CC BY
51
Аграрный вестник Урала №4 (83), 2011
Ветеринария "V
длиной 3-8 см, разделенных на 3 группы.
У собак первой группы (п = 2) на раны ежедневно наносили мазь «Тизоль-амоксициллин», у второй группы (п = 2) — тетрациклиновую мазь (3 %), у собак третьей группы раны не обрабатывали. В течение всего срока исследований определяли общее состояние, проводили клинические исследования, биохимические исследования крови, состояние тканей вокруг раны.
Результаты исследований.
В первые сутки у животных всех групп раны были гиперемированы, отечны, болезненны. На 3-4 сутки отеки исчезали, была болезненность (1, 2 группы), у третьей группы животных раны были отечны, гиперемированы, болезненны. На 7-8 сутки у собак первой группы края раны хорошо срослись, болезненность и отек отсутствовали, у собак второй группы отмечали болевую реакцию, у животных третьей группы улучшений не наблюдали. На 11-12 сутки у собак, обрабатывавшихся мазью «Тизоль-амоксициллин», края раны плотно срослись, отека не было, швы были сняты. У собак второй группы, леченных тетрацикли-новой мазью, края раны срослись неплотно, швы были сняты на 14-е сутки. У собак третьей группы швы были сняты на 18-е сутки.
Таблица 2
Биохимические показатели крови до применения препаратов
Показатели крови нормативы Группы животных
1 группа (n = 2) 2 группа (n = 2) З группа (n = 2)
АлАТ МЕ/л 10-55 54,22 ± 0,02 84,14 ± 0,01 87,34 ± 0,04
АсАТ МЕ/л 10-55 54,12 ± 0.01 105,30 ± 0,04 94,12 ± 0,02
ЛДГ МЕ/л 50-495 165,40 ± 0,04 184,20 ± 0,04 186,20 ± 0,01
Общий билирубин мкмоль/л 0-7,5 3,75 ± 0,02 4,30 ± 0,02 4,60 ± 0,04
Щелочная фосфатаза МЕ/л 10-150 76,40 ± 0,3 77,20 ± 0,4 84,40 ± 0,6
Холестерин ммоль/л 3,3 ± 7,0 5,40 ± 0,02 9,40 ± 0,02 11,60 ± 0,02
Глюкоза ммоль/л 3,3 ± 6,0 5,42 ± 0,02 6,80 ± 0,03 6,90 ± 0,04
Общий белок г/л 54-77 76,60 ± 0,20 75,60 ± 0,40 75,40 ± 0,20
При биохимических исследованиях сыворотки крови до и после лечения у собак трех групп наблюдали изменения.
Результаты биохимических исследований сыворотки крови до лечения показали явные отклонения от нормы в сторону увеличения по показателям АлАТ, АсАТ, холестерина, общего белка, что, возможно, связано не только с раневым процессом, но и с хроническими заболеваниями у собак (перенесенные острые инфекции, хронические инфекции, поражения печени).
По результатам биохимических
исследований сыворотки крови из таблицы 2 видно, что у собак первой группы показатели полностью нормализовались, в отличии от групп 2 и 3.
Выводы.
Раневой процесс многофазен, и для достижения наилучшего эффекта мы рекомендуем применять мазь «Тизоль-амоксициллин», которая превосходит по эффективности другие препараты, используемые при лечении ран, не проявляет побочных эффектов и обладает комплексным действием.
Литература
1. Диагноз и определение болезни (асептическая резаная рана) [Электронный ресурс]. URL: http://www.aldenvet.kiev.ua/articles/ veterinary_article.php?kley=157 (дата обращения: 19.01.2011).
2. Лечение ран [Электронный ресурс]. URL: http://vet-skor.ru/page.php?id=14 (дата обращения: 19.01.2011).
фармакологическая регуляция
АКТИВНОСТИ КИСЛОТНОПЕПТИЧЕСКОгО фАКТОРА ПРИ
длительном приеме нестероидных противовоспалительных препаратов
Е. и. САМоДЕлКин, доктор медицинских наук, н. А. тАтАрниКовА, доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой,
М. н. КулЬнЕвСКАя, кандидат ветеринарных наук,
заведующий кафедрой,
в. в. нЕКлЮДовА, соискатель,
М. в. ЧЕрАнЕвА, соискатель,
Пермская ГСХА им. акад. Д. н. Прянишникова,
П. в. КоСАрЕвА, доктор медицинских наук, заведующий отделом морфологических и патофизиологических исследований Цнил ПГМА,
С. в. ниКитин, соискатель,
Пермская ГМА им. акад. Е. А. вагнера
614045, г. Пермь, ул. Кирова, д. 124, кв. 11; тел. 8 912 888 40 57, (342) 236-41-31; e-mail: sei-p@mail.ru
Ключевые слова: экспериментальная НПВП-гастропатия, «Найз®», Кетофен®, Омез®, Фамотидин®, гистология, экспрессия регуляторного протеина Ki-67, морфометрический анализ, иммуногистохимические исследования.
Keywords: experimental non-steroid anti-inflammatory preparation - gastropathy, “Nise®", Ketofen®, Omez®, Famotidin®, histology, regulatory protein Ki - 67 expression, morphometric analysis, immunohistochemical studies.
Нестероидные противовоспалительные и ветеринарной практике. Известно, что Реактивная гастропатия, развивающаяся препараты (НПВП) относятся к числу наи- прием НПВП приводит к развитию острого вследствие употребления НПВП, является более распространенных лекарственных гастрита через неделю после начала вторым наиболее распространенным гистосредств, часто назначаемых в клинической лечения практически в 100 % случаев [1]. логическим диагнозом, устанавливаемым
335^»- Аграрный вестник Урала №4 (83), 2011 г.~<^ЦЩ£
Ветеринария
Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) относятся к числу наиболее распространенных лекарственных средств, часто назначаемых в клинической и ветеринарной практике. Известно, что прием НПВП приводит к развитию острого гастрита через неделю после начала лечения практически в 100 % случаев [1]. Реактивная гастропатия, развивающаяся вследствие употребления НПВП, является вторым наиболее распространенным гистологическим диагнозом, устанавливаемым при проведении биопсии желудка [4]. В сложившихся условиях становится актуальной и обоснованной разработка способов предотвращения реализации побочных эффектов при приеме НПВП.
Цель исследования — на модели химического гастрита, вызванного приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, апробировать в эксперименте новые способы лечения НПВП-гастропатии.
Методика исследования.
Неинбредные белые крысы были взяты в эксперимент в количестве 75 животных. НПВП-гастропатию моделировали по оригинальной методике (получено положительное решение от 04.02.2011 г. о выдаче патента на изобретение по заявке № 2009145268/14 (064542) «Способ моделирования гастропатии»). В соответствии с задачей исследования сформированы следующие экспериментальные группы:
I — контрольная группа — интактные животные;
II — животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5 %-го раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Найз®;
III — животные, получавшие смесь 5 %-го раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Кетофен®;
IV — животные, получавшие смесь 5 %-го раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Найз® и последующую экспериментальную терапию препаратом Омез® в течение 28 дней, n = 15;
V — животные, получавшие смесь 5 %-го раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Найз® и последующую экспериментальную терапию препаратом Фамотидин® в течение 28 дней, n = 15. Экспериментальные исследования выполнены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755).
Для проведения гистологического исследования забирали образцы желудка в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах на 22 день эксперимента. Гистологические препараты готовили по стандартным методикам с заливкой в гистамикс, окрашивали гематоксилином, эозином и пикрофуксином по ван Гизону.
Для иммуногистохимических исследований использовали моноклональные антитела к регуляторному протеину Ki-67, моноклональные антитела к муцину 5АС, моноклональные антитела к проапоптоти-ческому белку Fas ligand, моноклональные антитела к гастрину, а также полный диагностический набор компании Diagnostic BioSystems (USA), предназначенный для
проведения экспериментальных исследований. Иммуногистохимические исследования проводили по стандартным протоколам [3] в соответствии с инструкциями фирмы-производителя. Срезы докрашивали гематоксилином Майера, заключали в канадский бальзам и исследовали в проходящем свете микроскопа при увеличении х 400. Оценка интенсивности перокси-дазной метки и определение индекса пролиферации на основе экспрессии регуляторного протеина Ki-67 проводились полу-количественным методом — учитывалось число позитивных на 100 учтенных ядер (при учете 500-1000 клеток) [1]. Гибель клеток в форме апоптоза в покровно-ямочном эпителии СОЖ определяли по индексу апоптоза (!АПТ) по формуле: !АПТ (%) = N (число апоптозных клеток, позитивных к Fas Ligand)/N1 (общее число клеток) * 100 [2].
Морфометрический анализ включал измерение толщины слизистой оболочки, толщины мышечной пластинки слизистой оболочки, длины желудочных желез. Измерение гистологических объектов осуществляли при помощи окуляр-микрометра при увеличении микроскопа х 280 и программного пакета BioVision, version 4,0 (Австрия). Результаты исследований подвергнуты статистической обработке с применением программного пакета Biostat.
Результаты исследований.
Строение слизистой оболочки желудка (СОЖ) интактных животных соответствовало нормальному с учетом особенностей данного вида. При проведении иммуноги-стохимических исследований экспрессия муцина МиС5АС выявлена в цитоплазме клеток ямочного эпителия при отсутствии окрашивания цитоплазмы эпителиоци-тов желез. Индекс клеточной пролиферации (ИП), определяемый по интенсивности экспрессии регуляторного протеина Ki-67, характеризовался как низкий, а пролиферирующие клетки выявлялись, главным образом, в эпителии шейки желудочных желез. Также у интактных животных выявлена низкая экспрессия проапоптотического белка Fas Ligand, что отразилось на величине индекса апоптоза (!АПТ).
В группе, получавшей НПВП в сочетании с 5 %-ным раствором аскорбиновой кислоты, наблюдали развитие НПВП-гастропатии. В СОЖ отмечались сосудистые расстройства, в железистой части — дистрофические изменения ямочного эпителия, увеличение количества париетальных клеток в дне желез фундального и кардиального отделов, появление в собственной пластинке слизистой оболочки большого количества гладких миоци-тов, ее отек, краевое стояние лейкоцитов в просвете сосудов, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, статистически достоверное увеличение числа обкла-дочных клеток в эпителии желез, что подтверждалось результатами морфометрических исследований. Выявлена активация процессов апоптоза, аномальная пролиферация эпителиоцитов в желудочных ямках и аномальная секреция муцина MUC 5AC в эпителии желез.
В стенке желудка животных опытной группы, получавших с целью регуляции активности кислотно-пептического фактора Омез®, дистрофические изменения эпителиоцитов СОЖ отмечались в 40 % случаев у животных, получавших
Кетофен®, и 20 % животных, получавших Найз®. В ряде препаратов (70 %) отмечалось обусловленное отеком тканей утолщение собственной пластинки слизистой оболочки и гипертрофия мышечной пластинки СОЖ, дистрофия эпителия. При моделировании НПВП-гастропатии гистохимически выявили увеличение количества арген-таффинных ЕС-клеток. При применении экспериментальной терапии Омезом® и Фамотидином® количество ЕС-клеток оставалось увеличенным.
При окрашивании по методу ШИК в слизистой оболочке интактных животных интенсивная реакция выявлялась в эпителиальных клетках в области желудочных ямок и шеек желудочных желез. В теле желез визуализировались единичные слабоокра-шенные эпителиальные клетки. Отношение ШИК-реакции к диастазе и фенилгидразину позволяло считать, что в состав секрета входят нейтральные муцины. При моделировании НПВП-гастропатии наблюдали нарушение зонального распределения нейтральных мукополисахаридов, выражающееся в их преимущественной локализации в дне желудочных желез. Кислые и сульфа-тированные мукополисахариды в эпителии СОЖ интактных животных выявлялись только в эпителиоцитах дна и частично тела желудочных желез. При моделировании НПВП-гастропатии также наблюдалось нарушение нормальной локализации сульфомуцинов и кислых мукополи-сахаридов: позитивная реакция наблюдалась преимущественно в эпителии желудочных ямок. При использовании Омеза® и Фамотидина® отмечалось восстановление нормального зонального распределения нейтральных муцинов в СОЖ — их локализация соответствовала локализации интактных животных, исключая 2 случая (13,33 %). Что касается локализации кислых мукопо-лисахаридов, то в 5 случаях (33,33 %) они выявлялись в покровно-ямочном эпителии, и только у 10 животных их локализация была типичной при использовании Омеза® и в 26,67 % случаев - при использовании Фамотидина®. Сульфомуцины у 8 животных (53,33 %), получавших Омез®, и у 6 животных (40 %), получавших Фамотидин®, также имели нетипичную локализацию.
Иммуногистохимическими методами проведено определение экспрессии гастрина в G-клетках диффузной нейроэндокринной системы (ДНЭС), локализующихся в СОЖ. Количество G-клеток в эпителии СОЖ экспериментальных животных (на тестовой площади 0,042 мм2) достоверно увеличивалось по сравнению с контролем при моделировании НПВП-гастропатии. Оно оставалось увеличенным и в группах, получавших терапию антисекреторными средствами, в большей степени при использовании Омеза®. Ииммуногистохимически определенный индекс пролиферации у животных, получавших Омез®, составил 22,48 ± 1,56; 1АПТ — 8,92 ± 0,27, получавших Фамотидин® — 1АПТ = 8,22 ± 0,18; ИП = 19,52 ± 2,41. Полученные данные могут быть объяснены тем, что применение антисекреторных средств защищает слизистую оболочку от агрессивных кислотных факторов, но, с другой стороны, способствует пролиферации обкладочных клеток и клеток некоторых популяций ДНЭС.
Морфометрически в группах с экспериментальной НПВП-гастропатией,
Аграрный вестник Урала №4 (83), 2011 г.^^ЦЦ^-
Ветеринария "V
получавших как Омез®, так и Фамотидин®, отмечалось достоверное по сравнению с интактными животными и с соответствующей группой с НПВП-гастропатией увеличение размеров париетальных клеток на фоне недостоверного изменения средних размеров их ядер, что отразилось на изменении ядерно-цитоплазматического отношения в этих группах.
Выводы.
Развитие НПВП-гастропатии у экспериментальных животных проявляется формированием сосудистых расстройств,
аномальную пролиферацию эпителиоцитов в желудочных ямках и аномальную секрецию муцина MUC 5AC в эпителии желез.
Применение антисекреторных средств (ингибиторов протонной помпы и блока-торов Н2-рецепторов гистамина) способствует восстановлению целостности СОЖ, нивелированию сосудистых расстройств, нормализации зонального распределения муцинов, но приводит к гипертрофии париетальных клеток (особенно при использовании ингибиторов протонной помпы) и нарушению взаимоотношений в системе апудо-цитов.
Литература
1. Дроздов В. Н. Гастропатии, вызванные нестероидными противовоспалительными препаратами: патогенез, профилактика и лечение // Consilium medicum. 2005. Т. 7. № 1.
2. Осадчук М. А., Пахомова А. Л., Кветной И. М. Хронический гастрит с функциональной диспепсией: патогенетические особенности клинических проявлений // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 2002. № 5. С. 35-39.
3. Раскин Г. А. Онкоген HER2 в раке молочной железы: механизм влияния на поведение опухоли (сравнительное количественное иммуногистохимическое исследование) : автореф. дисс. ... канд. мед. наук. Казань, 2007. 24 с.
4. Meddings JB., Kirk D., Olson ME. Noninvasive detection of nonsteroidal anti-inflammatory drug-induced gastropathy in dogs // Am J Vet Res. 1995. Aug. 56 (8). 977-81.
дистрофических изменений ямочного эпителия, увеличением количества париетальных клеток в дне желез фундального и кардиального отделов, появлением в собственной пластинке слизистой оболочки большого количества гладких миоцитов, увеличением средних показателей толщины СОЖ за счет увеличения ширины мышечной пластинки и статистически достоверным увеличением числа обкладочных клеток в эпителии желез.
Иммуногистохимические исследования выявили активацию процессов апоптоза,
ВЛИЯНИЕ СЕДИМИНА НА СОСТОЯНИЕ
перекисного окисления липидов
в организме коров
ПРИ ИСКУССТВЕННО СМОДЕЛИРОВАННОМ
стрессовом воздействии
т. в. Семенович, аспирант, уральская ГАвМ
457100, Челябинская область, г. Троицк, ул. Гагарина, д. 13
Ключевые слова: стресс, седимин, коровы, кровь, перекисное окисление липидов. Keywords: bload, cow, stress, peroxide oxidation of lipids.
В последние годы возрос интерес к клиническим аспектам исследования процесса свободнорадикального перекисного окисления липидов (ПОЛ). Это обусловлено тем, что дефект в указанном звене метаболизма способен снизить резистентность организма к воздействию на него неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды. Воздействие стрессовых факторов на организм животных связано с интенсивным образованием токсических перекисей в тканях, нарушением проницаемости клеточных мембран, снижением ряда ферментативных систем, обеспечивающих биока-талические процессы организма. В результате интенсификации процессов перекисного окисления липидов образуется значительное количество промежуточных (общие полиеновые и диеновые коньюгаты, кето-диены, малоновый диальдегид) и конечных (шиффовы основания) продуктов окисления.
Для ускоренного формирования приспособительной реакции организма в условиях стресса целесообразно применять препараты, обладающие адаптогенным и антиок-сидантным действием. Они способны регулировать уровень свободно-радикальных процессов и влиять на окислительный метаболизм. В ряду этих веществ наиболее перспективными являются соединения селена. Объектом наших исследований был выбран препарат «Седимин», который
представляет собой водную смесь соединений йода и селена на стабилизирующей основе железодекстранового комплекса.
Цель и методика исследований.
Целью наших исследований было изучение влияния седимина на интенсивность процессов перекисного окисления липидов в организме коров и определение возможности использования препарата в качестве адаптогена.
Исследования проводили на базе ООО «Ясные поляны» Троицкого района Челябинской области. Для этого из стресс-чувствительных коров, выявленных по методу А. И. Кузнецова, Ф. А. Сунагатуллина [4], по принципу аналогов были сформированы пять групп коров черно-пестрой породы, с живой массой 450-500 кг. Стрессовое состояние у всех опытных животных моделировали путем внутрикожного введения 0,1 мл медицинского скипидара с помощью безигольного инъектора в подлопаточную область [6].
Седимин вводили согласно следующей схеме:
1 группа — коровам по вышеназванной методике вводили скипидар;
2 группа — коровам за сутки до введения скипидара внутримышечно однократно вводили седимин, в дозе 10 мл на животное;
3 группа — коровам через
2 часа после введения скипи-д ара вн утри м ы шеч н о од н ократн о
вводили седимин, в дозе 10 мл на животное;
4 группа — коровам за сутки до и через
2 часа после введения скипидара вводили седимин по 5 мл на животное;
5 группа (контрольная) — коровам препараты не применяли.
Для диагностики липоперекисной патологии и оценки эффективности использования препарата у коров опытных групп были взяты пробы крови через 2 и 24 часа после действия стресс-фактора. В сыворотке крови определяли следующие показатели: малоновый диальдегид (МДА) — методом, модифицированным
Э. Н. Коробейниковой (1987); диеновые коньюгаты (ДК) и диенкетоны (КД) в плазме крови —спектрофотометрическим методом
B. П. Гаврилова (с соавт.) в модификации
Э. Н. Коробейниковой (2002); активность супероксиддисмутазы (СОД) — методом
C. Чевари (с соавт.) (1985), соединения типа оснований Шиффа — по А. В. Архиповой (2004) [2]. Исследования проводились в биохимической лаборатории медицинской государственной академии г. Челябинска.
Статистическую обработку полученных результатов с вычислением биометрических констант проводили по В. А. Серединой (2001).
Для определения степени влияния седимина на исследуемые показатели крови использовали однофакторный дисперсионный анализ [1, 3, 5].
