CC BY
22
ДТ и N-концом (с 6 по 11 амнокислотный остаток) фактора некроза опухолей (ФНО). Имеются прямые данные, что антитела к N-концуФНО (с 1 по 15 аминокислотный остаток) блокирует связь с рецептором. Можно предположить, что С-конец В-цепи ДТ вовлечен во взаимодействие с рецептором к ФНО. Это может вызывать цитоток-сический эффект, сходный с эффектом ФНО.
Антигенные детерминанты, расположенные в С-кон-цевой части ДТ, способны провоцировать выработку перекрестных антител против белков макроорганизма, что может привести к нарушению иммунных реакций и нарушению иммунного гомеостаза при дифтерийной инфекции. Учитывая высокую гомологию ДТ с другими белками организма, образование (или введение) ани-токсических антител может вызывать аутоиммунные расстройства.
Цитокины и их антигонисты: теория и практика
Кетлинский С.А., Ищенко А.М.
Государственный научный центр особо чистых
биопрепаратов
Санкт-Петербург
Цитокины и их антагонисты осуществляют необходимый баланс, обеспечивая и ограничивая цитокин-за-висимые функции организма. Этот антагонизм прослеживается между цитокинами ТН1 и ТН2, между провос-папительными и противовоспалительными интерлейкинами, между цитокинами и их секреторными рецепторами, между цитокинами и антителами против них и в конкуренции за связывание общего рецептора.
В опытах на животных и культивируемых клетках, на трансгенных и нокаут мышах антицитокиновая теория находит как подтверждение, так и опровержение. Так мыши, несущие двойную мутацию генов ФНО и ЛТ, утрачивают резистентность к Staphylococcus aureus. С другой стороны, мыши, с отсутствием гена ФНО или ФНО-рецептора, нечувствительны к шоку, вызываемому эндотоксином. Эти и многие подобные примеры показывают, что цитокины, в первую очередь, должны рассматриваться как факторы защиты организма от патогенов. Об этом свидетельствует закрепление структуры цито-кинов в эволюции животного мира. Во-вторую очередь можно изучать, какую роль играют цитокины в патогенезе ряда заболеваний, и приведет ли их блокирование к излечению.
Клиническое использование антагонистов цитокинов, как показала практика, оказалось малоэффективным. Особенно ярко это прявилось в использовании антагонистов противовоспалительных цитокинов в лечении шоковых состояний и ряда аутоиммунных заболеваний.
В докладе будут приведены данные литературы и собственные результаты исследований, указывающие на неоднозначность взаимодействий между цитокинами и их “антагонистами”.
Экстракорпоральное кровообращение -модулятор антителопродукции
Кузнецов С.И., Канаев П. А., Тюкавин А.И.
Медицинская академия последипломного образования Санкт-Петербург, Россия
Гемоперфузия через сорбенты приводит к новым функциональным взаимоотношениям систем, определяющих, в том числе, и иммунный ответ организма. Это может быть обусловлено изменениями как на уровне отдельных структурных элементов иммунитета, так и при кооперативных взаимоотношениях клеточных и гуморальных факторов системы защиты. Целью настоящего исследования явилась оценка влияния экстракорпоральной гемоперфузии с включением во внешний контур Агарозы 4Б (крупнозернистая агарозная матрица, служащая для получения селективных сорбентов различной специфичности) на синтез и секрецию специфических антител у мышей, иммунизированных эритроцитами барана (ЭБ). Регистрацию антител образующих клеток (АОК) осуществляли в реакции локального гемолиза в геле. Гемоперфузию у мышей, находящихся под нембуталовым наркозом, проводили по схеме вена —> вена со скоростью 1-3 мл/ч, объем колонки составлял 0,1 мл, время гемоперфузии — 10-15 мин. В качестве групп сравнения анализировали: интактных животных; мышей, наркотизированных нембуталом; гепаринизированных животных на фоне нембуталового наркоза и наркотизированных и гепаринизированных мышей, которым проводили гемоперфузию через колонку без сорбента (“холостая” гемоперфузия). Указанные выше воздействия осуществляли на 1,2,3 и 4 дни после иммунизации животных. Учет АОК во всех группах мышей проводили на 5 сутки после введения ЭБ. Наряду с регистрацией АОК, у этих же животных определяли изменение массы селезенки в каждой группе. Для этого использовали показатель (К), который рассчитывали так: К=(вес селезенки/вес мышей) х 100.
Достоверное снижение индекса К было отмечено только в одной группе при наркотизации мышей нембуталом в первые сутки после введения ЭБ. В остальных группах не наблюдали существенных сдвигов в массе селезенки. Иная картина была отмечена при регистрации клеток-антителопродуцентов. Любые воздействия на организм мышей существенно влияли на дифференцировку В-лим-фоцитов в специфические клетки-антителопродуценты на разных фазах иммунного ответа. Нембутал и нембутал совместно с гепарином снижали количество АОК при инъекции этих препаратов в начальной индуктивной фазе ответа. Экстракорпоральное кровообращение через колонку без сорбента, наоборот, снижало количество АОК, начиная со 2 суток, причем к 4 суткам антителогенез имел тенденцию к увеличению. Гемоперфузия через колонку с агарозой 4Б приводила к достоверному изменению количества клеток-антителопродуцентов на любые сутки использования сорбента по сравнению с интактными животными. Если проведенная гемоперфузия на 1,3 и 4 сутки значительно повышала число АОК в селезенке, то
1999, Т. 1, № 3-4
Иммунорегуляция
использование этой процедуры на 2 сутки также достоверно уменьшало количество плазматических клеток. Контакт крови с агарозой 4Б на 3 и 4 сутки существенно повышал антителопродукцию и по сравнению с “холостой” гемоперфузией в тс же сроки.
Таким образом, перфузия крови через гемоконтакт-ные препараты существенно влияет на процесс специфической антителопродукции в организме иммунизированных животных.
Индукция провоспалительных цитокинов in vitro иммунными комплексами, выделенными из плазмы больных ревматоидным артритом
Кузнецова С.А., Косицкая Л.С., Колосков A.B., Дорофейков В. В., ФрсПдлин И.С.
НИИ экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург
Патогенетическая роль иммунных комплексов (ИК) в патогенезе ревматоидного артрита (РА) не вызывает сомнений. Исследованиями последних лет убедительно показана важная роль цитокинов, которые продуцируются активированными клетками и участвуют в процессах воспаления и деструкции тканей. Однако взаимосвязь продукции цитокинов с циркулирующими ИК до сих пор недостаточно изучена. Ранее нами было показано, что агрегированный человеческий сывороточный иммуноглобулин М, использованный в качестве модели ИК, значительно увеличивает продукцию ТНФ-а, ИЛ-1 ß, ИЛ-6, ИЛ-8 клетками периферической крови здоровых доноров. Целью настоящей работы было выделить и охарактеризовать ИК из плазмы больных РА и изучить их влияние на клетки крови здоровых доноров. ИК выделяли из плазмы больных РА (п=4), полученной путем плазмофереза (любезно предоставленной нам в ревматологическом центре Городской больницы № 25), с помощью водно-кислотного метода и растворяли в культуральной среде таким образом, чтобы концентрация ИК соответствовала исходной в плазме больного. Для характеристики полученных препаратов ИК использовали методы: осаждения полиэтиленпликолем, сорбции ге-терологичного комплемента, определения концентрации белка и концентрации иммуноглобулинов разных классов в составе ИК. Гепаринизированную цельную кровь (п=8) от здоровых доноров (любезно предоставленную нам в ге-матрансфузионном центре городской больницы № 26) разводили в 10 раз культуральной средой и инкубировали в течение 24 часов в присутствии ИК. Количество ТНФ-а и ИЛ-1 ß в надосадочной жидкости определяли методом им-муноферментного анализа. После инкубации с препаратами ИК от разных больных продукция ТНФ-а и ИЛ-1 ß дозозависимо возрастала. В случае инкубации с препаратами ИК в присутствии нейтрализующей антисыворотки к человеческому ИЛ-10 наблюдали дозозависимое увеличение уровней продукции ТНФ-а и ИЛ-1 ß. Таким образом,
мы показали, что ИК, циркулирующие в кровяном русле больных РА, индуцируют продукцию провоспалительных цитокинов, которая может быть ограничена эндогенным ИЛ-10, индуцированным теми же ИК. Эти результаты говорят о том, что ИК индуцируют секрецию клетками крови провоспалительных и противовоспалительных шггоки-нов, которые могут участвовать в патогенезе иммуноком-плексных заболеваний.
Работа поддержана фантом РФФИ № 97-04-48889.
Особенности Са2+-зависимой внутриклеточной сигнализации в Т-лимфоцитах памяти
Ли гвннов И.С.1, Дедкова Е.Н.\ Хайдуков С.В.', Агафонова С.А.1,Зинченко В.П.2
'Институт биоорганическойХимии
им. М. М.Шемякина иЮ.А. Овчинникова РАН,
лаборатория иммунохимии,
'Институт биофизики клетки РАН
В процессе иммунного ответа в организме формируется пул клеток памяти, обеспечивающий ускоренный и больший по амплитуде ответ при повторном попадании того же самого антигена. Несмотря на значительное количество исследований, сведения о механизмах формирования и поддержания иммунологической памяти, а также свойствах клеток памяти весьма фрагментарны. Известной особенностью Т-клеток памяти является их резистентность к Са2*-ионофорам, что послужило основой для разработки метода их выделения. В данной работе был проведен сравнительный анализ Са2‘ -отпетов Т-клеток памяти и наивных Т-клеток мышей на Са2~-мобилизукнцие агенты: СопА, тапсигаргин и иономицин. Эти агенты не повышали [Са2*]( в изолированных Т-клетках памяти при концентрациях, действующих на наивные Т-клетки. Таким образом, вход Са2* в Т-клетки памяти не активируется истощением его внутриклеточных запасов. Определение размеров внутриклеточных запасов Са2\ мобилизуемых ионо-мицином и тапсигаргином в бескальциевой среде, выявило отсутствие в Т-клетках памяти пулов внутриклеточного Са2". С использованием БН-реагента — тимеросала показано значительное уменьшение системы входа Са2' через плазматическую мембрану в Т-клетки памяти. Обнаружена резистентность Т-клеток памяти к “Са2"-парадоксу”, т.е. отсутствие аномально большого входа Са2‘ в ответ на его добавление (2 мМ) после инкубации клеток в бескальциевой среде с 0.5 мМ ЕОТА. Это свойство Т-клеток памяти было использовано для разработки нового метода выделения Т-клеток памяти без использования ионофоров. Са2'-парадокс-резистентные Т-клетки нечувствительны к Са2'-ионофорам, СопА, тапсигаргину и тимеросалу. В использованных тестах нам не удалось обнаружит!, существенных различий между Са2т-парадокс-резистентнымиТ-клет-ками и иономицин-резистентными Т-клетками. Методом проточной цитометрии показано, что на поверхности Са2'-парадокс-резистентных Т-клеток и иономицин-резистент-
