Цель работы. Оценить безопасность и эффективность ауто-ТГСК больным ММ с диализ-зависимой почечной недостаточностью
Материалы и методы. С мая 2010 по август 2018 г. 14 (3 муж., 11 жен.) больным ММ с диализ-зависимой почечной недостаточностью в возрасте от 48 до 65 лет (медиана 56,5 года) была выполнена ауто-ТГСК. Диагноз устанавливали в соответствии с критериями IMWG-2014. В дебюте заболевания медиана креатинина составляла 1074 мкмоль/л, СКФ (СКЛ-ЕР1) варьировала от 2 до 9 мл/мин/1,73 м2 (медиана 3). Индукционная терапия включала бортезомиб-содер-жащие схемы у всех больных, для углубления противоопухолевого ответа в 2 (14%) случаях потребовалась терапия 2-й линии леналидо-мидом. Мобилизация СКК проводилась по схеме: Г-КСФ 10 мкг/кг. Медиана заготовленных CD34+ клеток составила 3,46х106/кг. Затем на фоне программного гемодиализа в условиях высокодозного мел-фалана (100—200 мг/м2) 13 больным была выполнена однократная и в одном случае тандемная ауто-ТГСК. На 100-й день после ауто-ТГСК проводили оценку противоопухолевого и почечного ответа. Результаты исследования подвергались статистической обработке с помощью программы Statistica (версия 10.0). Анализ выживаемости проведен по методу Каплана-Мейера.
Месяцы после ауто ТГСК
Результаты и обсуждение. Перед ауто-ТГСК ПР была документирована у 64% больных, ОХЧР — у 29%, ЧР — у 7% пациентов, при этом почечного ответа зарегистрировано не было, СКФ: 4-10 мл/мин/1,73 м2 (медиана 5). Период миелотоксического агранулоцитоза после ауто-ТГСК сопровождался инфекционными проявлениями, кардиальной и неврологической дисфункциями (табл. 1), все осложнения были обратимы. На +100 дней после ауто-ТГСК ПР и ОХЧР была диагностирована у 71 и 29% пациентов соответственно. СКФ: 5-17 мл/мин/1,73 м2 (медиана 7). Минимальный почечный ответ зарегистрирован у 2 больных (14%), гемодиализ им был прекращен. При медиане наблюдения 53 мес 5-летняя выживаемость без прогрессии составила 59% (рис. 1), ОВ — 93%. Леталь -ность, связанная с трансплантацией, отсутствовала.
Заключение. Ауто-ТГСК больным ММ с диализ-зависимой почечной недостаточностью — возможный и эффективный метод лечения, в тоже время характеризующийся высокой частотой ранних посттрансплантационных осложнений. Диализ-зависимая почечная недостаточность не является противопоказанием для применения высоких доз мелфалана с последующей ауто-ТГСК. Вероятность отмены гемодиализа после ауто-ТГСК составила 14%. Показатели выживаемости сопоставимы с аналогичными показателями у больных без нарушения почечной функции
Таблица 1. Характеристика раннего посттрансплантационного периода у больных ММ с диализ-зависимой почечной недостаточностью
Осложнения Частота
Инфекционные
- стоматит 100%
- некротическая энтеропатия 93%
- пневмония 50%
- сепсис 29%
- герпесвирусная инфекция 21%
Токсические
- инфаркт миокарда 7%
- трепетание предсердий 14%
- повышение систолического АД > 200 мм рт. ст. 29%
- энцефалопатия 21%
Сроки восстановления показателей гемограммы (дни) Медиана и разброс значений
лейкоциты >1 х109/л 11,5 (8-16)
тромбоциты >50 х109/л 13 (10-26)
длительность МТА, дней 8,5 (5-12)
Потребность в трансфузионной терапии (терапевтическая доза) Медиана и разброс значений
эритроцитная масса 2 (0-4)
тромбоконцентрат 4,8 (2,5-14,1)
Фирсова М. В., Менделеева Л. П., Соловьев М. В., Савченко В. Г.
РЕЗУЛЬТАТЫ АУТО-ТГСК У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИНДЕКСА МАССЫ ТЕЛА
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Около 10 лет назад Международное агентство по изучению рака (IARC) подтвердило наличие связи между избыточной массой тела и риском возникновения злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта, почек, молочной железы, эндометрия. В 2016 году в этот список были добавлены еще 8 видов злокачественных опухолей, в том числе множественная миелома (ММ).
Цель работы. Изучить влияние избыточной массы тела больных ММ на эффективность применения высокодозного мелфалана с последующей трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволо -вых клеток (ауто-ТГСК).
Материалы и методы. В исследование включено 99 пациентов с ММ (37 муж., 62 жен.) в возрасте от 27 до 66 лет (медиана 54 г.), которым ауто-ТГСК выполнена в 2016-2017 гг. Диагноз устанавливали в соответствии с критериями IMWG 2014 г. Индукционная терапия включала бортезомиб-содержащие схемы у всех больных (первая линия терапии), иммуномодулирующие препараты применяли у 21% пациентов (вторая линия терапии). Рассчитывали стандартизированный индекс массы тела (ИМТ) перед проведением предтранс-плантационного кондиционирования мелфаланом в дозе 200 мг/м2 (95% больных), в дозе 140 мг/м2 (5% пациентов с диализ-зависимой почечной недостаточностью). Медиана наблюдения за больными после ауто-ТГСК составила 22 мес. Выживаемость без прогрессии (ВБП) оценена на сроке 3 года после ауто-ТГСК. Результаты исследо-
вания подвергались статистической обработке с помощью программы Statistica (версия 10.0), анализ выживаемости проведен по методу Каплана-Мейера.
Результаты и обсуждение. Нормальная масса тела (ИМТ до 24,9 кг/м2) отмечена у 22% пациентов, избыточная масса тела (ИМТ 25-29,9 кг/м2) — у 53% пациентов. Ожирение (ИМТ >30 кг/м2) диагностировано у 25% больных. При анализе выживаемости без про-
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
грессии выявлены достоверные различия в зависимости от индекса массы тела больных. Так, у больных с нормальной массой тела 3-летняя ВБП составила 69%, что достоверно (p<0,05, Cox'f test) выше таковой для больных с избыточной массой тела и ожирением —— 45 и 33% соответственно (рис. 1).
Заключение. Проведенное нами исследование подтвердило гипотезу об отрицательном влиянии висцерального ожирения
на результаты лечения больных ММ. Анализ 3-летней ВБП показал, что результаты ауто-ТГСК больных ММ, страдающих ожирением, значимо хуже по сравнению с таковыми у пациентов с нормальной массой тела (3-летняя ВБП 33% против 69%). Ожирение является мо -дифицируемым фактором риска, изменение образа жизни и режима питания может способствовать улучшению результатов терапии пациентов с ММ.
Хамаганова Е. Г., Абдрахимова А. Р., Леонов Е. А., Гапонова Т. В., Савченко В. Г.
СЕКВЕНИРОВАНИЕ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ В ^^ТИПИРОВАНИИ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ДОНОРОВ
ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. HLA-типирование методом секвенирования нового поколения — NGS (next generation sequencing) позволяет проводить массовое типирование на уровне от высокого до аллельного разрешения. Типирование доноров и реципиентов гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) на уровне HLA-аллелей улучшает выживаемость после трансплантаций аллогенных ГСК.
Цель работы. Оценить возможности HLA-типирования доноров ГСК методом NGS.
Материалы и методы. HLA-типированы 96 образцов ДНК с реактивами NGSgo (GenDx, Нидерланды) по генам HLA-A, -B, -C, -DQB1, -DRB1. Таргетное обогащение проводили с помощью ло-кус-специфической амплификации (полногенной для генов класса 1, для генов класса 2 — со 2-го по 4-й экзон). Дальнейшая постановка занимала 2 рабочих дня и включала эквимолярное пулирование ампликонов, ферментную фрагментацию, лигирование адаптеров, очистку и отбор фрагментов по размеру, индексирование, пулирова-ние и измерение HLA-библиотек, секвенирование на MiSeq Illumina при помощи MiSeq Reagent Kit v2 (300 cycle), анализ результатов с помощью программного обеспечения NGSengine.
Результаты и обсуждение. Результаты получены для всех 96 образцов, однако три образца удалось ти-пировать лишь частично из-за неудовлетворительного качества ДНК, полученной из замороженных образцов крови. По генам класса 1 результаты получены на уровне 3-го и 4-го полей, класса 2 — 2-го поля. В 4-х образцах были выявлены аллели, отсутствующие в базе IMGT 3.36.0. Три аллеля представлены в GenBank (DDBJ/ ENA/GenBank) для дальнейшей регистрации. Новый аллель, выявленный в гене HLA-A, отличался от аллеля HLA-A*26:01:01:01 синонимичной заменой (G>A) в 3-м экзоне, кодон 182с (рис.), ему присвоен входящий номер LC498984. Два других новых HLA-аллеля были выявлены в генах HLA-C и HLA-DOB1, они отличались от присутствующих в базе HLA аллелей заменами в интронах, им присвоены номера MN427921 и MN432480. Четвертый ранее не описанный аллель был выявлен в гене HLA-DRB1, однако выявленная инсерция находилась в интро-
не, который не мог быть полностью просеквенирован, поэтому этот аллель не представлен в GenBank. 69 образцов ДНК были получены от доноров-башкир. У них установлены 116 пятилокусных HLA-A* -B':;:'-C':;:'-DRBГ;:'-DOBГ;:' гаплотипов. Наиболее частотным у башкир был гаплотип A*02:01:01-BЙ13:02:01:01-CЙ06:02:01:01-DRBГ;07:01 ^0ВГ:'02:02 (5,2%). Все аллели, входящие в этот гаплотип, были наиболее часто встречающимися у башкир в своих генах: А"::'02:01:01
(31,7%); В*13:02:01:01 (14, 8%); С*06:02:01:01 (17,7%); DRB1в07:01 (22,1%); DQB1в02:02 (18,4%).
Заключение. Использование метода NGS и наборов NGSgo позволяет проводить массовое HLA-типирование большого количества образцов ДНК за один рабочий цикл на уровне 3-4-го полей по генам класса 1-го и 2-го поля — по генам класса 2, что оптимально при создании регистров доноров ГСК. NGS позволяет выявлять новые HLA-аллели, связанные с полиморфизмами не только в экзо-нах, но и в интронах генов. Переход с полокусной на мультиплексную амплификацию, как и автоматизация пробоподготовки, позволит сократить время проведения HLA-типирования методом NGS.
Хамаганова Е. Г., Леонов Е. А., Абдрахимова А. Р., Кузьминова Е. П., Ахремцова А. А., Гапонова Т. В., Савченко В. Г. ^^ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ РОССИЙСКИХ ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Число комбинаций из вариантов генов HLA чрезвычайно велико, поэтому подобрать неродственного донора, HLA-совместимого с пациентом, нуждающимся в трансплантации ал-логенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), сложно. Так как распределение вариантов HLA-генов и HLA-гаплотипов отличается у разных этносов, вероятность подобрать донора выше вн утри той этнической группы, к которой относится больной.
Цель работы. Исследовать распределение частот групп аллелей HLA-генов и HLA-гаплотипов у доноров ГСК различной этнической принадлежности, рекрутированных в регистр «НМИЦ гематологии».
Материалы и методы. В исследование включено: 136 башкир из Уфы; 150 бурят из Забайкальского края; 114 осетин из Северной
Осетии-Алании; 157 татар из Нижнего Новгорода и Уфы; 1600 русских из Нижнего Новгорода и 296 — из Забайкальского края. HLA-типи-рование проводили методом гибридизации с олигонуклеотидными зондами (SSO) — Immucor (USA) на платформе мультиплексного флуоресцентного анализатора Luminex по локусам HLA-A*, B*, C*, DRB1*, DOB1* Из 136 башкир 69 были HLA-типированы методом NGS (секвенирования нового поколения) реагентами NGSgo (GenDx, the Netherlands) на платформе MiSeq Illumina, результаты анализировали с помощью программного обеспечения NGSengine. Для включения в исследование все результаты были редуцированы до уровня низкого разрешения (1-го поля). Частоты HLA-гаплоти-пов и групп аллелей HLA-генов определяли с помощью компьютерной программы Arlequin 3.5 методом максимального правдоподобия.
