CC BY
25
2003 ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА. Сер. 3. Вып. 1 (№3)
ФИЗИОЛОГИЯ, БИОХИМИЯ, БИОФИЗИКА
УДК 612.018+612.63
B. И. Циркин, А. Д. Ноздрачев. М. Л. Сазанова,
C. А. Дворянский, С. В. Хлыбова
ХЕМОМОДУЛИРУЮЩИЕ И УТЕРОАКТИВНЫЕ СВОЙСТВА СЫВОРОТКИ ПУПОВИННОЙ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ '
Известно [4, 11, 12, 13, 14, 15, 16], что сыворотка крови человека в зависимости от степени ее разведения способна в условг ~х регистрации сократительной активности (СА) продольных полосок рога матки небеременных крыс оказывать уте-ростимулирующий (1:500, 1:100, 1:50, 1:10), утероингибирующий (1:10a, 1:10°, 1:104), /З-адреноблокирующий (1:10), /3-адреносенсибилизирующий (1:104, 1:103, 1:500, 1:100, 1:50, 1:10), а тающее М-холиноблокирующий (1:500, 1:100, 1:50, 1:10) эффекты. Это объясняется наличием в ней. соответственно эндогенного утеростимулятора, связанного утероингибитора, т.е. комплекса эндогенных агонистов /5-адреноредепторов (/?-АР), эндогенного блокатора /5-АР (ЭББАР), эндогенного сенсибилизатора /3-АР (ЭСБАР) и эндогенного блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР). Показано, что физиологические эффекты, характерные для ЭСБАР, оказывают три аминокислоты (гистидин, тирозин и триптофан) [5, 9, 15], для ЭББАР — дофамин [4], для "ЭБМХР — лизофос-фатидилхолин [7] и олигопептиды, выделенные из эпителиоцитов трахеи [10, 17, 18], а эндогенный утеростимулятор рассматривается [9, 5] как комплекс "сывороточных оли-гопептидов. Вопрос о физиологическом значении этих утероактивных и хемомодули-рующих факторов прямого действия, в том числе при неосложненном и осложненном течении беременности и родов, остается открытым. Предполагается [11, 15], что ЭСБАР у беременных женщин повышает /3-адренореактивность миометрия и тем самым способствует вынашиванию плода; предродовое снижение содержания ЭСБАР и повышение ЭББАР в системе «мать —плод», установленное в исследованиях [4, 11, 15], рассматривается как необходимое условие для индукции и успешного течения родового акта. Нарушение этого механизма, т. е. недостаточное предродовое изменение содержания ЭСБАР и ЭББАР, расценивается [11, 15] как одна из причин развития слабости родовой деятельности (СРД). Предполагается [1, 3, 15], что повышенное содержание ЭСБАР в крови беременных (совместно с избыточным накоплением циркулирующих в ней свободных, или «плавающих», ¡3-АР, встраивающихся в мембраны клеток крови), может быть одной из причин развития позднего гестоза. Следует подчеркнуть, что до настоящего времени комплексное изучение содержания /3-адреномодулирующих и •Si ■ --
© В. И. Циркин, А. Д. Ноздрачев, М. JI. Сазанова, С. А. Дворянский, С. В. Хлыбова, 2003
✓
М-холиномодулирующих факторов в системе «мать — плод» не проводилось. В связи с этим цель работы состояла в оценке содержания в сыворотке пуповинной крови (СПК) новорожденных эндогенных утероактивных и хемомодулирующих факторов при нормальном и осложненном течении беременности (поздний гестоз, анемия беременных, фетоплацентарная недостаточность) и родов (CPД).
Методика
Исследована СПК 129 новорожденных, в том числе 37 —от здоровых женщин с неослож-ненным течением родов (группа 1), 26 — от женщин со СРД (группа 2), 24 —от женщин с поздним гестозом (группа 3), 21—от женщин с анемией беременных (группа 4) и 21—при наличии фетоплацентарной недостаточности (ФПН) без признаков гестоза (группа 5). В каждой из этих групп (1, 2, 3, 4 и 5) исследована /3-адреномодулирующая (соответственно от 17, 14, 12, 11 и 10 новорожденных; всего —64) и М-холиномодулирующая активность СПК (соответственно от 20, 12, 12, 10 и 11 новорожденных, всего — 65). Сыворотку получали путем центрифугирования (2000 об/мин, 10 мин) пуповинной крови, взятой общепринятым способом в момент рождения (до исследования она хранилась при 4° С в течение 3-30 ч); ее разводили в 10, 50, 100, 500, 1000, 104 и 106 раз раствором Кребса (рН-7,4), содержащим (в ммоль/л): Nad-136, KCl-4,7, СаС12-2,52, MgCl2-l,2, КН2Р04-0,6, NaHC03-4,7, C6Hi206-ll.
Утероактивные, /3-адрено- и М-холиномодулирующие свойства СПК исследовали по методу В. И. Циркина и соавторов [12, 13, 14, 16] на 653 продольных полосках (длиной 8-10 мм, шириной 2-3 мм) рога матки 111 небеременных крыс, находящихся в фазе метаэструса или диэструса, которую определяли по картине влагалищного мазка.
С А полосок регистрировали на «Миоцитографе» при 38° С и скорости перфузии раствора Кребса 0,7 мл/мин. Исследование /?-адреномодулирующей активности СПК проводили после установления у полосок стабильной С А, подвергая их 3-кратному тестированию адреналином (адреналина гидрохлорид, Московский эндокринный завод) в концентрации 10 нг/мл по схеме: адреналин (10 мин) —► раствор Кребса (10 мин) —» исследуемое разведение СПК (10 мин) —► это же разведение совместно с адреналином (10 мин) —> раствор Кребса (10 мин) —> адреналин (10 мин) -+ раствор Кребса (10 мин). Изучение М-холиноблокирующей активности СПК проводили по аналогичной схеме, в которой вместо адреналина при 3-кратном тестировании применяли ацетилхолин (АХ; ацетилхолина хлорид, Россия) в концентрации 1 мкг/мл. На каждой полоске исследовали влияние двух разведений СПК — первоначально из диапазона высоких (1:106-1:103), а затем —из диапазона низких (1:500-1:10) разведений.
По механограммам (рис. 1) оценивали частоту генерации спонтанных сокращений (их число за 10 мин), их амплитуду (мН) и суммарную С А (ССА), т.е. сумму фазных сокращений за 10 мин (мН/10 мин),.а также рассчитывали их абсолютные и относительные (в процентах к исходному или фоновому уровню) изменения под влиянием СПК, адреналина или АХ.. Одновременно на основе визуально-логического анализа механограмм оценивали вероятность проявления утёростимулируюхцих, утероингибирующих, ¡3-адрено- и М-холиномодулирующих эффектов СПК в каждой из пяти групп. Результаты исследования подвергнуты статистиче-. ской обработке. Различия между показателями оценивали по критерию Стьюдента и считали их достоверными при р < 0,05.
Результаты исследования ,
Основные результаты представлены в таблице и на рис. 1 и 2. Прежде всего следует отметить, что в клиническом плане группы 1, 2, 3, 4 и 5 не отличались достоверно между собой по таким показателям, как возраст матери (25,3±0,7; 23,3±0,6; 25,7±0,8; 24,5±0,8 и 24,8±0,7 лет), срок гестации (39,2±0,1; 39,5±0,1; 39,4±0,3; 39,5±0,2 и 39,1±0,2 недель), процент первородящих (51,3±5,6, 64Д±7,7, 68,3±7,3, 53,2±7,3 и 58,5±7,7%) и объем кровопотери при родах (262±15, 286±24, 316±30, 319±30 и 277±28 мл). В то же время они отличались между собой по скорости родового процесса. Так, общая продолжительность родов составляла соответственно 551,9±24,9; 775,1±38,4; 429,1±20,9;
, А-8
С-50
А-8
JJUJШi^
А-8
В
А-8
С-50
Ш
А-8
л ^ — _
и
А-8
Г
10 мН
и
иш
10 МИН АХ-6 . с-50 АХ-6 АХ-6.
Рис. 1. Механограммы продольных полосок рога матки небеременных крыс, демонстрирующих р-адреноблокирующий и утероингибирующий эффекты 104-кра.±ных разведений (панель А) сызорот-ки пуповинной крови (СПК), а также /3-адреносенсибилизирующий (панель Б), /3-адреноблокирующий (панель В) и М-холиноблокирующий (панель Г) эффекты СПК-1:50.
• Горизонтальные линии под механограммами указывают на момент воздействия адреналина (Ю-8 г/мл; А-8), ацетилхолина (ИГ6 г/мл; АХ-б) или СПК-1:104 и СПК-1:50 (С-104 и С-50); калибровка — 10 мН, 10 мин. •
376,4±24,3 и 514,3±37,2 мин (£1-2,3,4 < 0,05; р2-з,4,5 < 0,05; р4_5 < 0,05). Масса новорожденных составляла соответственно 3368±47; 3470±80; 3346±84; 3444^65 и 3102±73 г- (р5-1,2,3,4 < 0,05), а их рост соответственно 51,8±0,3; 52,6±0,4; 51,7±0,4; 52,3±0,3 и 50,8±0,4 см (р5-1,2,4 < 0,05).
Эксперименты показали, что все 653 полоски миометрия, используемые в качестве тест-объекта, обладали-стабильной спонтанной СА (см. рис. 1): за 10 мин они генерировали 10,49±0,17 сокращений с амплитудой 9,33±0,92 мН, а суммарная СА составила 96,46±8,37 мН/10 мин.
Характеристика утероактивных свойств СПК. Показано (см. рис. 1 и 2), что СПК может изменять СА тест-объекта, при этом характер и интенсивность изменений СА зависят от степени разведения СПК, а также от состояния матери и плода и характера родовой деятельности. 4
^Высокие разведения сыворотки (СПК-1:106, СПК-1:104 и в меньшей степени -1:103) проявляли утероингибирующее действие (см. рис. 1, панель А). Для
Содержание эндогенных факторов в системе «мать — плод» при различных акушерских состояниях (1 — неосложненное течение беременности и родов, 2 — слабость родовой деятельности, 3 — поздний гестоз, 4 — анемия беременных, 5 — фетоплацентарная недостаточность)
Эндогенный фактор сыворотки крови Клиническая группа
1 2 3 4 5
Связанный утероингибитор Имеется-1:106, 1:104 А ш А _
Свободный утероингибитор 1:100, 1:50, 1:10 А ш _
Эндогенный утеростимулятор * 1:500, 1:100, 1:50, 1:10 ▼ Т ▼ А
Эндогенный блокатор . /3-адренорецепторов 1:100, 1:50, 1:10 ▼ - А ▼
Эндогенный сенсибилизатор /3-адре-норецепторов 1Т103, 1:500, 1:100, 1:50, 1:10 А т Т ▼
Эндогенный блокатор М-холино-рецепторов 1:500, 1:100, 1:50, 1:10 - А А -
Эндогенный сенсибилизатор М-холино-рецепторов 1:10 - - ▼
Условные обозначения: А — содержание фактора повышено, ▼ — содержание фактора понижено,- — содержание фактора не изменено.
СПК-1:106 этот эффект в группах 1, 2, 3, 4 и 5 отмечен соответственно в 37,0, 40,9, 42,9, 50,0 и 40,0% опытов, для СПК-1:104 —в 18,5, 36,4, 23,8, 35,0 и 25,0% опытов, а для СПК-1:103 —в 14,8, 31,8, 19,1, 35,0 и 10,0% опытов. Несмотря на то, что межгрупповые различия носят недостоверный характер (р > 0,1), эти результаты демонстрируют тенденцию: в группах 2 и 4 утероингибирующий эффект наблюдался чаще, чем в группах 1, 3 и 5.
Количественный анализ подтверждает (рис. 2, Ж), что СПК-1:106 и СПК-1:104 достоверно (р < 0,05) уменьшают частоту (соответственно на 9-23 и 11-28% от фонового уровня) и суммарную СА (на 19-28 и 12-28%) тест-объекта. Так, при действии СПК-1:106 в группах 1, 2, 3, 4 и 5 частота сокращений снижалась соответственно до 82,0±5,6, 77,5±5,4, 86,6±6,0, 91,7±б,8'и 76,7±5,4% от фонового уровня (межгрупповые различия недостоверны), а при действии СПК-1:104— соответственно до 78,4±5,3, 72,2±6,1, 80,7±5,8, 89,1=Ь4,9 и 77,9±3,7% (р2-4 < 0,05); суммарная СА полосок под влиянием СПК-1:106 достоверно (р < 0,05) снижалась соответственно до 78,6±5,3, 81,8±6,6, 78,б±5,8, 74,1±6,2 и 72,5±6,3% от фонового уровня, а при действии СПК-1:104-, соответственно до 78,4±5,8, 72,4±6,3, 88,3±7,5, 8б,6±6,6 и 76,6±6,8% (все межгрупповые различия недостоверны). В то же время снижение амплитуды сокращений (на 2-9%) под влиянием СПК-1:106 и СПК-1:104 носило недостоверный характер, за исключением группы 4, где снижение амплитуды (на 15%, т. е. до 85,0±6,0% оТ фонового уровня) под влиянием СПК-1:106носило достоверный характер (р < 0,05).
В целом представленные данные указывают (см. таблицу) на наличие в СПК связанного утероингибитора (т. е. комплекса эндогенных агонистов /?-Р, которые десорби-руются при разведении СПК). Его содержание в сравнении с неосложненным течением беременности и родов повышено в группах 2 и 4, т. е. при СРД и анемии.
1 2 3 4 5 □ ССА §§|Адр1 ИАдр2 ЙАдрЗ
П
□ ССА ÉS3 Ах-1 I Ах-2 ЙАх-З
III
к НО 2 120 2 юо
1 80 т 60
и 40
20 Н
0
ж ллл 3 и .
р<0,05 1401 140-1
_Т I 120- 120- | t I
МШ'Ш
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
□ ССА ■ Сыворотка
Рис. 2. Суммарная сократительная активность (в мН/10мин) продольных полосок рога матки небёре-менных крыс — фоновая и вызванная адреналином в концентрации 10 нг/мл (Адр-1, Адр-2 у. Адр-3; фрагмент I) или ацетилхолином в концентрации 1 мкг/мл (Ах-1, Ах-2, Ах-3; фрагмент II) при трехкратном тестировании, т. е. до, на фоне и после воздействия исследуемого разведения сыворотки пупо-винной крови (СПК), а также соответствующими разведениями СПК (фрагмент III) новорожденных групп 1, 2, 3, 4 и 5.
Панели Л-Я отражают эффекты соответственно: А — СПК-1:106, Б — СПК-1:103, В— СПК-1:10, Г— СПК-1:104, Д— СПК-1:500, Я-СПК-ЫО, Ж— СПК-1:106, 3 —СПК-1:500 и Я-СПК-1:Ю. Символ * означает достоверность различия 2-го тестирования с 1-м, р < 0,05.
Невысокие разведения СПК (1:500, 1:100, 1:50, 1:10) за счет наличия эндогенного утеростимулятора увеличивалили СА тест-объекта (рис. 1, Б, В, Г). В группах 1, 2, 3, 4 и 5 утеростимулирующий эффект отмечен для СПК-1:500 соответственно в 51,8, 27,3, 57,1, 30,0 и 50,0% опытов (р2-з < 0,05), для СПК-1:100 — в 81,5, 59,1, 66,7, 55,0, и 70,0% опытов, для СПК-1:50 —в 88,9, 81,8 66,7, 65,0 и 90,0% опытов, для СПК-1:10 —в 100,0, 70,0, 90,0, 90,0 и 100,0% опытов (р2~i,5 < 0,05). Количественный анализ показал (рис. 2,3, И), что утеростимулирующий эффект при действии СПК-1:500, 1:100, 1:50 и 1:10 во всех группах проявляется в повышении частоты фазных сокращений (соответственно на 1-5, 12-40, 30-56 и 46-73% от фонового, уровня), их амплитуды (соответственно на 15-21, 12-41, 13-25 и 19-33%) и суммарной СА (соответственно на 2-25, 36-110, 57-108 и.64-109%). Так, в группе 1 при действии СПК-1:500, СПК-1:100, СПК-1:50 и СПК-1:10 частота сокращений достигала соответственно 93,9±4,9, 140,6±9,1, 147,5±9,5 и 171,9=Ь12,3% от фонового уровня, амплитуда сокращений —115,4±7,3, 119,4±7,6, 113,3±6,4 и 98,1±4,8%, а суммарная СА-100,5±6,0, 163.,2±11,8, 168,7±18,4и 164,2±13,9%.
Количественный анализ механограмм выявил тенденцию, свидетельствующую о том, что в группе 5 утеростимулирующая активность СПК-1:500 и 1:100 (судя по ино-тропному и суммарному эффекту), а также СПК-1:50 (судя по суммарному эффекту) бцла выше, чем в группах 1, 2, 3 и 4. С другой стороны, в группах 2, 3 и 4 утеростимулирующая активности СПК-1:500 и СПК-1:100 была ниже, чем в группах 1 и 5. Действительно, согласно результатам исследования СПК-1:500, в группе 2 хроно-тропный эффект был ниже, чем в остальных группах (тенденция), а а группе 4 не отмечалось повышения амплитуды сокращений. В серий с СПК-1:100 найдено, что в группе 2 отсутствовали положительные хронотропный и инотропный эффекты, в группе 3 хронотропный эффект был достоверно (р < 0,05) ниже, чем в группе 1, а в группе 4 хронотропный эффект был ниже, чем в остальных группах (тенденция). Все это дает основание утверждать (см. таблицу), что содержание эндогенного утеростимулятора (в сравнении с неосложненным течением беременности и родов) повышено в группе 5, т. е. при ФПН, и снижено в группах 2, 3 и 4, т. е. при СРД, позднем гестозе и анемии.
Сравнение вероятности наблюдения утеростимулирующего эффекта ¡СПК-!: 100, 1:150 и 1:110 показало, что во всех группах, кроме группы 2, она максимальна для СПК-1:10, а в группе 2 максимум характерен для СПК-1:50 (81,8 против 70,0 для СПК-1:10). Это дает основание предположить, что в СПК-1:10 содержится фактор, препятствующий действию эндогенного утеростимулятора; его предлагаем называть свободным утероингибитором. Очевидно, что в группе 2 (СРД) его содержание выше, чем в других группах (см. таблицу).
Характеристика /3-адреномодулирующих свойств СПК. Опыты с 254 полосками миометрия показали (рис. 1, Л, Б, В), что адреналин в исследуемой концентрации (10 нг/мл) при 1-м тестировании достоверно (р < 0,05), но незначительно (как это и необходимо для определения наличия в крови ЭСБАР и ЭББАР) угнетал спонтанную СА тест-объекта, в том числе частоту сокращений (до 81,86±2,96% от исходного уровня), амплитуду (до 79,96±2,79%) и суммарную СА (до 68,91±3,75%). Эксперименты показали, что характер и интенсивность влияния СПК на /3-адренореактивность полосок определяются кратностью разведения СПК, а также состоянием матери и плода и характером родовой деятельности.
Высокие разведения (СПК-1-.106, 1:104) в части опытов (для групп 1, 2, 3, 4 и 5 соответственно в 38,5, 30,0, 30,0, 20,0 и 10,0% опытов и в 46,2, 40,0, 50,0, 30,0 и 40,0% опытов) повышали /3-адренореактивность тест-объекта, а в части опытов (соответственно в 23,1, 50,0, 40,0, 30,0 и 50,0% опытов и в 23,1, 40,0, 30,0, 20,0 и 40,0% опытов) снижали ее, т. е. уменьшали ингибирующий эффект адреналина (межгрупповые различия адреномодулирующих эффектов СПК-1:106 и СПК-1:104 недостоверны, р > 0,1). Как уже отмечалось выше [13, 15], (3-адреносенсибилизиру ющий эффект сыворотки крови связан с наличием в ней ЭСБАР, в то время как ¡3-адреноблокирующий эффект высоких разведений сыворотки обусловлен оккупацией /?-АР тест-объекта сорбированными на белках сыворотки крови эндогенными агонистами /?-АР (т. е. связанным утероингибитором); в результате , оккупации развивается десенситизация (3-АР. Как видно из Представленных данных, с понижением кратности разведения (от 1:106 до 1:103) вероятность развития /3-адреноблокирующего эффекта снижается, а вероятность выявления /?-адреносенсибилизирующего эффекта возрастает.
Количественная оценка механограмм показала (рис. 2, А), что ингибирующий эффект адреналина под влиянием СПК-1:106 в группах 1, 2, 3 не изменялся, но достоверно (р < 0,05), судя по суммарной СА, повышался в группе 4 и снижался в группе 5. В то же время под влиянием СПК-1:104 во всех группах ингибирующий эффект адре-
налина не изменялся. В целом полученные данные согласуются с высказанным выше представлением о наличии в СПК связанного утероингибитора.
Другие разведения (СПК-1:103, 1:500, 1:100, 1:50 и 1:10) чаще всего оказывали /3-адреносенсибилизирующий эффект (рис. 1,В), обусловленный наличием ЭСБАР. Для СПК-1:103 в группййс 1, 2, 3, 4 и 5 он отмечен соответственно в 84,6, 70,0, 60,0, 40,0 и 40,0% опытов (р1_4,б < 0,05), для СПК-1:500 —в 92,3, 100,0, 60,0, 60,0 и 50,0% опытов (Р1_Б < 0,05, £2-3,4,5 < 0,05), для СПК-1:100 —в 92,3, 90,0, 70,0, 70,0 и 60,0% опытов, для СПК-1:50 —в 84,6, 70,0, 60,0, 50,0 и 70,0% опытов, а для'СПК-1:10 —в 53,8, 70,0, 50,0, 40,0 и 40,0% опытов (межгрупповые различия, выявляемые при исследовании СПК-1:100, 1:50 и 1:10, недостоверны, р > 0,1).
Количественный анализ механограмм показал, что в серии с СПК-1:103 во всех пяти группах адреналин (10 нг/мл) при 1, 2 и 3-м тестированиях снижал суммарную СА соответственно на 7-35, 31-76 и на 12-44% от фонового уровня (рис. 2, Б), в серии с СПК-1:500 —на 18 -34, 59-90 и 12-50%, в серии с СПК-1:100 —на 19-41, 60-86 и на 10-47%, в серии с СПК-1:50-на 10-35, 46-84 и 5-51%, а в серии СПК-Ы0-на 43-56, 54-77 и 13-62% (рис. 2, В). Важно подчеркнуть, что при исследовании всех разведений СПК, кроме 10-кратных, ингибирующий эффект адреналина при 2-м тестировании был достоверно выше (р < 0,05), чем при 1 и 3-м тестированиях (рис. 2, Б, В). Для примера приведем данные, отражающие ¡3-адреносенсибилизирующую активность СПК группы 1: суммарная С А при 1, 2 и 3-м тестированиях адреналином в серии с СПК-1:103 достигала соответственно 58,1±17,6, 40,4±9,1 и 88,2±8,3% от фонового уровня (или 63,7±6,4; 34,4±6,3 и 63,3±13,4 мН/10 мин), в серии с СПК-1:500-соответственно 81,6±5,3, 24,4±6,6 и 63,6±4,3% (или 65,5±12,3; 18,4±4,6 и 46,0±8,7мН/10 мин), в серии с СПК-1:100 —соответственно 59,0±11,8,18,4±2,8 и 52,5±17,1% (или 43,6±11,5; 15,5±2,0 и 25,4±4,0 мН/10 мин); в серии с СПК-1:50 —соответственно 81,6±9,2, 21,5±7,1 и 121,3±19,8% (или 69,5±18,0; 23,4±3,5 и 55,3±15,1 мН/10 мйн), а в серии с СПК-Ы0- соответственно 46,3±9,9, 30,3±6,0 и 86,7±24,7% (или 39,4±13,0; 41,4±4,4 и 44,6±13,0 мН/10 мин). Эти данные подтверждают способность СПК оказывать /3-адреносенсибилизирующий эффект, обусловленный наличием в ней ЭСБАР.
Выраженность ^-адреносенсибилизирующего эффекта СПК (рис. 2, А, Б, В), как и вероятность его наблюдения, зависит от состояния матери и плода —об этом свидетельствует наличие достоверных (р < 0,05) межгрупповых различий при исследовании СПК-1:103 и СПК-1:500 (в группе 2 этот эффект был выше, чем в группах 1, 3, 4 и 5), СПК-1:100 (в группах 1, 2 и 5 эффект был выше, чем в группах 3 и 4; а в группе 2 выше, чем в группе 5) и СПК-1:50 (в группах 1 и 5 эффект был выше, чем в группах 2 и 4). С учетом вероятности и выраженности /3-адреносенсибилизирующего эффекта можно заключить (см. таблицу), что в сравнении с неосложненным течением беременности и родов содержание ЭСБАР в группах 3, 4 и 5 (поздний гестоз, анемия беременных и ФПН) снижено, а в группе 2 (СРД) повышено.
Результаты исследования показали, что СПК-1:100, 1:50 и 1:10 в ряде случаев за счет наличия ЭББАР снижали /3-адренореактивность тест-объекта, т.е. оказывали /3-адреноблокирующий эффект (рис. 1, В). СПК-100 в группах 1, 3, 4 и 5 его оказывали в 7,7, 20,0, 10,0 и 20,0% опытов (в группе 2 эффект отсутствовал), СПК-1-.50 в группах 1, 2, 3 и 4 оказывали его соответственно в 15,4, 20,0, 20,0 и 30,0% опытов (в группе 5 он отсутствовал), а СПК-1:10 в группах 1-5 проявляли его соответственно в 38,5, 20,0, 20,0, 50,0 и 40,0% опытов. Несмотря на отсутствие достоверных межгрупповых различий, представленные данные позволяют говорить о тенденции: содержание ЭББАР повышено в группе 4 (анемия) и снижено в группах 2 и 5 (СРД и ФПН).
Количественный анализ механограмм показал (рис. 2, В), что СПК-1:10 (в отличие от СПК-1:100 и 1:50) в группах 1, 2 и 3 не вызывали достоверного изменения ингибирующего эффекта адреналина, в группе 5 они достоверно повышали отрицательный инотропный эффект адреналина (т. е. проявляли /3-адреносенсибилизирующий эффект), и только в-группе 4 они достоверно (р < 0,05) снижали отрицательный хронотропный и суммарный сократительный эффекты адреналина, т.е. оказывали /3-адреноблокирующий эффект. Это означает, что СПК-1:10 не проявляют такого выраженного /3-адреносенсибилизирующего эффекта, как СПК-1:500, СПК-1:100 и СПК-1:50, что можно объяснить наличием в сыворотке ЭББАР, концентрация которого при этом относительно невысокая.
В целом данные о вероятности и выраженности /3-адреноб локирую щей активности небольших разведений СПК позволяют заключить (см. таблицу), что содержание ЭББАР (в сравнении с неосложненным течением беременности и родов) повышено в группе 4 (т. е. при анемии) и снижено в группах 2 и 5 (т. е. при СРД и ФПН).
Характеристика М-холиномодулирующих свойств СПК. Опыты с 399 полосками миометрия показали (рис. 1,Г), что АХ в концентрации 1 мкг/мл при 1-м тестировании достоверно увеличивал фазную С А и частично исходный тонус. На его фоне частота сокращений, их амплитуда и суммарная СА составляла соответственно 174,8±4,4, 121,4±2,3 и 211,9±6,1% от исходного уровня.
Установлено, что характер и интенсивность влияния СПК на М-холинореактивность тест-объекта определяются степенью разведения СПК, а также состоянием матери и плода. Действительно, комплексный анализ механограмм свидетельствует о том, что, как правило, СПК-1:106, СПК-1:104 и СПК-1:103не снижали стимулирующее (инотроп-ное, хронотропное и суммарное) влияние АХ: параметры С А при 2-м тестировании АХ были не меньше, чем при 1-м или 3-м (рис. 2, Г). Например, в серии с СПК-1:10б суммарная С А для группы 1 составила при 1, 2 и 3-м тестированиях АХ соответственно 156,2±14,2, 236,2±18,1 и 171,8±17,9% от фонового уровня (или 147,5±14,2; 176,8±21,1 и 170,5±21,7 мН/10 мин). Визуально-логический анализ механограмм показывает, что в целом М-холиноблокирующий эффект при действии высоких разведений СПК наблюдался относительно редко: для СПК-1:106 в группах 1, 2, 3, 4 и 5 он отмечен соответственно в 7,1, 8,3, 0, 10,0 и 0% опытов, для СПК-1:104 —в 14,3, 25,0, 9,1, 20,0 и 10,0% опытов, а для СПК-1:103 — в 35,7, 33,3,18,2, 30,0 и 30,0% опытов (межгрупповые различия недостоверны, р > 0,1).
В то же время 500-, 100-, 50- и 10-кратные разведения СПК (за счет наличия ЭБМХР) достаточно часто проявляли М-холиноблокирующий эффект, т. е. препятствовали стимулирующему влиянию АХ (рис. 1, Г, рис. 2, Д, Е). Для СПК-1:500 в группах 1, 2, 3, 4 и 5 этот эффект наблюдался соответственно в 57,1, 41,7, 81,8, 50,0 и 50,0% опытов (р2-з < 0,05), для СПК-1:100 — соответственно в 64,3, 83,3, 81,8, 50,0 и 70,0% опытов, для СПК-1:50 —в 78,6, 83,3, 81,8, 70,0 и 90,0% опытов, а для СПК-1:10-в 85,7, 60,0, 70,0, 60,0 и 90,0% опытов (межгрупповые различия для СПК-1:100, 1:50 и 1:10 недостоверны, р > 0,1). Таким образом, во всех группах с уменьшением кратности разведения СПК вероятность наблюдения М-холиноблокирующего эффекта возрастает.
Обращает на себя внимание тот факт, что в группах 2, 3, и 4 СПК-Г.10 проявляют этот эффект реже, чем СПК-1:50; это можно объяснить наличием в СПК-1:10 фактора, препятствующего действию ЭБМХР. Его предлагаем называть эндогенным сенсибилизатором М-холинорецепторов (ЭСМХР).
Количественный анализ механограмм показал (рис. 2,Д, В), что во всех пяти группах в сериях с СПК-1:500, 1:100, 1:50 и 1:10 стимулирующий эффект АХ при
2-м тестировании был значительно (и, как правило, достоверно) меньше, чем при 1-м или 3-м тестированиях. Так, суммарная С А в группах 1-5 при 1,2 и 3-м тестированиях АХ в серии с СПК-1:500 повышалась соответственно до 188-237, 140— 195 и 167-198% от фонового уровня, в серии с СПК-1:100 — соответственно до 174236, 95-128 и 165-227%* в серии с СПК-1:50-до 168-229, 93-106 и 167-238%, а в серии , с СПК-1:10 —до 193-249, 76-104 и 163-221% (для сравнения: в серии с СПК-1:106 суммарная СА повыщалась соответственно до 156-188, 179-329 и 158-176%, в серии с СПК-1:104 — до 166-211, 186-250 и 137-199%, а в серии с СПК-1:103-до 186-222, 177-219 и 161-192%). В качестве примера приведем данные, отражающие М-холиноблокирующую активность СПК группы 1: суммарная С А при 1, 2 и 3-м тестировании АХ в серии с СПК-1:500 достигала соответственно 211,4±20,5, 193,4±19,8 и 192,3±29Д% (или 133,0±14,4; 115,9±12,6 и 124,3±11,8 мН/10 мин), в серии с СПК-1:100 - соответственно 210,9±24,1,118,1±9,4 и 227,3±31,9% (или 158,7±16,3; 113,0±11,9 и 148,8±14,1 мН/10 мин); в серии с СПК-1:50-соответственно 228,8±37,4, 104,4±7,4 и 237,6±30,1% (или 152,7±12,5; 105,1±10,0 и 140,7±13,5 мН/10 мин), а в серии с СПК-1:10 —соответственно 227,5±25,9, 86,6±6,9 и 199,0±31,8% (или 154,0±19,1; 119,3±13,6 и 137,7±12,2 мН/10 мин).
• Количественный анализ механограмм (см. рис. 2,Д) показал, что под влиянием СПК-1:500 достоверно (р < 0,05) снижался стимулирующий эффект АХ только в группе 3 (хронотропный и инотропный эффекты) и в группе 4 (хронотропный, ино-тропный и суммарный эффекты). При этом в :руппе 4 при 2-м тестировании АХ частота сокращений полосок была достоверно (р < 0,05). ниже, чем в группах 1 и 2 (соответственно 119,8±11,8% против 175,4±13,5 и 175,2±17,8%), а суммарная СА — ниже, чем в группах 2 и 5 (соответственно 90,9±12,9 мН/10 мин против 132,9±13,9 и 153,74±23,0 .мН/10 мин). Все приведенные данные свидетельствуют о том, что М-холиноблокирующая активность СПК-1:500 в группах 3 и 4 явно выше, чем в группах 1, 2 и 5.
СПК-1:100, 1:50 и 1:10 (рис. 2,Е), судя по изменению абсолютных или относительных параметров С А, достоверно снижали стимулирующие эффекты АХ, в том числе его хронотропный (все группы), инотропный (СПК-1:50 —в группах 1, 4 и 5; СПК-1:10 —в группах 3, 4 и 5) и суммарный эффекты (во всех группах). Существенных межгрупповых различий для СПК-1:100 и СПК-1:50 не обнаружено. В то же время для СПК-1:10 выявлены достоверные межгрупповые различия: их М-холиноблокирующий эффект в группе 5 оказался выше, чем в группе 1 (судя по инотропному эффекту) и в группах 2, 3; и 4 (судя по хронотропному и суммарному эффекту). Так, при 1, 2 и 3-м тестированиях АХ частота СА в группе 5 составила соответственно 146,4±8,9,81,5=Ы,3 и 125,8±5,5% от фонового уровня, а в группе 1 — соответственно 186,4+21,5, 84,7±7,5 и 180,8±26,6% от фонового уровня, амплитуда СА в группе 5 составила 128,5±6,7, 92,4±3,6 и 130,0±5,0%, а в группе 1 — соответственно 112,1±8,4,104,9±4,0 й 105,5±5,1%; суммарная СА в группе 5 составила соответственно 182,6±9,3, 76,4±4,0 и 163,3±8,2%, а в группе 1 соответственно 170,5±28,1, 86,6±6,7 и 198,9±31,8%. Все эти данные можно объяснить тем, что в СПК-1:10 находится фактор, препятствующий проявлению М-холиноблокирующей активности, т. е. ЭСМХР; его уровень в группе 5, т. е. при ФПН, вероятно, ниже, чем в группах 1, 2, 3 и 4 (это объясняет высокую М-холиноблокирующую активность СПК группы 5, т. е. при ФПН).
В целом можно утверждать (см. таблицу), что СПК содержит два М-холиномодули-рующих фактора — ЭБМХР и ЭСМХР, из которых первый (ЭБМХР) снижает М-холи-норекктивность, а второй (ЭСМХР) повышает ее. По сравнению с группой 1 (неослож-
ненное течение беременности и родов) содержание ЭБМХР повышено в группах 3 и 4 (поздний гестоз и анемия беременных), а содержание ЭСМХР снижено в группе 5 (ФПН). '
Суммируя представленные данные (см. таблицу), можно утверждать, что СПК новорожденных содержит: 1) эндогенный утеростимулятор (в сравнении с неосложнен-ным течением беременности и родов его уровень снижен при СРД, позднем гестозе и анемии и повышен при ФПН); 2) связанный утероингибитор, отражающий содержа- ' ние в крови агонистов /3-адренорецепторов (его уровень повышен при СРД и анемии); 3) свободный утероингибитор (его содержание повышено при СРД); 4) ..ЭББАР (его содержание повышено при анемии и снижено при СРД и ФПН); 5) ЭСБАР (его содержание повышено при СРД и снижено при позднем гестозе, анемии.и ФПН) ; 6) ЭБМХР (его содержание повышено при позднем гестозе и анемии); 7) ЭСМХР (его содержание снижено при ФПН).
Обсуждение результатов
СПК содержит связанный утероингибитор (он обнаруживается при исследовании преимущественно СПК-1:106 и СПК-1:104), который отражает содержание сорбированного на белках сыворотки эндогенных агонистов (3-АР. Роды, как известно [8], являются стрессовой ситуацией, поэтому наличие в крови связанных агонистов /3-АР — вполне закономерное явление. Таким образом, можно считать, что связанный утероингибитор косвенно отражает уровень стресса, испытывающих в родах матерью и плодом.
Кроме того, СПК содержит свободный утероингибитор (выявляется при исследовании СПК-1:10 и в меньшей степени СПК-1:50 и СПК-1:100), который во время родов, возможно, участвует в торможении чрезмерной сократительной деятельности матки, предохраняя плод от повреждения. Это положение, однако, требует доказательств, в частности, в экспериментах с изолированным миометрием женщин.
СПК также содержит эндогенный утеростимулятор (он выявляется при исследовании СПК-1:500, СПК-ЫОО, СПК-1:50 и СПК-1:10), который по своей природе, учитывая данные из работы [9], вероятно, является комплексом олигопептидов или, как нам представляется, одним из белков системы комплемента: Ранее было показано [6, 15], что 1Q0- и 50-кратные разведения сыворотки крови женщин способны повышать СА изолированного миометрия женщин. Это дает основание полагать, что эндогенный утеростимулятор может усиливать родовую деятельность.
Установлено, что СПК новорожденных содержит хемомодулирующие факторы прямого (срочного) действия, в том числе ЭББАР (выявляется при исследовании СПК-ЫОО, 1:50 и. 1:10), ЭСБАР (СПК-1:103,' 1:500, 1:100, 1:50, 1:10), ЭБМХР (СПК-1:500, 1:100, 1:50, 1:10) и ЭСМХР (СПК-1:10).
Очевидно, как это и постулировалось концепцией о /3-адренергическом механизме (/3-АЭМ), ЭББАР, эффект которого [4] воспроизводится дофамином, предназначен для уменьшения тормозного влияния агонистов /?-АР на миометрий, т. е. для индукции родовой деятельности. Напротив, ЭСБАР, функцию которого [5, 9, 15] могут реализовать гистидин, тирозин и триптофан и содержание которого накануне родов существенно снижается, необходим во время родового акта для подавления чрезмерной родовой деятельности.
Выявляемый в сыворотке ЭБМХР, функцию которого выполняет лизофосфатидил-холин или, судя по данным работ [7, 10, 17, 18], олигопептиды, уменьшает влияние М-холинергического механизма (парасимпатической системы и плацентарного ацетил-холина) на деятельность сосудов и других внутренних органов, что, вероятно, спо-
собствует вегетативному обеспечению сократительной деятельности матки (СДМ) во время родов, в то время как ЭСМХР, природа и свойства которого пока неизвестны, наоборот, усиливает эти влияния.
Таким образом, наши исследования показывают, что СПК новорожденного (и, очевидно, в целом система <шать —плод») содержит «антагонистические» факторы (уте-ростимулятор — утероингибитор, ЭББАР —ЭСБАР, ЭБМХР — ЭСМХР), принимающие участие в гуморальной регуляции СДМ и ее вегетативном обеспечении. Их содержание, как свидетельствуют результаты наших исследований, во многом зависит от состояния матери, плода и характера родовой деятельности.
Действительно, исследования показали, что роды при СРД протекают на фоне высокого содержания агонистов ¡3-АР (вследствие выраженного эмоционального и физического стресса), низкого содержания утеростимулятора, избыточного содержания свободного утероингибитора, а также при наличии выраженного влияния на миомет-рий /3-АЭМ (за счет высокого содержания ЭСБАР и низкого содержания ЭББАР). Все это объясняет характерное для СРД затяжное течение родов. Таким образом, результаты наших исследований согласуются с представлением некоторых авторов [11, 15] о СРД как следствии недостаточного предродового снижения силы /3-АЭМ.
Наши исследования показали, что роды при позднем гестозе проходят на фоне повышенного содержания ЭБМХР, т. е. при снижении «силы» М-холинергического механизма (это, возможно, способствует оптимальному вегетативному обеспечению родовой деятельности), на фоне пониженного содержания ЭСБАР (это создает условие для активации СДМ) и сниженного содержания утеростимулятора (это препятствует родовой деятельности). Следовательно, роды при гестозе могут принимать затяжной характер (при выраженном снижении содержания эндогенного утеростимулятора) либо, наоборот, могут быть быстрыми (при значительном снижении «силы» /3-АЭМ), как это установлено для группы 3. Следует отметить, что у женщин с поздним гестозом нами не выявлено избыточного содержания ЭСБАР в системе «мать — плод», как это отмечалось ранее [1, 3,15]. Это означает, что при позднем гестозе предродовое снижение содержания ЭСБАР более выражено, чем при неосложненном течении беременности.
При анемии беременных роды проходят на фоне повышенного содержания ЭБМХР (т.е. при снижении «силы» М-холинергического механизма), на фоне пониженного содержания ЭСБАР и повышенного содержания ЭББАР, т.е. при снижении «силы» /3-АЭМ, что обеспечивает быстрое их течение, а также на фоне снижения содержания эндогенного утеростимулятора, что тормозит СДМ. Таким образом, доминирование предродового снижения «силы» /3-АЭМ повышает вероятность быстрого течения родов при анемии (как это установлено для группы 4), что можно расценивать как отражение формирования условий, обеспечивающих оптимальную скорость родов при наличии у матери и плода явлений гипоксии. Повышенное содержание связанного утероингибитора, выявленное при анемии беременных, скорее всего, является следствием увеличения доли агонистов /3-АР, которые не .могут быть связаны эритроцитами (из-за их малочисленности), а потому связываются белками сыворотки крови.
Роды при ФПН, согласно нашим данным, проходят в условиях снижения «силы» М-холинергического механизма (за счет уменьшения содержания ЭСМХР), а также на фоне высокого содержания эндогенного утеростимулятора (это активирует родовую деятельность) при недостаточном предродовом снижении «силы» /3-АЭМ (уменьшение содержания ЭСБАР происходит без выраженного повышения содержания ЭББАР). Таким образом, характер течения родовой деятельности при ФПН должен зависеть от результирующей этих изменений,
Касаясь возможного участия исследованных утероактивных, /3-адреномодулиру-ющих и М-холиномодулирующих факторов в патогенезе позднего гестоза, анемии беременных и ФПН, отметим, что этот вопрос требует дополнительного исследования. Конечно, нельзя исключить, что Сформированию позднего гестоза способствует повышенное содержание ЭБМХР в системе «мать — плод» (так как снижение М-холинореактивности сердца повышает вероятность развития гипертензии при этом состоянии). Развитию анемии беременных может способствовать снижение «силы» /3-АЭМ (уменьшение содержания ЭСБАР и рост содержания ЭББАР) и М-холинергического механизма (повышение содержания ЭБМХР). В патогенезе ФПН определенную роль могут играть снижение при беременности «силы» ¡3-АЭМ (уменьшение содержания ЭСБАР) и повышение содержания эндогенного утеростимулятора, что в комплексе может повышать тонус гладких мышц сосудов маточно-плацентарно-плодового комплекса (сосудов пуповины и сосудов миометрия) и тем самым снижать эффективность кровотока в системе «мать — плод». Таким образом, необходимы дополнительные исследования об участии утероактивных и хемомодулирующих факторов в патогенезе акушерских осложнений.
В целом представленные данные позволяют сделать два вывода.
1. Для нормального течения родов необходимо оптимальное соотношение гуморальных компонентов /3-адренергического и М-холинергического механизмов, а также эндогенных утероактивных факторов. Оно формируется в зависимости от состояния матери и плода накануне родов и, вероятно, корректируется на протяжении родов. Неадекватное формирование такого соотношения приводит к развитию аномалий родовой деятельности, например слабости родовой деятельности.
2. Рождение плодов, внутриутробное развитие которых происходит при наличии акушерской патологии (например, позднего гестоза, анемии, фетоплацентарной недостаточности), совершается на фоне более выраженного (по сравнению с неослож-ненным течением беременности) предродового снижения «силы» /?-адренергического и М-холинергического механизмов, что, вероятно, способствует соответственно более быстрому течению родового а.та и высокой эффективности вегетативного обеспечения родовой деятельности в таких условиях.
Summary
Tsirkin V.I., Nozdrachev A.D., Sazanova M.L., Dvoryansky S.A., Khlyibova S.V. Cheraomod-. ulatory and uteroactive properties of human umbilical blood serum.
Chemomodulatory and uteroactive factors content in human umbilical blood serum (UBS) of 129 new-born children were studied. The influence of different dilutes (lp.06, 1:104, 1:103, 1:500, 1:100, 1:50, 1:10) of UBS on spontaneous and induced by adrenalin (10 ng/ml) or acetylcholine (1 mcg/ml) motility of 653 longitude myometrium strips from 111 nonpregnant rats was estimated. It was established that UBS contained endogenous uterostimulator, combined uteroinhibitor, free uteroinhibitor, endogenous blocker of /З-adrenoredeptors, endogenous sensibilizator of /З-adrenoreceptors, endogenous blocker of M-cholinoreceptors and endogenous sensibilizator of M-cholinoreceptors. Those factors participate in humoral regulation of uterus contractility and its vegetative providing. It was concluded that the birth of children which intrauterine development was complicate with obstetric pathology proceeded against the background of more expressed prelabor lowering of /3-adrenergic and M-cholinergic mechanisms «power».
Литература
1. Гусева Е.В., Дворянский С.А., Циркин В. И. /3-адренореактивность эритроцитов женщин при нормальных и осложненных родах // Акушерство и гинекология. 1998. №4. С. 17-22. 2. Колобова Е.В., Дворянский С.А., Ноздрачев А.Д., Циркин В.И. Оценка /З-адренореактивности эритроцитов по скорости их оседания на фоне адренергических средств // Докл. РАН. 1998. Т. 358, №5. С. 695-698. 3. Колобова Е.В., Дворянский С.А., Циркин В.И. Оценка ß-адренореактивности эритроцитов'у рожающих женщин // Физиология человека. 1998. Т. 24, №3. С. 134-142. 4. Морозова М.А., Циркин В.И., Дворянский С.А. Возможный механизм и роль «физиологической десимпатизации» миометрия человека и животных на разных этапах репродуктивного процесса // Адренергический механизм как компонент системы регуляции сократительной деятельности матки при беременности и в родах —физиологические и клинические аспекты. Киров, 2001. С. 57-61. 5. Ноздрачев АД., Туманова Т.В., Дворянский С.А. и др. Активность ряда аминокислот как возможных сенсибилизаторов /?-адренорецепторов гладкой мышцы // Докл. РАН. 1998. Т. 363, № 1. С. 133-136. 6. Помас-кин И.Н. Клинико-экспериментальная характеристика /3-адренорецепторного ингибирующего механизма у беременных и рожениц: Автореф. канд. дис. Омск, 1990. 19 с. 7. Проказова Н.В, Звездина Н.Д., Суслова И.В. и др. Влияние лизофосфатидилхолина на чувствительность сердца к ацетилхолину и параметры связывания хинуклидинилбензилата с мембранами миокарда // Российский физиол. журн. 1998. Т. 84, №10. С. 969-978. 8. Серов В.Н., Стрижаков А.Н., Маркин С.А. Практическое акушерство. М., 1997. 9. Туманова Т.В., Циркин В.И., Дворянский С.А. /3-адреномодулирующее действие ароматических аминокислот //Адренергический механизм как компонент системы регуляции сократ:; - гльной деятельности матки при беременности и в родах — физиологические и клинические аспекты. Киров, 2001. С. 48-51. 10. Ха-винсон В.Х., Кожемякин А.Л, Федин А.Н. и др. Релаксирующее действие олигопептидов, выделенных из слизистой трахеи и легочной паренхимы, на гладкую мускулатуру трахеи крыс // Бюл. эксп. биол. и мед. 1992..Т. 113, №5. С. 483-486. 11. Хлыбова С.В:, Дворянский С.А., Циркин В.И. Адренергический механизм при беременности и в родах, его роль в патогенезе слабости родовой деятельности // Там же. С. 24-28. 12. Циркин В.И., Дворянский С.А., Осокина A.A. и др. Способность сыворотки крови человека ингибировать сократительную реакцию миометрия на ацетилхолин // Лекарственное обозрение. Киров, 1996. К24. С. 49-54.
13. Циркин В.И., Дворянский С.А., Джергения С.Л. и др. /3-адреномиметический эффект сыворотки крови человека и животных // Физиология человека. 1997а. Т. 23, №3. С. 88-96.
14. Циркин В.И., Дворянский С.А., Ноздрачев АД. и др. Адреномодулирующие эффекты крови, ликвора, мочи, слюны и околоплодных вод человека // Докл. РАН. 19976. Т. 352, №1. С. 124-126. 15. Циркин В.И., Дворянский С.А. Сократительная деятельность матки (механизмы регуляции). Киров, 1997. 16. Циркин В.И., Ноздрачев АД., Дворянский С.А. и др. Эндогенный сенсибилизатор /3-адренорецепторов // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 1997в. Вып. 1 (№3). С. 74-84. 17. Tessier G., Lackner P., O'Grandy S. et al. Modulation of equine tracheal smooth muscle contractility by epithelial-derived and cyclooxygenase metabolites // Respir. Physiol. 1991. Vol. 84, N 1. P. 105-114. 18. Xie L., Hacoda H., Ato Y. Airway epithelial cells regulate membrane potential neurotransmission and muscle tone of the dog airway smooth muscle // J. Physiol. 1992. Vol. 449. P. 619-630. ' .
Статья поступила в редакцию 7 октября 2002 г.
