CC BY
158. Ashkenazi S., Vertruyen A., Aristegui J. et al. Superior relative efficacy of live attenuated influenza vaccine compared with inactivated influenza vaccine in young children with recurrent respiratory tract infections. Pediatr. Infect. Dis. J. 2006, 25 (10): 870-879.
9. Feldman S., Wright P., Webster R. et al. Use of influenza A virus vaccines in seronegative children: live cold-adapted versus inactivated whole virus. J. Infect. Dis. 1985, 152 (6): 12121218.
10. Gustin K., Maines T., Belser J. et al. Comparative immunogenicity and cross-clade protective efficacy of mammalian cell-grown inactivated and live attenuated H5N1 reassortant vaccines in ferrets. J. Infect. Dis. 2011, 204 (10): 1491-1499.
11. Khan A., Polezhaev F., Vasiljeva R. et al. Comparison of US inactivated split-virus and Russian live attenuated, cold-adapted trivalent influenza vaccines in Russian schoolchildren. J. Infect. Dis. 1996, 173 (2): 453-456.
12. Monto A., Ohmit S., Petrie J. et al. Comparative efficacy of inactivated and live attenuated influenza vaccines. NEJM. 2009, 361 (13): 1260-1267.
13. Ohmit S., Victor J., Rotthoff J. et al. Prevention of antigenically drifted influenza by inactivated and live attenuated vaccines. NEJM. 2006, 355 (24): 2513-2522.
14. Ohmit S., Victor J., Teich E. et al. Prevention of symptomatic seasonal influenza in 2005-2006 by inactivated and live attenuated vaccines. J. Infect. Dis. 2008, 198 (3): 312-317.
15. Powers D., Fries L., Murphy B. et al. In elderly persons live attenuated influenza A virus vaccines do not offer an advantage over inactivated virus vaccine in inducing serum or secretory antibodies or local immunologic memory. J. Clin. Microbiol. 1991, 29 (3): 498-505.
16. WHO. Antigenic and genetic characteristics of zoonotic influenza viruses and development of candidate vaccine viruses for pandemic preparedness. WER. 2013, 88 (42): 449-463.
17. WHO. Human cases of influenza at the human-animal interface, 2013. WER. 2014, 89 (28): 309-320.
18. WHO. Influenza vaccines: WHO position paper. WER. 2005, 80(33): 279-287.
19. WHO. Vaccines against influenza WHO position paper — November 2012. WER. 2012, 87 (47): 461-476.
20. WHO. WHO manual on animal influenza diagnosis and surveillance. 2002.
21. Wright P., Neumann G., Kawaoka Y Orthomyxoviruses. In: Knipe D., Howley P., eds. Fields Virology. Lippincott Williams & Wilkins, 2013.
22. Zahradnik J., Kasel J., Martin R. et al. Immune responses in serum and respiratory secretions following vaccination with a live cold-recombinant (CR35) and inactivated A/USSR/77 (H1N1) influenza virus vaccine. J. Med. Virol. 1983, 11 (4): 277-285.
Поступила 17.06.14
Контактная информация: Васильев Юрий Михайлович, к.б.н.,
105064, Москва, М. Казенный пер., 5а, р.т. (495)917-49-00
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015
Е.А.Курбатова1, Н.К.Ахматова1, Н.Б.Егорова1, И.Б.Семенова1, Н.Е.Ястребова1, Ю.Е.Цветков2, Е.В.Сухова2, Д.В.Яшунский3, Н.Э.Нифантьев2
ЭПИТОПНАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ СИНТЕТИЧЕСКОГО ДИСАХАРИДА, ПОВТОРЯЮЩЕГОСЯ ЗВЕНА КАПСУЛЬНОГО ПОЛИСАХАРИДА STREPTOCCUS PNEUMONIAE СЕРОТИПА 3
1НИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова, 2Институт органической химии им. Н.Д.Зелинского, 3НИИ биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича, Москва
Цель. Изучение эпитопной специфичности синтетического дисахарида, повторяющегося звена S. pneumoniae серотипа 3, конъюгированного с бычьим сывороточным альбумином (БСА). Материалы и методы. Конъюгат синтетического дисахарида с БСА получали скваратным методом. Антигенную активность конъюгата исследовали методом конкурентного ИФА. Титр IgG к капсульному полисахариду S. pneumoniae серотипа 3 определяли в ИФА при использовании сывороток мышей, двукратно иммунизированных
конъюгатом дисахарида, сорбированным на гидроксиде алюминия. Результаты. Конъюгат дисахарида, использованный в качестве покрывающего лунки антигена (4 мкг/лунка) в ИФА, характеризовался высокой степенью специфичности и взаимодействовал только с IgG к S. pneumoniae серотипа 3 в антимикробных сыворотках животных, не вступая в реакцию с антителами (АТ) к другим серотипам пневмококка (6B, 10A, 19A, 19F, 23F). В реакции конкурентного ИФА выявлено, что дисахарид, конъюгированный с БСА, инги-бировал связывание АТ к дисахариду на 78,8%, бактериальный капсульный полисахарид на 56,9%, БСА не ингибировал активность сыворотки. При исследовании сывороток мышей, иммунизированных конъюгатом дисахарида S. pneumoniae серотипа 3 в ИФА, где в качестве сорбированного на планшете антигена использовали капсульный полисахарид, установлено присутствие IgG к капсульному полисахариду в титре 1:1600. Заключение. Дисахарид, являющийся единичным повторяющимся звеном S. pneumoniae серотипа 3, содержит ключевой эпитоп капсульного полисахарида. Синтетический дисахарид может быть использован как компонент мультивалентных конъюгированных пневмококковых вакцин и для разработки диагностических тест-систем.
Журн. микробиол., 2015, № 3, С. 46—53
Ключевые слова: синтетический дисахарид, конъюгат, S. pneumoniae серотипа 3, антитела, ингибирование ИФА
E.A.Kurbatova1, N.K.Akhmatova1, N.B.Egorova1, I.B.Semenova1, N.E.Yastrebova1, Yu.E.Tsvetkov2, E.V.Sukhova2 D.V.Yashunsky3, N.E.Nifantiev2
EPITOPIC SPECIFICITY OF A SYNTHETIC DISACCHARIDE, RECURRING LINK OF CAPSULE POLYSACCHARIDE CHAIN OF SEROTYPE 3 STREPTOCCUS PNEUMONIAE
1Mechnikov Reasearch Institute of Vaccines and Sera, 2Zelinsky Institute of Organic Chemistry, 3Orekhovich Research Institute of Biomedical Chemistry, Moscow, Russia
Aim. Study epitopic specificity of synthetic disaccharide, recurring link of serotype 3 S. pneumoniae, conjugated with bovine serum albumin (BSA). Materials and methods. Conjugate of the synthetic disaccharide with BSA was obtained by squarate method. Antigenic activity of the conjugate was studied in competitive EIA. Titers of IgG against capsule polysaccharide of serotype 3 S. pneumoniae were determined in EIA by using sera of mice immunized twice with disaccharide conjugate sorbed onto aluminum hydroxide. Results. Disaccharide conjugate used as a well-covering antigen (4 ^g/well) in EIA was characterized by a high degree of specificity and interacted only with IgG against serotype 3 S. pneumoniae in antimicrobial sera of animals without reacting with antibodies (ABs) against other pneumococcus serotypes (6B, 10A, 19A, 19F, 23F). Disaccharide conjugated with BSA was determined in competitive EIA to inhibit bonding ofABs to disaccharide by 78.8%, bacterial capsule polysaccharide by 56.9%, BSA did not inhibit the sera activity. The study of sera of mice immunized by serotype 3 S. pneumoniae disaccharide conjugate in EIA, where capsule polysaccharide was used as a plate-sorbed antigen, has established the presence of IgG against capsule polysaccharide at a titer of 1:1600. Conclusion. The disaccharide that is a single recurring link of serotype 3 S. pneumoniae contains a key epitope of capsule polysaccharide. The synthetic disaccharide could be used as a component of multivalent conjugated pneumococcal vaccines and for development of diagnostic test-systems.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2015, No. 3, P. 46—53
Key words: synthetic disaccharide, conjugate, serotype 3 S. pneumoniae, antibodies, EIA inhibition ВВЕДЕНИЕ
Вакцинопрофилактика пневмококковой инфекции полисахаридными и конъю-гированными вакцинами, покрывающими 80 — 90% серотипов штаммов, выделяемых от пациентов при заболеваниях пневмококковой этиологии, привела к снижению
заболеваемости во всех возрастных группах населения [1, 5, 9]. В то же время, показано, что применение традиционных вакцин на основе капсульного полисахарида пневмококка не предотвращает появления антибиотикоустойчивых штаммов этого возбудителя [14, 16, 22], новых серотипов пневмококка [12, 17, 18], а состав применяемых зарубежных вакцин не учитывает региональные особенности распространения штаммов в России и возможное изменение эпидемиологической ситуации.
Наряду с этим, к недостаткам вакцин на основе капсульных полисахаридов относится сложность технологии их получения и освобождения от бактериальных примесей, не всегда успешное проведение ковалентного присоединения нескольких полисахаридов к белку-носителю из-за их высокой молекулярной массы и недостаточной степени очистки [8, 19]. Эти факторы определяют высокую стоимость таких вакцин и ограничивают их массовое применение в практике. В связи с этим, приоритетным направлением современной вакцинологии является разработка синтетических и полусинтетических пневмококковых вакцин [7, 20].
Эпитопы капсульного полисахарида пневмококка могут быть представлены оли-госахаридами, полученными путем химического синтеза. Иммунный ответ на оли-госахариды высокоспецифичен. Некоторые олигосахариды, конъюгированные с белком, индуцируют образование более высокого уровня антител (АТ) к капсульному полисахариду, чем традиционные полисахаридные конъюгатные вакцины [11].
В ранее проведенных исследованиях нами показано, что синтетический гексаса-харид, отражающий участок цепи капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14, конъюгированный с бычьим сывороточным альбумином (БСА), является имму-ногенным, вызывает образование протективных IgG и защищает мышей от заражения пневмококком этого серотипа [3]. Дальнейшие исследования предполагают проведение синтеза олигосахаридных фрагментов других серотипов пневмококка для последующего создания поливалентной полусинтетической конъюгированной вакцины.
В настоящей работе исследованы иммунологические свойства синтетического дисахарида S. pneumoniae серотипа 3, значимость которого в последние годы возрастает [1]. По данным российских исследователей штаммы этого серотипа являются частой причиной осложненной и неосложненной пневмонии, отита, а также встречаются при назофарингеальном носительстве [6].
Цель работы — изучение эпитопной специфичности синтетического дисахарида, повторяющегося звена капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 3, конъю-гированного с БСА.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Использованы мыши линии BALB/c массой 14 — 16 г, самцы, кролики породы шиншилла массой 2,5 — 3 кг из питомника НЦ биомедицинских технологий (филиал «Андреевка»); синтетический дисахарид, отражающий повторяющееся звено капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 3, конъюгировали с БСА скваратным методом [4]. Конъюгат дисахарида [ßGlcA-(1-4)ß-Glc-O-спейсер]l9-БСА содержал 19% углеводов. Разовая иммунизирующая доза конъюгата дисахарида составляла 8 мкг/мышь в расчете на олигосахарид. Гидроксид алюминия прибавляли к конъюгату из расчета 0,5 мл на 1 мг сухого препарата, сорбцию проводили в течение ночи при температуре +4°C.
Препарат, содержащий капсульный полисахарид S. pneumoniae типа 3, получали из инактивированных ацетоном микробных клеток однократной водной экстракцией с последующим лиофильным высушиванием. Присутствие капсульного полисахарида в препарате подтверждено методом ингибирования ИФА при сорбции на планшетах конъюгата синтетического дисахарида.
Антимикробные сыворотки к S. pneumoniae серотипа 3 получали при использовании двух видов животных — мышей и кроликов. Для получения мышиных антимикробных сывороток мышей линии BALB/c иммунизировали внутрибрюшинно
дозой 500 мкг инактивированных ацетоном сухих микробных клеток штамма S. pneumoniae серотипа 3 в расчете на мышь 6-кратно с интервалом 7 суток. Сыворотку крови получали через 20 дней после последней иммунизации, аликвотировали и хранили при температуре минус 80°C.
Иммунизацию кроликов проводили внутривенно многократно увеличивающимися дозами инактивированных микробных клеток в течение 30 дней. Общее количество инъекций: 12 — 15. Сыворотки лиофильно высушивали и хранили при +4°C.
Для последующей оценки возможной перекрестной активности конъюгата диса-харида получали антимикробные сыворотки к S. pneumoniae серотипов 6В, 10А, 19А, 19F и 23F. Мышей иммунизировали 4 — 5-кратно внутрибрюшинно нарастающими сублетальными дозами живой культуры каждого серотипа пневмококка, начиная с дозы 500х106 микробных клеток, с интервалом между введениями 14 дней. Сыворотку крови получали на 14 сутки после последней иммунизации, аликвотировали и хранили при температуре минус 80°C.
Антигенную активность синтетического дисахарида S. pneumoniae серотипа 3 определяли методом конкурентного ИФА при сорбции на планшетах бактериального капсульного полисахарида этого серотипа пневмококка в концентрации 10 мкг/ лунка [2]. Процент ингибирования сыворотки рассчитывали по формуле: 100% — [(У/Х х 100)]%, где Х — оптическая плотность сыворотки (ОП450) до внесения антигена, У — ОП450 после прибавления антигена.
Титр IgG к S. pneumoniae серотипа 3 в антимикробных сыворотках крови определяли методом ИФА [2] при использовании в качестве покрывающего лунки антигена конъюгата дисахарида. Для определения титра IgG в сыворотке крови мышей, иммунизированных конъюгатом дисахарида, на планшетах сорбировали препарат капсульного полисахарида. В качестве контроля использовали сыворотки неиммунизирован-ных животных.
Статистическую обработку данных проводили при использовании программного обеспечения Statistica 8. Достоверность различий между сравниваемыми группами определяли методом Манна-Уитни для независимых выборок. Различия считали статистически значимыми при p<0,05.
РЕЗУЛ ЬТАТЫ
Для проведения исследований разработана экспериментальная твердофазная ИФА тест-система, предназначенная для определения АТ к капсульному полисахариду S. pneumoniae серотипа 3 в сыворотке крови и других биологических жидкостях организма.
Оптимальную сорбирующую дозу конъюгата дисахарида, позволяющую выявить наибольшее количество АТ, исследовали в диапазоне концентраций от 1,6 до 0,0125 мкг/лунка. Результат оценивали по титру IgG к дисахариду — повторяющемуся звену капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 3 в антимикробной сыворотке кроликов, иммунизированных инактивированными бактериями этого же серотипа (рис. 1).
Оптимальная сорбирующая доза конъ-югата дисахарида, позволяющая выявить наибольший уровень IgG (1:3200) в антимикробной сыворотке кроликов, составляла 0,2 — 0,4 мкг в расчете на лунку по
Рис. 1. Выбор оптимальной сорбирующей дозы дисахарида S. pneumoniae серотипа 3, конъюгиро-ванного с БСА, на полистироловых аланшетах.
Титр IgG — последнее разведение антимикробной сыворотки кролика, превышающее ОП450 в контроле не менее, чем в 2 раза. Здесь и на рис. 2, 3: данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение, * р<0,05 по тесту Манна-Уитни.
4. ЖМЭИ 3 № 13-2015
49
Рис. 2. Оценка специфичности ИФА тест-системы в реакции с антимикробными сыворотками животных к различным серотипам S. pneumoniae.
Сорбирован конъюгат дисахарида S. pneumoniae серотипа 3 в концентрации 0,4 мкг/лунка. а — антимикробная кроличья сыворотка к S. pneumoniae серотипа 3; К — контроль.
сравнению с другими испытанными концентрациями (p<0,05). В дальнейшей работе использовали концентрацию конъю-гата дисахарида 0,4 мкг/лунка.
Для оценки специфичности экспериментальной тест-системы определяли титр IgG в кроличьих и мышиных антимикробных сыворотках к серотипу 3, а также серотипам 6B, 10A, 19A, 19F, 23F, выбранных в качестве отрицательного контроля (рис. 2). Результат сравнивали с титром АТ у неиммунизированных животных (контроль).
Оценка специфической активности ИФА тест-системы показала, что конью-гат синтетического дисахарида взаимодействовал только с IgG к S. pneumoniae серотипа 3 (p<0,05). В остальных антимикробных сыворотках (6В, 10А, 14, 19F и 23F) титр АТ соответствовал уровню, определяемому у неиммунизирован-ных животных (контроль), что подтвердило специфичность разработанной ИФА тест-системы.
Антигенную активность синтетического дисахарида, конъюгированного с БСА, и его составляющих — дисахаридно-го лиганда и БСА, а также бактериального капсульного полисахарида определяли методом конкурентного ИФА при использовании разработанной тест-системы. Результат оценивали по проценту ингиби-рования IgG в антимикробной сыворотке кролика (рис. 3). Конъюгат дисахарида, дисахарид per se и капсульный полисахарид снижали 0П450 антимикробной контрольной сыворотки с 1,04 до 0,22 (p<0,05); 0,87 и 0,448 ед. (p<0,05) соответственно, то есть процент ингибирования АТ к повторяющемуся звену капсульного полисахарида для каждого из этих препаратов составил 78,8; 16,3 и 56,9%. БСА не вступал в реакцию с сывороточными антителами, следовательно, его вклад в ингиби-рование сыворотки в составе конъюгата дисахарида можно исключить.
Для выявления способности конъюга-та дисахарида вызывать образование IgG к капсульному полисахариду S. pneumo-niae серотипа 3 мышей иммунизировали
конъюгатом, сорбированным на гидроксиде алюминия, двукратно разовой дозой 8 мкг по дисахариду в расчете на мышь. Титр IgG определяли на 14 сутки после второй иммунизации. Установлено, что титр IgG к капсульному полисахариду в сыворотке
Рис. 3. Конкурентный ИФА с антигенами S. pneumoniae серотипа 3.
Сорбирован конъюгат синтетического дисахарида с БСА в концентрации 0,4 мкг/лунка. Разведение антимикробной кроличьей сыворотки 1:400. К — контроль сыворотки; КП — бактериальный капсульный полисахарид S. pneumoniae серотипа 3. Ингибирование активности сыворотки проводили в концентрации 10 мкг/лунка каждым из препаратов.
крови иммунизированных мышей составил 1:1600 по сравнению с неиммунизиро-ванными животными (1:200), то есть в 8 раз превышал контрольные значения (p<0,05).
ОБСУЖДЕНИЕ
Разработка пневмококковых вакцин на основе синтетических олигосахаридов, отражающих фрагменты цепи капсульного полисахарида S. pneumoniae, является приоритетным направлением современной вакцинологии. В различных лабораториях мира получен ряд синтетических олигосахаридов серотипов 1-4, 6А/В, 7F, 8, 9A/V, 14, 17F, 18C, 19A/F, 22F, 23F, 27, 29 [13]. Конъюгаты белков-носителей с некоторыми синтетическими олигосахаридами, отвечающими фрагментам капсульных полисахаридов различных серотипов, были исследованы в качестве потенциальных вакцин [10].
В настоящей работе исследована эпитопная специфичность синтетического дисахарида S. pneumoniae серотипа 3 и его способность в составе конъюгата с БСА индуцировать образование IgG к капсульному полисахариду этого серотипа пневмококка.
При разработке ИФА тест-системы установлено, что оптимальная концентрация конъюгата дисахарида, сорбированного на планшете, составила 0,2 — 0,4 мкг в расчете на лунку. Использование такой сорбирующей дозы позволило выявить наиболее высокий уровень АТ в поликлональной антимикробной кроличьей сыворотке. Показано, что конъюгат дисахарида, сорбированный на планшете, характеризовался высокой степенью специфичности и взаимодействовал только с IgG к S. pneumoniae серотипа 3 в сыворотках животных, не вступая в реакцию с антителами к другим се-ротипам пневмококка (6B, 10A, 19A, 19F, 23F). Разработанная высокочувствительная и специфичная ИФА тест-система для определения уровня антител к S. pneumoniae серотипа 3 дополняет ранее предложенную тест-систему на основе синтетического гексасахарида серотипа 14 [2].
В реакции конкурентного ИФА выявлено, что дисахарид, конъюгированный с БСА, на 78,8% ингибировал связывание АТ, присутствующих в поликлональной антимикробной сыворотке крови кроликов, иммунизированных инактиврированными бактериальными клетками S. pneumoniae серотипа 3. Доказано, что АТ к БСА, которые могут присутствовать в сыворотке иммунизированных животных, не влияли на результат реакции. Ингибирующая активность бактериального капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 3 составила 56,9%. Сходные результаты получены нами ранее при исследовании свойств конъюгата гексасахарида S. pneumoniae серо-типа 14 [2] и согласуются с данными других авторов, исследовавших ингибирующую активность синтетических олигосахаридов S. pneumoniae серотипа 14 [15]. Меньшая антигенная активность капсульного полисахарида могла быть связана с недостаточной степенью его очистки от бактериальных примесей, а также отсутствием взаимодействия с олигосахарид-специфическими АТ, присутствующими в антимикробной сыворотке [15], которые могут вносить свой вклад в ингибирование реакции.
Safari D. et al. [21] при исследовании иммуногенной активности конъюгатов синтетических олигосахаридов S. pneumoniae серотипа 14 показали, что в большинстве иммунных сывороток присутствуют олигосахарид-специфические антитела, не все из которых распознают капсульный полисахарид S. pneumoniae серотипа 14. То есть, выявленное нами присутствие в антимикробных сыворотках антител к дисахариду не позволяло сделать заключение о том, будут ли они распознавать капсульный полисахарид S. pneumoniae серотипа 3. Способность антител к дисахариду вступать во взаимодействие с капсульным полисахаридом была доказана при исследовании сывороток мышей, иммунизированных конъюгатом дисахарида S. pneumoniae серотипа 3 в ИФА, где в качестве покрывающего лунки антигена использовали бактериальный капсуль-ный полисахарид. Установлено, что в сыворотке крови мышей, иммунизированных
конъюгатом дисахарида, в высоком титре (1:1600) присутствуют IgG к капсульному полисахариду. Аналогичные данные получены при исследовании иммуногенной активности синтетического гексасахарида, отражающего участок цепи S. pneumoniae серотипа 14 [3].
На основе полученных данных сделан вывод о том, что синтетический дисахарид, отражающий единичное повторяющееся звено капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 3, содержит ключевой эпитоп.
Использование иммуногенных синтетических олигосахаридов актуальных серотипов пневмококка открывает путь для создания полусинтетической конъ-югированной поливалентной пневмококковой вакцины, наиболее важным преимуществом которой является возможность быстрой замены ее серотипового состава в соответствии с эпидемиологической ситуацией и региональными особенностями.
ЛИТЕРАТУРА
1. Белошицкий Г.В., Королева И.В. Серотиповая характеристика штаммов S.pneumoniae в Москве. Эпидемиол. вакцинопроф. 2014, 74 (1): 90-96.
2. Курбатова Е.А. Воробьев Д. С., Семенова И. Б., Сухова Е. В., Яшунский Д. В., Цветков Ю.Е., Нифантьев Н.Э. Разработка подходов к созданию экспериментальной тест-системы для оценки антигенной активности синтетических олигосахаридных лигандов, родственных фрагментам цепи капсульного полисахарида Streptoccoccus pneumoniae типа 14. Биохимия. 2013, 7: 1046-1052.
3. Курбатова Е.А., Воробьев Д.С., Ахматов Э.А., Ахматова Н.К., Егорова Н.Б., Цветков Ю.Е., Сухова Е.В., Яшунский Д.В., Нифантьев. Н.Э. Протективная активность глико-конъюгата на основе синтетического гексасахарида — родственного фрагменту цепи капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 14. БЭБИМ. 2014, 157 (5): 630-633.
4. Сухова Е. В., Яшунский Д. В., Цветков Ю. Е., Курбатова Е. А., Нифантьева Н.Э.Синтез олигосахаридных фрагментов капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae тип 14 и их неогликоконъюгатов с бычьим сывороточным альбумином. Известия Акад. наук. Сер. хим. 2014, 2: 511-521.
5. Таточенко В.К. Перспективы развития иммунопрофилактики в России. Журн. микробиол. 2010, 5: 90-98.
6. Харит С.М. Пневмококковые вакцины. В кн.: Вакцины и вакцинация: национальное руководство. Под ред. В.В. Зверева, Б.Ф.Семенова, Р.М.Хаитова. М., ГЭОТАР-Медиа, 2011.
7. Deng S., Bai L., Reboulet R. et al. A peptide-free, liposome-based oligosaccharidevaccine, adjuvanted with a natural killer T cell antigen, generates robust antibody responses in vivo. Chem. Sci. 2014, 4: 1437-1441.
8. Galan M.C., Dumy P., Renaudet O. Multivalent glyco(cyclo)peptides. Chem. Soc. Rev. 2013, 42: 4599-4612.
9. Hutchison B.G., Oxman A.D., Shannon H.S. et al. Clinical effectiveness of pneumococcal vaccine. Meta-analysis. Can. Fam. Physician. 1999, 45: 2381-2393.
10. Jansen W.T., Snippe H. Short-chain oligosaccharide protein conjugates as experimental pneumococcal vaccines. Indian J. Med. Res. 2004, 119 (Suppl): 7-12.
11. Jansen W.T., Hogenboom S, Thijssen M.J. et al. Synthetic 6B di-, tri-, and tetrasaccharide-protein conjugates contain pneumococcal type 6A and 6B common and 6B-specific epitopes that elicit protective antibodies in mice. Infect. Immun. 2001, 69: 787-793.
12. Jin P., Kong F., Xiao M. et al. First report of putative Streptococcus pneumoniae serotype 6D among nasopharyngeal isolates from Fijian children. J. Infect. Dis. 2009, 200 (9): 13751380.
13. Kamerling J.P. Pneumococcal polysaccharides: A chemical view. In: Tomasz A. (ed.). Streptococcus pneumoniae, molecular biology and mechanisms of disease. New York, Mary Ann Liebert, 1999: 81-114.
14. Kellner J.D. Drug-resistant Streptococcus pneumoniae infections: clinical importance, drug treatment, and prevention. Semin. Respir. Infect. 2001, 16: 186-195.
15. Mawas F., Niggemann J., Jones C. et al. Immunogenicity in a mouse model of a conjugate
vaccine made with a synthetic single repeating unit of type 14 pneumococcal polysaccharide coupled to CRM197. Infect. Immun. 2002, 70: 5107-5114.
16. Ongkasuwan J., Valdez T.A., Hulten K.G. et al. Pneumococcal mastoiditis in children and the emergence of multidrug-resistant serotype 19A isolates. Pediatrics. 2008, 122 (1): 34-39.
17. Park I.H., Park S., Hollingshead S.K., Nahm M.H. Genetic basis for the new pneumococcal serotype, 6C. Infect. Immun. 2007, 75 (9): 4482-4489.
18. Park I.H., Pritchard D.G., Cartee R., et al. Discovery of a new capsular serotype (6C) within serogroup 6 of Streptococcus pneumoniae. J. Clin. Microbiol. 2007, 45 (4): 1225-1233.
19. Peri F. Clustered carbohydrates in synthetic vaccines. Chem. Soc. Rev. 2013, 42 :4543-4556.
20. Safari D., Marradi M., Chiodo F. et al. Gold nanoparticles as carriers for a synthetic Streptococcus pneumoniae type 14 conjugate vaccine. Vaccine. 2011, 29 (4): 849-854.
21. Safari D., Dekker H.A.T., Joosten A.F. Identification of the smallest structure capable of evoking opsonophagocytic antibodies against S. pneumoniae type 14. Infect. Immun. 2008,76 (10): 4615-4623.
22. Schreiber J.R., Jacobs M.R. Antibiotic-resistant pneumococci. Pediatr. Clin. North Am. 1995, 42: 519-37.
Поступила 20.09.14
Контактная информация: Курбатова Екатерина Алексеевна, д.м.н., профессор,
105064, Москва, М. Казенный пер., 5А, р.т. (495) 917-57-74
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015
О.В.Максимова1, Е.В.Зайцева2, С.А.Мазурина2, В.А.Ревякина3, В.Б.Гервазиева2
МИКРОБИОТА КИШЕЧНИКА У ДЕТЕЙ С ОЖИРЕНИЕМ И АЛЛЕРГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
1Первый Московский государственный медицинский университет, 2НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, 3НИИ питания, Москва
Цель. Исследовать микрофлору кишечника у детей с ожирением и оценить ассоциацию ее с аллергическими заболеваниями. Материалы и методы. В исследование были включены 66 детей с различной массой тела в возрасте от 3 до 17 лет. Исследование микрофлоры кишечника у детей проводили согласно приказу МЗ РФ от 09.06.2003 № 231 «Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91500.11.0004-2003). Результаты. У здоровых детей в зависимости от массы тела выявлено увеличение количества микрооорганизмов типа Firmicutes и уменьшение количества микробов, относящихся к типу Bacteroidetes. Наличие аллергической патологии сопровождалось снижением численности Bacteroidetes и наличием Bacillus и Staphylococcus aureus вне зависимости от массы тела. В то же время, у всех детей с увеличением массы тела отмечено увеличение содержания Clostridium. Заключение. Полученные данные выявили ассоциацию изменений в микробиоте кишечника с развитием ожирения и аллергопатологией.
Журн. микробиол., 2015, № 3, С. 53—58
Ключевые слова: микробиота кишечника, ожирение, аллергические заболевания, дети O.V.Maksimova1, E.V.Zaitseva2, S.A.Mazurina2, V.A.Revyakina3, V.B.Gervazieva2 INTESTINE MICROBIOTA IN CHILDREN WITH OBESITY AND ALLERGIC DISEASES
1First Moscow State Medical University, 2Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, 3Research Institute of Nutrition, Moscow, Russia
Aim. Study intestine microflora in children with obesity and evaluate its association with allergic diseases. Materials and methods. 66 children with various body weight aged 3 to 17 years were included into the study. Intestine microflora study in children was carried out according to the
