Функциональное проявление генотипических и фенотипических особенностей животных в активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

функциональное проявление генотипических и фенотипических особенностей животных в активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов

Габдулхакова А. Г.1, Сафронова В. Г.1,

Садовников В. Б.2

'Институт биофизики клетки РАН;

:Филиал Института биооргаиической химии им. М. М.Шемякина и 10. А.Овчинникова г. Пущина, Россия

Введение. Интенсивная генерация активных форм кислорода нейтрофилами (респираторный взрыв) является одним из цитотоксических факторов, обеспечивающих резистентность организма к инфекциям. В организме перед активацией нейтрофилы, как правило, подвергаются “праймированию” — воздействию, которое подготавливает клетки к более сильной специфической реакции на активирующий стимул. В настоящее время представление о механизме праймирования находится в стадии формирования. Показано, что реакция нейтрофилов на активирующие стимулы имеет видовые различия.

Цель и задачи. Исследование роли генетической основы в формировании ответа праймированных клеток на активирующий стимул. Исследовать состояние иммунной системы мышей различных линий в зависимости от условий содержания: барьерные SPF (specific pathogen free) условия и адаптация к обычным (или конвенциональным) условиям.

Материалы и методы. Нейтрофилы получали из мышей-самцов двух инбредных линий BALB/c иС57ВЬ и одной аутбредной линии NMRI. Эффекторную функцию иммунной системы мышей оценивали по продукции активных форм кислорода перитонеальиыми вызванными нейтрофилами методом люминол-зависимой хемилюминесценции. Праймирование проводили инсулином (Calbiochem), липополисахаридом из Е.соН (Sigma), N-формил-метионил-лейцил-фенилаланином (ФМЛФ; Sigma). Клетки преинкубировали в условиях термостатирования при 37°С в течение 20 м ин.

Основные результаты. В нейтрофилах мышей всех исследованных линий, содержащихся в барьерных и конвенциональных условиях, ответ на ФМЛФ возникал в диапазоне концентраций 0.1-50 мкМ и зависел от концентрации ФМЛФ. Интенсивность ответов нейтрофилов мышей, содержащихся в барьерных условиях, падала в ряду: BALB/c, NMRI, C57BL. В нейтрофилах мышей из конвенциональных условий интенсивность ответов на ФМЛФ была значительно ниже и достоверно не различалась у разных линий мышей. Интенсивность ответа праймированных клеток на последующую стимуляцию ФМЛФ зависела от концентрации и типа праймирующего агента, от времени преинкубации, от используемой для активации концентрации ФМЛФ. Характер зависимости эффекта праймирования от активирующей концентрации ФМЛФ отличался у разных линий мы-

шей. Сущестпенные различия между ответами на ФМЛФ праймированных и интактных нейтрофилов наблюдались у мышей всех исследованных линий, содержащихся в конвенциональных, а не в барьерных, условиях.

Заключение. Полученные результаты показывают различия в активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов генетически отдаленных гомозиготных линий ВАЬВ/с и С57ВЬ и тенденцию к сходству в ответах фенотипически близких белых мышей ВАЬВ/с и ЫМЯ1. Вероятно, способность к активации и праймированию является генетически обусловленной, отражает уровень сформированности иммунной системы в функциональном плане и зависит от факторов, обусловленных как генотипом, так и фенотипом.

Влияние белков острой фазы воспаления и ИЛ-8 на процессы трансэндотелиальной миграции нейтрофилов

Галкина Е.В., Назаров П.Г., Полевщиков А.В.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург. Россия

Одним из начальных этапов воспаления является проникновение фагоцитирующих клеток, в первую очередь нейтрофильных гранулоцитов (НФ), в очаг тканевого поражения. Адгезионные рецепторы семейства р2-интегри-нов (СО 11 /С018) и молекулы суперсемейства иммуноглобулинов (СЭ54, С050, СО 102), экспрессируемые на эндотелиальных клетках, отвечают за фазу плотной адгезии ИФ к эндотелию. Наряду с активацией и усилением экспрессии адгезионных рецепторов, также в ходе воспаления изменяются уровни некоторых цитокинов: ИЛ-1, ФНО, ИЛ-8 и белков острой фазы воспаления С-реактивного белка (СРБ), сывороточного амилоида Р (САР). Нами установлен факт взаимодействия ИЛ-8 и СРБ, однако последствия этого взаимодействия оставались не вполне ясными.

Цель исследования: изучение механизмов влияния ИЛ-8, СРБ, САР на процессы трансэндотелиалыюй миграции НФ и оценка влияния взаимодействия между белками на экспрессию адгезионных рецепторов на поверхности НФ.

Материалы и методы. НФ выделяли из гепаринизи-рованной крови доноров с использованием градиента Фиколл-Верографина с последующим лизисом эритроцитов 0,832% ЫН4С1. Экспрессию рецепторов НФ изучали проточной цитофлуориметрией с использованием моноклональных антител к С011 Ь/СО 18 (Мед-биоспектр). Адгезию меченых 3Н-уридином Нф к эндотелиальным клеткам ЕСУ304 оценивали радиометрическим методом. Экспрессию рецепторов С054 и СБ50 на эндотелиальных клетках ЕСУ304 оценивали с помощью клеточного иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител к С054, С050 (Медбиоспектр).