CC BY
21
"Дни иммунологии а СПб '99"
Медицинская иммунология
Результаты. САР достоверно повышал уровень СО 11Ь на НФ, СРБ не влиял на этот показатель. Комбинация САР и СРБ не влияла на уровень экспрессии СО 11Ь, что указывает на инактивацию САР вторым пентраксином. Оба белка по отдельности, а также комбинация САР+СРБ увеличивали экспрессию СЭ18. ИЛ-8 увеличивал общую плотность как СОНЬ, так и СО 18. При взаимодействии ИЛ-8 и СРБ способность этих молекул усиливать экспрессию СО 18 нейтрализовалась. В ходе трансэндотелиальной миграции НФ проходят фазу плотной адгезии к эндотелию. ИЛ-8 (1,6 пг/мл) понижал адгезию Нф к интактным и активированным ИЛ-1 клеткам ЕСУ304, а САР, СРБ и их смесь не влияли на этот процесс. В то же время, СРБ отменял эффект ИЛ-8, а комбинация из трёх белков (САР, СРБ, ИЛ-8) усиливала адгезию НФ к активированным эндотелиальным клеткам. Контррецепторами для СО 11/СЭ18 на эндотели-альных клетках являются адгезионные молекулы С054, С050. ИЛ-1 Р и ИЛ-8 усиливают экспрессию С054, С050, САР увеличивал плотность рецепторов как С054,так и С050 на клетках ЕСУЗ 04, в то время как СРБ влиял на экспрессию этих рецепторов незначительно. При сочетанном действии ИЛ-1Р или ИЛ-8 с СРБ этот пентраксин частично нейтрализовал активирующее действие цитокинов.
Обсуждение. Полученные результаты указывают, что белки острой фазы воспаления могут регулировать прохождение нейтрофильных гранулоцитов через эндотели-альный барьер, изменяя уровень экспрессируемых рецепторов СО 11Ь, СО 18 на НФ, С054, С050 - на поверхности эндотелиальных клеток ЕСУ304. Возможное взаимодействие САР и СРБ с цитокинами может служить механизмом, посредством которого ограничивается и локализуется миграция НФ в ткани в фазе воспаления, когда концентрация САР, СРБ и цитокинов становится значительной.
Влияние физической нагрузки на иммунный ответ
Долгушин И.И., Колесников О.Л., Селянина Г. А., Мезенцева Е.А.
Челябинская Государственная медицинская академия Челябинск, Россия
Многочисленные работы были посвящены изучению воздействия физических нагрузок различной интенсивности на функции иммунной системы. Так, было показано, что 5-6-часовое плавание снижает фагоцитарную активность клеток РЭС у мышей. Бег на марафонскую дистанцию снижает выраженность реакции бласттрансформации лимфоцитов, а максимальная нагрузка (бег до отказа) вызывает у кроликов иммунодефицит, который купируется лишь через 7-8 дней. Однократное плавание в течение шести часов обуславливает у мышей снижение активности пе-ритонеальных макрофагов и подавляет интенсивность клеточного иммунного ответа. В то же время, имеются данные, что физическая нагрузка умеренной интенсивности стимулирует иммунный ответ (Аронов
Г.Е., Иванова Н.И., 1987; Шубик В.М., Левин М.Я., 1985; ЕБСо1а .1. е1 а1., 1978).
Целью настоящего исследования явилась оценка со-четанного влияния физической нагрузки и низкой температуры на выраженность клеточного иммунного ответа.
Работа проведена на крысах-самцах линии Вистар, полученных из питомника "Рапполово". Опытные животные были разделены натри фуппы: крысы 1-й группы плавали 5 раз по 1 часу (температура воды 22-23'С), животные 2-й и 3-й групп плавали 1 раз в течение 10 мин. (температура воды 16-17'С). Крыс 1-й и 2-й групп иммунизировали через 1 час после окончания плавания, животным 3-й группы эритроциты вводили через сутки после физической нагрузки. Через четверо суток животным вводили разрешающую дозу антигена и через 24 часа волюмометрически оценивали объем стопы. Интенсивность реакции повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ) определяли по разнице в объеме стопы контрольной и опытной лап. Достоверность различий с контролем определяли с помощью критерия Стыодснта^).
У крыс 1-й группы интенсивность реакции ПЧЗТ снизилась с 0.26 ± 0.02 мл в контроле (п = 6) до 0.12 ± 0.02 мл (п = 7, Р < 0.01,0. Десятиминутное плавание в холодной воде в день иммунизации также подавляло иммунный ответ: интенсивность реакции ПЧЗТ составила 0.15 + 0.02 мл (п = 6) при этом в контрольной группе данный показатель равнялся 0.26 ± 0.016 мл (п = 7, Р < 0.01, 0. Плавание в течение 10 минут за сутки до введения эритроцитов вызывало достоверное ингибирование клеточного иммунного ответа. В данном случае интенсивность реакции ПЧЗТ уменьшилась с 0.26 ± 0.013 мл в контроле (п = 13) до 0.165 ± 0.026 (п = 10, Р < 0.01,1).
Таким образом, пятикратное одночасовое плавание ингибирует клеточный иммунный ответ на 54.3%, десятиминутное плавание в холодной воде в день иммунизации уменьшило иммунный ответ на 42.3%, а такая же физическая нагрузка за сутки до введения антигена снижала интенсивность ПЧЗТ на35.5%. Полученные данные свидетельствуют, что как многократное, так и однократное плавание способно подавлять функции иммунной системы крыс.
Взаимодействие а-2-макроглобулина человека со специфическими антителами
Дорофейков В.В., Косицкая Л.С., Фрейдлин Т.С., Щербак И.Г.
Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербургкий Государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова
Функции а-2-макроглобулина (МГ) как регулятора систем свертывания крови и фибринолиза, атакже как чистильщика крови от малоспецифичньгх протеиназ хорошо известны. Исследованиями последнего десятилетия показана воз-
¡999, Т. 1, № 3-4
Иммунорегуля ц ия
можность связывания этого протеина с иммуноцитокина-ми и другими биологически активными пептидами в крови. Однако механизмы белок-белкопых взаимодействий МГ и их биологическая роль требуют дальнейшего изучения.
Целью работы было изучение влияния специфических антител на способность МГ взаимодействовать с трипсином.
Препараты МГ из донорской плазмы крови выделяли повторной гель-фильтрацией, диализом и анионоб-менной хроматографией. Р-форму МГ получали обработкой препарата метиламином или добавлением трипсина. Кроликов массой 2-2.5 кг гипериммунизировали нативным МГ в дозе 8 мг с 1 мл адыованта Фрейнда с последующей реиммунизацией той же дозой без адью-ванта через 4 недели. Через 10 дней после второй иммунизации сыворотку крови исследовали в реакции НПГА с эритроцитами, нагруженными МГ. Титр специфических антител составлял от 1/16384 до 1/32768.
Из пулировапных сывороток кроликов выделяли иммуноглобулины класса О (Щ повторным осаждением сульфатом аммония и гель-фильтрацией на колонке с гелем ТБК-6(Ж Взаимодействие Б- и Р-форм МГ с полученными АТ изучали с помощью иммунохимической фотометрии при 450 нм. Реакции проводили при постоянной концентрации 1§ и возрастающей концентрации МГ. Максимум преципитации отмечен при молярных соотношениях 1§/МГ как 7/1 (1000 / 32 мкг). Различий в преципитации двух форм МГ отмечено не было. Образующиеся комплексы легко осаждались центрифугированием, что сопровождалось осветлением раствора. Из литературных данных известно, что молекула МГспособна к связыванию двух молекул небольших ферментов, например, трипсина, но только одной молекулы плазмина. Этот феномен, подтвержденный и в нашей лаборатории, объясняют близостью расположения реактивных центров в молекуле МГ. В серии экспериментов изучали способность ^ блокировать реактивные центры МГ. При постоянной концентрации МГ добавляли возрастающие количества ^ и через 30 мин. вносили в инкубационную смесь количество трипсина, достаточное для связывания препарата МГ. Свободный трипсин инакгивировали добавлением ингибитора трипсина из бобов сои. Образование комплексов МГ-трипсин регистрировали по гидролизу И-бензоил-Ь-аргинин паранитроанилидаспектрофотометрически при 405 нм. При молярном соотношении МГ/соответствующему максимуму преципитации, связывание МГ с трипсином уменьшалось не более чем на 10%. При дальнейшем увеличении концентрации ^ связывание МГ с ферментом пропорционально умен ьшалось вплоть до 15% от исходного. В то же время, добавление ^ к уже сформированным комплексам МГ-трипсин не влияло на гидролазную актив-| юсть этих комплексов.
Т. о., при иммунизации животных препаратом МГ синтезируются АТ как против реактивных центров МГ, так и против других участков его молекулы. Несмотря на значительные размеры оба реактивных центра МГ, по-видимому, способны к одновременному связыванию антител. Такое связывание приводит к существенному ослаблению антипротеиназной функции МГ.
Влияние кальмодулина и хорионического гонадотропина на фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови человека
Заморина С. А., Шнршев С.В.
Институт экологии и генетики микроорганизмов
УрОРАН
Пермь, Россия
Хорионический гонадотропин (ХГ) как плацентарный гормон обладает выраженным иммуномодулиру-ющим эффектом, что обусловлено необходимостью одновременного обеспечения процессов беременности и защиты полуаллогенного плода от атаки иммуно-компетентных клеток матери.
Механизм транедукции гормонального действия ХГ на клетки-мишени сопряжен с повышением активности аденилатциклазы и, как следствие, последующим накоплением цАМФ, который модулирует активность внутриклеточных ферментных систем. Реализация цАМФ-зависимых эффектов гормона зависит также от уровня интрацеллюлярного Са2* и активности кальмодулина.
В связи с этим было интересно изучить влияние физиологических концентраций ХГ (10,50,100 МЕ/мл) на функциональную активность фагоцитов периферической крови и зависимость эффектов гормона от активности кальмодулина. В качестве ингибитора кальмодулина использовался циклоспорин А ("ЗапсПттип", Балс^, Щвейцария) в среднетерапевтической дозе 0,05 мг/мл. Для оценки функциональной фагоцитарной активности применялся тест, основанный на поглощении клетками формалинизирован-ных эри троцитов барана. Результат выражался в виде процента, числа и индекса фагоцитоза. Параллельно проводилась оценка метаболической активности клеток в тесте с восстановлением нитросинего тетразолия (НСТ-тесте) и определялась продукция миелопероксилазы (МП).
Установлено, что гормон в концентрации, соответствующей его содержанию в крови беременных женщин во П-Ш триместре (ХГ 10 МЕ/мл), практически не влияет на фагоцитарную активность лейкоцитов. Более высокая концентрация гормона, (50 МЕ/мл), оказывает незначительный, но статистически значимый депрессивный эффект на процессы фагоцитоза. Концентрация ХГ 100 МЕ/ мл, соответствующая 8-10 неделе беременности, когда клетки плода экспрессируют антигены главного комплекса гистосовместимости, обладает наиболее выраженным супрессивным эффектом на функциональную активность общего пула фагоцитирующих клеток. Блокада кальмодулина в лейкоцитах приводит к статистически значимому угнетению процессов фагоцитоза.
Низкие дозы гормона (ХГ 10,50 МЕ/мл) на фоне блокады кальмодулина оказывают достоверный депрессивный эффект на процессы фагоцитоза, что характеризует ХГ как синергиста циклоспорина А. В то же время, комбинация высокой дозы гормона ( 100 МЕ/мл) и циклоспорина А не
