CC BY
21
ции, тогда как у животных без симптомов ЭАЭ не наблюдалось статистически достоверного уменьшения зон миграции клеток под влиянием ОБМ на протяжении 5 недель. Таким образом, РТМЛ на ОБМ удалось выявить преимущественно у заболевших животных, что указывает на тесную связь этих реакций с развитием патологического процесса и их прогностическое значение в отношении неврологических расстройств.
Спектры, полученные от мозга здоровых животных, позволили оценить содержание метаболитов: N ацетил аспартата ЫАА (213,46ррм), холина СЬо (44,93 ррм), креатина Сг (76,47 ррм), инозитола 1п (71,15 ррм). У легко болевших крыс (КИ=1) спектры отличались от контрольных незначительно. У тяжело болевших животных (КИ=3) в 21 раз уменьшены пики N АА и в 7,6 раза Сг, пик СЬо увеличен в 4,1 раза, а также появился двойной пик липидов (60,50 ррм и 38,06 ррм). Можно предположить, что незначительные отклонения в содержании метаболитов связаны с временной дисфункцией клеток, вызванной воспалительными реакциями. Существенное снижение ЫАА (до 5%)иСг (до 14%), при наличии пика липидов, свидетельствует о необратимости патологического процесса, сопровождающегося нарушением энергетического метаболизма и гибелью нервных клеток.
Исследование показало, что метод протонной магнитно-резонансной спектроскопии перспективен для диагностики стадии и мониторинга лечения демиелини-зирующих заболеваний ЦНС в клинике.
Влияние гемоперфузии на пролиферацию и индукцию поликлональной дифференцировки В-лимфоцитов в антитилообразующие клетки различной специфичности
Канаев П. А., Кузнецов С.И., Блинов Н.П.,
Эйсмонт Ю. А.
Медицинская академия последипломного образования Санкт-Петербург, Россия
Как известно, при проведении гемоперфузии через различные сорбенты в организме индуцируется выработка цитокинов. В связи с этим представляется интересным рассмотреть, какое влияние оказывает гемоперфузия на индукцию поликлональной дифференцировки и пролиферации В-лимфоцитов в антителообразующие клетки (АОК) в интактном организме. Учитывая многогранность воздействия на организм гемоперфузии, мы предположили, что в организме мышей могут находиться примированные клоны В-клеток к стохастически выбранным нами антигенам — бычьему сывороточному альбумину (БСА), человеческому гамма-глобулину (ЧГГ), и убитым нагреванием клеткам С.аИэкапБ.
Опыты по гемоперфузии через сорбенты — угольный сорбент СКН-2К, полисахаридные сорбенты агарозу 4В и ГПА (гранулированный поперечно-сшитый ауба-
зидан) проводили на белых беспородных мышах. Животных, находящихся под нембуталовым наркозом и после соответствующей гепаринизации, подключали к колонке, заполненной сорбентом по схеме вена-вена. На 1-е, 5-е и 14-е сутки после проведения гемоперфузии выявляли АОК в селезенке мышей методом иммунофер-ментных зон “Элиспот”.
Результаты показали, что количество АОК в селезенке мышей после гемоперфузин не отличается от контролен. Эти данные свидетельствуют о том, что предсуществую-щие клоны клеток-антнтелопродуцентов к выбранным антигенам присутствуют в селезенке мышей, однако гемоперфузия через апробированные сорбенты не приводит к увеличению их количества, то есть не вызывает диф-ференцировку и пролиферацию В-лимфоцитов данной специфичности. Отсутствие усиления антителопродукции было подтверждено и при регистрации антител данной специфичности в сыворотке мышей в те же сроки методом иммуноферментного анализа.
Гомология между антигенными детерминантами дифтерийного токсина и белками человека
Канаев П.А., Кузнецов С.И., Носикова Е.В., Коростелева Ю.Г., Ткжавин А.И.
Медицинская академия последипломного образования
Санкт-Петербург, Россия
В настоящее время принято считать, что основным фактором патогенности С.сНрЫЬепае является токсин белковой природы (ДТ). Однако еще не до конца раскрыты механизмы токсического действия ДТ, участие которого предполагается в генезе дифтерийных осложнений.
Нами, методом компьютерного моделирования, выявлены гомологичные участки между С-концом В-цепи ДТ и белками человека. При этом наиболее выражена гомология в области антигенных детерминант. В данной работе представлен только наиболее высокий (более 80%) процент гомологии между ДТ и белками человека, который указан ниже по классам белковых молекул (в скобках указан процент гомологии по антигенным детерминантам):
1. Мембраносвязанные белки—интегрин 3 (86,1), рецептор к фактору роста фибробластов (85,5), белок клеточной адгезии для нейронов (82,0), протеолипид (82,0).
2. Белки ферментативных каскадных систем — фактор Хагемана (82,1), фактор коагуляции XI (84,6), компоненты комплемента С1 г (83,0) и С 15(88,0).
3. Ростовые факторы и цитокины — нейротрофин 3 (90,6), фактор роста фибробластов (82,6), нейротрофный фактор (82,3), лимфотоксин (93,8), фактор некроза опухолей (97,4).
Как видно, наиболее высокая гомология определяется между антигенными детерминантами С-конца В-цепи
ДТ и N-концом (с 6 по 11 амнокислотный остаток) фактора некроза опухолей (ФНО). Имеются прямые данные, что антитела к N-концуФНО (с 1 по 15 аминокислотный остаток) блокирует связь с рецептором. Можно предположить, что С-конец В-цепи ДТ вовлечен во взаимодействие с рецептором к ФНО. Это может вызывать цитоток-сический эффект, сходный с эффектом ФНО.
Антигенные детерминанты, расположенные в С-кон-цевой части ДТ, способны провоцировать выработку перекрестных антител против белков макроорганизма, что может привести к нарушению иммунных реакций и нарушению иммунного гомеостаза при дифтерийной инфекции. Учитывая высокую гомологию ДТ с другими белками организма, образование (или введение) ани-токсических антител может вызывать аутоиммунные расстройства.
Цитокины и их антигонисты: теория и практика
Кетлинский С.А., Ищенко А.М.
Государственный научный центр особо чистых
биопрепаратов
Санкт-Петербург
Цитокины и их антагонисты осуществляют необходимый баланс, обеспечивая и ограничивая цитокин-за-висимые функции организма. Этот антагонизм прослеживается между цитокинами ТН1 и ТН2, между провос-папительными и противовоспалительными интерлейкинами, между цитокинами и их секреторными рецепторами, между цитокинами и антителами против них и в конкуренции за связывание общего рецептора.
В опытах на животных и культивируемых клетках, на трансгенных и нокаут мышах антицитокиновая теория находит как подтверждение, так и опровержение. Так мыши, несущие двойную мутацию генов ФНО и ЛТ, утрачивают резистентность к Staphylococcus aureus. С другой стороны, мыши, с отсутствием гена ФНО или ФНО-рецептора, нечувствительны к шоку, вызываемому эндотоксином. Эти и многие подобные примеры показывают, что цитокины, в первую очередь, должны рассматриваться как факторы защиты организма от патогенов. Об этом свидетельствует закрепление структуры цито-кинов в эволюции животного мира. Во-вторую очередь можно изучать, какую роль играют цитокины в патогенезе ряда заболеваний, и приведет ли их блокирование к излечению.
Клиническое использование антагонистов цитокинов, как показала практика, оказалось малоэффективным. Особенно ярко это прявилось в использовании антагонистов противовоспалительных цитокинов в лечении шоковых состояний и ряда аутоиммунных заболеваний.
В докладе будут приведены данные литературы и собственные результаты исследований, указывающие на неоднозначность взаимодействий между цитокинами и их “антагонистами”.
Экстракорпоральное кровообращение -модулятор антителопродукции
Кузнецов С.И., Канаев П. А., Тюкавин А.И.
Медицинская академия последипломного образования Санкт-Петербург, Россия
Гемоперфузия через сорбенты приводит к новым функциональным взаимоотношениям систем, определяющих, в том числе, и иммунный ответ организма. Это может быть обусловлено изменениями как на уровне отдельных структурных элементов иммунитета, так и при кооперативных взаимоотношениях клеточных и гуморальных факторов системы защиты. Целью настоящего исследования явилась оценка влияния экстракорпоральной гемоперфузии с включением во внешний контур Агарозы 4Б (крупнозернистая агарозная матрица, служащая для получения селективных сорбентов различной специфичности) на синтез и секрецию специфических антител у мышей, иммунизированных эритроцитами барана (ЭБ). Регистрацию антител образующих клеток (АОК) осуществляли в реакции локального гемолиза в геле. Гемоперфузию у мышей, находящихся под нембуталовым наркозом, проводили по схеме вена —> вена со скоростью 1-3 мл/ч, объем колонки составлял 0,1 мл, время гемоперфузии — 10-15 мин. В качестве групп сравнения анализировали: интактных животных; мышей, наркотизированных нембуталом; гепаринизированных животных на фоне нембуталового наркоза и наркотизированных и гепаринизированных мышей, которым проводили гемоперфузию через колонку без сорбента (“холостая” гемоперфузия). Указанные выше воздействия осуществляли на 1,2,3 и 4 дни после иммунизации животных. Учет АОК во всех группах мышей проводили на 5 сутки после введения ЭБ. Наряду с регистрацией АОК, у этих же животных определяли изменение массы селезенки в каждой группе. Для этого использовали показатель (К), который рассчитывали так: К=(вес селезенки/вес мышей) х 100.
Достоверное снижение индекса К было отмечено только в одной группе при наркотизации мышей нембуталом в первые сутки после введения ЭБ. В остальных группах не наблюдали существенных сдвигов в массе селезенки. Иная картина была отмечена при регистрации клеток-антителопродуцентов. Любые воздействия на организм мышей существенно влияли на дифференцировку В-лим-фоцитов в специфические клетки-антителопродуценты на разных фазах иммунного ответа. Нембутал и нембутал совместно с гепарином снижали количество АОК при инъекции этих препаратов в начальной индуктивной фазе ответа. Экстракорпоральное кровообращение через колонку без сорбента, наоборот, снижало количество АОК, начиная со 2 суток, причем к 4 суткам антителогенез имел тенденцию к увеличению. Гемоперфузия через колонку с агарозой 4Б приводила к достоверному изменению количества клеток-антителопродуцентов на любые сутки использования сорбента по сравнению с интактными животными. Если проведенная гемоперфузия на 1,3 и 4 сутки значительно повышала число АОК в селезенке, то
