CC BY
33
1999, Т. I, №1-4
Иммун орегуля цмя
функциональное проявление генотипических и фенотипических особенностей животных в активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов
Габдулхакова А. Г.1, Сафронова В. Г.1, Садовников В. Б.2
'Институт биофизики клетки РАН; :Филиач Института биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова г. Пущина, Россия
Введение. Интенсивная генерация активных форм кислорода нейтрофилами (респираторный взрыв) является одним из цитотоксических факторов, обеспечивающих резистентность организма к инфекциям. В организме перед активацией нейтрофилы, как правило, подвергаются "праймированию" — воздействию, которое подготавливает клетки к более сильной специфической реакции на активирующий стимул. В настоящее время представление о механизме праймирования находится в стадии формирования. Показано, что реакция нейтрофилов на активирующие стимулы имеет видовые различия.
Цель н задачи. Исследование роли генетической основы в формировании ответа праймированных клеток на активирующий стимул. Исследовать состояние иммунной системы мышей различных линий в зависимости от условий содержания: барьерные SPF (specific pathogen free) условия и адаптация к обычным (или конвенциональным) условиям.
Материалы и методы. Нейтрофилы получали из мышей-самцов двух инбредных линий BALB/c иС57ВЬ и одной аутбредной линии NMRI. Эффекторную функцию иммунной системы мышей оценивали по продукции активных форм кислорода перитонеальпыми вызванными нейтрофилами методом люминол-зависимой хемилюминесценции. Праймирование проводили инсулином (Calbiochem), липополисахаридом из Е.соЧ (Sigma), N-формил-метионил-лейцил-фенилаланином (ФМЛФ; Sigma). Клетки преинкубировали в условиях термостатирования при 37°С в течение 20 м ин.
Основные результаты. В нейтрофилах мышей всех исследованных линий, содержащихся в барьерных и конвенциональных условиях, ответ на ФМЛФ возникал в диапазоне концентраций 0.1-50 мкМ и зависел от концентрации ФМЛФ. Интенсивность ответов нейтрофилов мышей, содержащихся в барьерных условиях, падала в ряду: BALB/c, NMRI, C57BL. В нейтрофилах мышей из конвенциональных условий интенсивность ответов на ФМЛФ была значительно ниже и достоверно не различалась у разных линий мышей. Интенсивность ответа праймированных клеток на последующую стимуляцию ФМЛФ зависела от концентрации и типа праймирующего агента, от времени преинкубации, от используемой для активации концентрации ФМЛФ. Характер зависимости эффекта праймирования от активирующей концентрации ФМЛФ отличался у разных линий мы-
шей. Существенные различия между ответами на ФМЛФ праймированных и интактных нейтрофилов наблюдались у мышей всех исследованных линий, содержащихся в конвенциональных, а не в барьерных, условиях.
Заключение. Полученные результаты показывают различия в активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов генетически отдаленных гомозиготных линий BALB/c и C57BL и тенденцию к сходству в ответах фенотипически близких белых мышей BALB/c и NMRI. Вероятно, способность к активации и праймированию является генетически обусловленной, отражает уровень сформированности иммунной системы в функциональном плане и зависит от факторов, обусловленных как генотипом, так и фенотипом.
Влияние белков острой фазы воспаления и ИЛ-8 на процессы трансэндотелиальной миграции нейтрофилов
Галкина Е.В., Назаров П.Г., Полевщиков A.B.
Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург. Россия
Одним из начальных этапов воспаления является проникновение фагоцитирующих клеток, в первую очередь нейтрофильных гранулоцитов (НФ), в очаг тканевого поражения. Адгезионные рецепторы семейства р2-интегри-нов (CD 11/CD18) и молекулы суперсемейства иммуноглобулинов (CD54, CD50, CD 102), экспрессируемые на эндо-телиальных клетках, отвечают за фазу плотной адгезии НФ к эндотелию. Наряду с активацией и усилением экспрессии адгезионных рецепторов, также в ходе воспаления изменяются уровни некоторых цитокинов: ИЛ-1, ФНО, ИЛ-8 и белков острой фазы воспаления С-реактивного белка (СРБ), сывороточного амилоида Р (САР). Нами установлен факт взаимодействия ИЛ-8 и СРБ, однако последствия этого взаимодействия оставались не вполне ясными.
Цель исследования: изучение механизмов влияния ИЛ-8, СРБ, САР на процессы трансэндотелиальной миграции НФ и оценка влияния взаимодействия между белками на экспрессию адгезионных рецепторов на поверхности НФ.
Материалы и методы. НФ выделяли из гепаринизи-рованной крови доноров с использованием градиента Фиколл-Верографина с последующим лизисом эритроцитов 0,832% NH4C1. Экспрессию рецепторов НФ изучали проточной цитофлуориметрией с использованием моноклональных антител к CD1 lb/CD 18 (Мед-биоспектр). Адгезию меченых 3Н-уридином Нф к эн-дотелиальным клеткам ECV304 оценивали радиометрическим методом. Экспрессию рецепторов CD54 и CD50 на эндотелиальных клетках ECV304 оценивали с помощью клеточного иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител к CD54, CD50 (Медбиоспектр).
"Дни иммунологии а СПб '99"
Медицинская иммунология
Результаты. САР достоверно повышал уровень СО 11Ь на НФ, СРБ не влиял на этот показатель. Комбинация САР и СРБ не влияла на уровень экспрессии СО 11Ь, что указывает на инактивацию САР вторым пентраксином. Оба белка по отдельности, а также комбинация САР+СРБ увеличивали экспрессию СЭ18. ИЛ-8 увеличивал общую плотность как СОНЬ, так и СО 18. При взаимодействии ИЛ-8 и СРБ способность этих молекул усиливать экспрессию СО 18 нейтрализовалась. В ходе трансэндотелиальной миграции НФ проходят фазу плотной адгезии к эндотелию. ИЛ-8 (1,6 пг/мл) понижал адгезию Нф к интактным и активированным ИЛ-1 клеткам ЕСУ304, а САР, СРБ и их смесь не влияли на этот процесс. В то же время, СРБ отменял эффект ИЛ-8, а комбинация из трёх белков (САР, СРБ, ИЛ-8) усиливала адгезию НФ к активированным эндотелиальным клеткам. Контррецепторами для СО 11/СЭ18 на эндотели-альных клетках являются адгезионные молекулы С054, С050. ИЛ-1 Р и ИЛ-8 усиливают экспрессию С054, С050, САР увеличивал плотность рецепторов как С054,так и С050 на клетках ЕСУЗ 04, в то время как СРБ влиял на экспрессию этих рецепторов незначительно. При сочетанном действии ИЛ-1Р или ИЛ-8 с СРБ этот пентраксин частично нейтрализовал активирующее действие цитокинов.
Обсуждение. Полученные результаты указывают, что белки острой фазы воспаления могут регулировать прохождение нейтрофильных гранулоцитов через эндотели-альный барьер, изменяя уровень экспрессируемых рецепторов СО 11Ь, СО 18 на НФ, С054, С050 - на поверхности эндотелиальных клеток ЕСУ304. Возможное взаимодействие САР и СРБ с цитокинами может служить механизмом, посредством которого ограничивается и локализуется миграция НФ в ткани в фазе воспаления, когда концентрация САР, СРБ и цитокинов становится значительной.
Влияние физической нагрузки на иммунный ответ
Долгушин И.И., Колесников О.Л., Селянина Г. А., Мезенцева Е.А.
Челябинская Государственная медицинская академия Челябинск, Россия
Многочисленные работы были посвящены изучению воздействия физических нагрузок различной интенсивности на функции иммунной системы. Так, было показано, что 5-6-часовое плавание снижает фагоцитарную активность клеток РЭС у мышей. Бег на марафонскую дистанцию снижает выраженность реакции бласттрансформации лимфоцитов, а максимальная нагрузка (бег до отказа) вызывает у кроликов иммунодефицит, который купируется лишь через 7-8 дней. Однократное плавание в течение шести часов обуславливает у мышей снижение активности пе-ритонеальных макрофагов и подавляет интенсивность клеточного иммунного ответа. В то же время, имеются данные, что физическая нагрузка умеренной интенсивности стимулирует иммунный ответ (Аронов
Г.Е., Иванова Н.И., 1987; Шубик В.М., Левин М.Я., 1985; ЕБСо1а .1. е1 а1., 1978).
Целью настоящего исследования явилась оценка со-четанного влияния физической нагрузки и низкой температуры на выраженность клеточного иммунного ответа.
Работа проведена на крысах-самцах линии Вистар, полученных из питомника "Рапполово". Опытные животные были разделены натри фуппы: крысы 1-й группы плавали 5 раз по 1 часу (температура воды 22-23'С), животные 2-й и 3-й групп плавали 1 раз в течение 10 мин. (температура воды 16-17'С). Крыс 1-й и 2-й групп иммунизировали через 1 час после окончания плавания, животным 3-й группы эритроциты вводили через сутки после физической нагрузки. Через четверо суток животным вводили разрешающую дозу антигена и через 24 часа волюмометрически оценивали объем стопы. Интенсивность реакции повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ) определяли по разнице в объеме стопы контрольной и опытной лап. Достоверность различий с контролем определяли с помощью критерия Стыодснта^).
У крыс 1-й группы интенсивность реакции ПЧЗТ снизилась с 0.26 ± 0.02 мл в контроле (п = 6) до 0.12 ± 0.02 мл (п = 7, Р < 0.01,0. Десятиминутное плавание в холодной воде в день иммунизации также подавляло иммунный ответ: интенсивность реакции ПЧЗТ составила 0.15 + 0.02 мл (п = 6) при этом в контрольной группе данный показатель равнялся 0.26 ± 0.016 мл (п = 7, Р < 0.01, 0. Плавание в течение 10 минут за сутки до введения эритроцитов вызывало достоверное ингибирование клеточного иммунного ответа. В данном случае интенсивность реакции ПЧЗТ уменьшилась с 0.26 ± 0.013 мл в контроле (п = 13) до 0.165 ± 0.026 (п = 10, Р < 0.01,1).
Таким образом, пятикратное одночасовое плавание ингибирует клеточный иммунный ответ на 54.3%, десятиминутное плавание в холодной воде в день иммунизации уменьшило иммунный ответ на 42.3%, а такая же физическая нагрузка за сутки до введения антигена снижала интенсивность ПЧЗТ на35.5%. Полученные данные свидетельствуют, что как многократное, так и однократное плавание способно подавлять функции иммунной системы крыс.
Взаимодействие а-2-макроглобулина человека со специфическими антителами
Дорофейков В.В., Косицкая Л.С., Фрейдлин Т.С., Щербак И.Г.
Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербургкий Государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова
Функции а-2-макроглобулина (МГ) как регулятора систем свертывания крови и фибринолиза, атакже как чистильщика крови от малоспецифичньгх протеиназ хорошо известны. Исследованиями последнего десятилетия показана воз-
