CC BY
9
6. Смола и ее продукты обладают ¡способностью всасываться через кожу и оказывать резорбтивное действие. Действие смолы и ее продуктов тем сильнее, чем больше в них содержится фенола.
7. Профилактические мероприятия при работе с газовой смолой и ее продуктами должны быть направлены на защиту рабочих от вдыхания паров этих продуктов и тела от загрязнения смолой ,и ее фракциями.
а ъ &
В. С. Макаренко
Гиалуронидаза пищевых продуктов как показатель их обсемененности патогенными стафилококками
Этиологическая роль стафилококков в пищевых токсикозах в настоящее время общепризнана, а вместе с тем практический врач не имеет показателей для санитарной оценки таких продуктов, где при бактериологическом исследовании обнаруживаются стафилококки.
Несмотря на возможность заражения пищевых продуктов стафилококками, эти отравления встречаются сравнительно редко. Это обусловлено тем, что не всегда в пище создаются условия для образования энтер ото каинов стафилококками.
В последние годы удалось овладеть методом получения энтероток-синов. Известно, что энтеротоксины образуются активными свежепере-сеянными штаммами стафилококков на некоторых средах специального состава, например, на крахмалосодержащих и др. Они накапливаются быстро, через 18—24 часа, при культивировании стафилококков в термостате при 37° и наличии в воздухе 20—25% углекислого газа. При более длительном культивировании энтеротоксины разрушаются. Таким образом, энтеротоксины образуются далеко не всегда при культивировании энтеротоксинообразующих штаммов на обычных питательных средах в обычных условиях.
Выделение стафилококков из пищевых продуктов встречает ряд трудностей при наличии большого количества других микроорганизмов.
Нами с большим успехом использовался «накопительный метод», с помощью которого удается выделить чистую культуру стафилококка из пищевых продуктов и выявить энтеротошин путем введения фильтрата чистых культур стафилококка кошкам в брюшину и через рот.
Выделение стафилококка проходит через следующие стадии.
1. 10 мл болтушки подозрительного пищевого продукта вводят в большую пробирку, содержащую 10 мл солевой среды (№ 1). Посев помещают в термостат при-37" на 36 часов.
При таких условиях стафилококк, даже если он находится в очень маленьких количествах в продукте, развивается очень обильно.
2. Одну каплю обогащенной среды вводят в чашку Петри, содержащую гипертоническую маннитную среду (№ 2), и после засева помещают в термостат при 37° на 48 часов.
Колонии патогенных стафилококков желтые и окружены желтоватым ореолом, обусловленным брожением маннита; их собственная пигментация ясно видна. Стафилококки непатогенные не сбраживают маннита и растут в виде мелких розоватых колоний. На этой среде стафилококки развиваются почти в чистом виде.
3. Высев чистых культур на косой агар с лактозой (№ 3) на 24 часа при 37°.
На этой среде стафилококки имеют интенсивную окраску, особенно выделяющуюся, когда оставляют культуру при комнатной температуре на 48 часов.
Колонии, выделенные на среде с лактозой, с косого агара перевивают на обычный питательный бульон и хранят 5 часов в термостате при 37°.
4. С бульона 2—3 капли высевают на чашки с полужидкой средой (№ 4) для накопления энтеротоксина в течение 40 часов в атмосфере 30% углекислого газа в эксикаторе при 37° (в термостате).
5. После этого к содержимому чашек прибавляют немного физиологического раствора и отфильтровывают. Полученную прозрачную жидкость прогревают в течение 30 минут при температуре 100° и по 0,5 мл фильтрата вводят внутрибрюшинно молодым котятам весом 400—500 г. Если выделенный стафилококк является энтеро-"токсичным, через 30 минут замечается тошнота, затем через час — рвота и сильный понос. Шаткая походка сохраняется в течение 2—3 часов, после чего животные приходят в нормальное состояние. 4
Рецепт № 1. Среда «солевая» для обогащения: на 1 л питательного мясного бульона добавляют 10 г пептона, 150 г хлористого натрия, 15 г лактозы, 1 г агара; рН = 7,4; разливают в пробирки по 10 мл и стерилизуют при температуре 120° в течение 20 минут.
Рецепт № 2. Среда для выделения стафилококков: питательного мясного бульона 1 л, пептона 9 г, хлористого натрия 75 г, маннита: 10 г, агара 15 г, фенола красного 0,025 г; рН=7,4. Разливают в пробирки по 20 мл и стерилизуют при температуре 120° в течение 30 минут.
Рецепт № 3. Среда «лактозная» для выделения чистых культур стафилококков: питательного мясного бульона 1 л, пептона 9 г, хлористого натрия 75 г, агара 15 г, лактозы 10 г; рН=7,4. Разливают в пробирки и стерилизуют при температуре 120° в течение 20 минут.
Рецепт №4. Полужидкий агар для накопления энтеротоксина: пептона 20 г, хлористого натрия 5 г растворяют в 1 л дестиллированной воды с добавкой 1 г кислого фосфорнокислого калия (К2НРО4), 1 г кислого фосфорнокислого калия (КН2РО4), 0,2 г оернокислого магния, 0,1 г хлористого кальция, 3 г агара. Разливают в флаконы и стерилизуют при температуре 120° в течение 20 минут.
Однако приведенная методика позволяет с успехом выделять кз пищевого продукта энтеротоксичные стафилококки с затратой более пяти суток, что сильно снижает достоинство метода и не позволяет давать быстрый ответ в случаях пищевых отравлений.
К. И. Туржецким разработан метод косвенного определения энтеро-токсических штаммов путем определения гемолитической активности чистых культур стафилококков, выделенных из пищевых продуктов. Автор считает стафилококки энтеротоксичными в тех случаях, когда они при культивировании на средах (агар, телячий бульон в токе углекислоты) в течение 48 часов давали токсин, обладающий гемолитическими свойствами в разведении 1 : I 000, 1 : 5 000 и не менее чем 1 : 500.
Патогенность отождествлялась автором с эитеротоксичностью и подтверждалась биопробой, причем не наблюдалось реакции на введе-«ие в брюшину мыши негемолитического штамма; от введения же гемолитических штаммов мыши погибали.
Всем патогенным стафилококкам, штаммам золотистого стафилококка, выделенным в случаях отравления из пищевых продуктов, свойственно выделять фермент пиалуронидазу в культуральные жидкости.
Представляет поэтому интерес определение гиалуронидазы, свойственной патогенным стафилококкам, в самом пищевом продукте, что подтверждает наличие в нем микроорганизмов не в статическом состоянии, а в стадии роста.
Для выявления положительной реакции на гиалуронидазу мы пользовались как взвесью бактерий, выделенных из подозрительных продуктов, так и болтушкой пищевого продукта, подлежащего обследованию.
Определение гиалуронидазы производилось нами по схеме, предложенной проф. Л. Г. Смирновой. Приготовляли болтушки из исследуемого продукта и воды в соотношении 1:10; 0,2 мл фильтрата дополнительно разводили водой до 2 мл. Для определения наличия гиалуронидазы 0.5 мл болтушки или фильтрата вносили в маленькую пробирку "(агглютннационную) и к ним добавляли еще 0,3 мл воды и 0,2 мл гиа-луроновой кислоты. Смесь оставляли в термостате при температуре 37° на 15 минут, затем на 5 минут помещали в ледник, после чего добавляли 1—2 капли 15% раствора уксусной кислоты и отмечали результаты.
При наличии в продукте гиалуронидазы, вызванной присутствием стафилококка, сгустка не обнаруживалось.
Правильность высказанного нами предположения подтвердилась в прямых опытах путем заражения консервов, а также неконсервироззн-ных мясных и рыбных продуктов штаммами патогенного золотистого стафилококка. Для первой серии опытов нами использовано 3 штамма гемолитических стафилококков: 2 энтеротоксических (№ 38 и № 86) выделены из продуктов и один пиогенный стафилококк выделен из абсцесса.
Биохимические свойства стафилококков изучались по общепринятой методике и дополнительно на реакцию гиалуронидазы. Отобранными штаммами микроорганизмов заражали рыбные консервы; их предварительно подвергали анализу на присутствие стафилококка и гиалуронидазы, причем получены отрицательные результаты (табл. 1).
Таблица 1. Биохимические свойства стафилококков
о, К га я
Л4 штамма Глюкоза Лактоза Маннит Мальтоза Сахароза Сероводород Индол Фиолетовый агар Желатина Кровяной аг; и-га О м о сг> II Реакция на г луронидазу
3035 к к к к к — — + + + + +
Л. М. к к к к к — — + + + + +
3686 к к к к к — — + + + + +
Условные обозначения: к — кислотообразование; -)- реакция положительная; — реакция отрицательная.
Образцы продуктов заражали небольшим количеством 24-часовой стафилококковой культуры, взвешенной в бульоне, помещали в эксикаторы в смесь воздуха с углекислотой. Контрольные пробы содержали в обычных условиях в термостате. В продукт вносили 0,1 мл микробной взвеси, сделанной по 0,5-миллиардному стандарту. Обсемененность продукта контролировали высевом его в конце опыта на вышеуказанные агаровые среды, причем во всех случаях установлено обсеменение зараженных продуктов стафилококком. Результаты отражены в табл. 2.
В продуктах, взятых для опытов, стафилококк на 6-й день хорошо развивается и ему сопутствует положительная реакция на пиалу-ронидазу.
Интересно отметить, что шпроты, вызвавшие отравление, дали положительную реакцию на гиалуронидазу, что было установлено очень быстро, через 30 минут от момента поступления материала, в то время как наличие стафилококков даже в первичном высеве обнаруживается только через 36 часов, а окончательная их идентификация и биопроба требуют 5-дневного исследования.
Реакция на гиалуронидазу служит показателем обсемененности продукта, что доказано при обследовани ряда образцов различных консервов, специально зараженных стафилококками. Эта реакция сама по себе является при оценке качества пищевых продуктов важным показателем на присутствие стафилококка.
Наши прямые опыты с заражением различных консервов подтвердили это.
Таблица 2. Реакция на гиалуронидазу в пищевых продуктах, зараженных
стафилококками
№ Наименование Срок Штамм
серии продукта обследования № 12 № 35 № 86
I Мясные консервы До опыта _ _
На 6-й день + + ' +
„ 12-й „ + — +
II Шпроты До опыта — — —
На 6-й день — + +
. 12-й , + — +
Условные обозначения: — отрицательная реакция; положительная реакция.
Ряд продуктов проверен на присутствие антеротоксинов путем биологической пробы на котятах (табл. 3).
Из данных, представленных в табл. 3, видно, что гиалуронидаза имеется в продуктах, обсемененных стафилококком, а энтеротоксины накапливаются в продукте только в том случае, если он содержится в особых условиях в воздухе с примесью углекислого газа.
Таблица 3. Накопление энтеротоксинов в консервах в сопоставлении с реакцией на
гиалуронидазу
Штамм
№ 12 № .45 № 86
Показатели к - = .£ СО и * X 3 X з- а 3 к о Ь! X I * £ « ■а а и Ь!
с 3 СО юО о ч и со >? «и О ч и о >. вО
Реакция на 1 1 -й день гиалх ронидазу| 5-й Д1нь + + + + + +
Биологиче1 кая проба на котятах ...... _ + — + _ +
Высев стафилококков на чашки....... ++ ++ ++ ++ ++ ++
Условные обозначения: -(- реакция на гиалуронидазу положительная; — реакция отрицательная.
Интересным является факт получения энтеротоксина в случае заражения нами шпрот свежевыделенным (из абсцесса) золотистым стафилококком. Можно сделать вывод, что возбудителями пищевых отравлений являются гноеродные стафилококки, попавшие в продукт в процес-
се изготовления и размножившиеся в нем в благоприятных условиях хранения; в особых условиях хранения, при наличии углекислоты, получается энтеротоксин, и такой продукт может вызвать отравление.
Описанная методика выявления энтеротоксичных стафилококков с успехом применялась нами при исследовании пищевых продуктов.
Реакция на гиалуронидазу свойственна как свежевыделенным штаммам гноеродных стафилококков, так и стафилококкам, вызвавшим пищевые интоксикации.
Реакция на гиалуронидазу в консервах, зараженных стафилококком, появляется на 3—5-й день и может исчезать на 10—12-й день. Энтеротоксин накапливается также на 3—-5-й день только в том случае, если пищевой продукт содержится в особых условиях, например, в токе углекислоты; так же как и гиалуронидаза, он исчезает в пищевых продуктах на 10—12-й день их выдержки.
•Ь тйг #
СТАТЬИ, ПОСТУПИВШИЕ В РЕДАКЦИЮ ПО ВОПРОСАМ ГИГИЕНЫ ПИТАНИЯ
(Краткое содержание)
Лейбов 3. М. Определение частиц стекла в поляризованном свете (из Сталинской областной санитарно-эпидемиологической станции).
Для идентификации стекла автор предлагает использовать поведение его в поляризованном свете. Частицы стекла отличаются от минералов, встречающихся в песках, тем, что под микроскопом они бесцветны, прозрачны, при скрещивании николей не дают явлений интерференции и дисперсии, имеют показатель преломления около 1,52. Все минералы ведут себя иначе в поляризованном свете. Сходные со стеклом флюорит и опаловый кремнезем имеют более низкий показатель преломления.
3 а г у м е н н и ков а Н. К. Ускорение минерализации пищевых продуктов животного происхождения при определении мышьяка (из
Республиканского бюро судебномедицинской экспертизы Министерства здравоохранения Казахской ССР).
Цель работы — найти простой и быстрый метод минерализации органических веществ, обусловливающий наиболее полное выделение мышьяка.
Для сравнения быстроты и эффективности методов сжигание одних и тех же объектов проводилось параллельно тремя способами: 1) Фре-зениуса и Бабо, в котором минерализация производится хлором в момент его образования. Вещество обрабатывается бертолетовой солью и соляной кислотой при умеренном нагревании; 2) Гологорского, пользующегося для разрушения органических веществ царской водкой; 3) по предлагаемому автором методу — обработка крепкой азотной кислотой при нагревании до температуры 60°.
Недостатки первого метода — его продолжительность и частичная потеря мышьяка. Метод Гологорского ведет к значительно более высокой потере мышьяка, доходящей до 30—50%. Работая своим методом, автор затрачивает на минерализацию меньше времени и достигает наиболее полного выделения мышьяка.
Процеров Б. М. К вопросу приготовления и хранения концентратов каротина.
