CC BY
27ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013
Е.А.Курбатова1, Д.С.Воробьев1, Н.Б.Егорова1, И.Б.Семенова1, Е.В.Сухова2, Д.В.Яшунский3 Ю.Е.Цветков2, Н.Э.Нифантьев2
ИММУНОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ КОНЪЮГАТА СИНТЕТИЧЕСКОГО ГЕКСАСАХА-РИДА, РОДСТВЕННОГО ФРАГМЕНТУ ЦЕПИ КАПСУЛЬНОГО ПОЛИСАХАРИДА STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE СЕРОТИПА 14
1НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, 2Институт органической химии им. Н.Д.Зелинского, 3НИИ биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича, Москва
Цель. Изучение антигенной и иммуногенной активности конъюгата синтетического гексасахарида, родственного фрагменту цепи капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14, с бычьим сывороточным альбумином (БСА). Материалы и методы. Синтетический гликоконъюгат на основе белка-носителя БСА и гексасахаридного лиган-да, отвечающего фрагменту цепи капсульного полисахарида, получали с использованием скваратного метода. Природный полисахаридно-белковый комплекс из штамма S. pneumoniae серотипа 14 получали из супернатанта культуральной жидкости осаждением ацетоном. Титр IgG к гексасахариду/капсульному полисахариду определяли в антимикробных сыворотках и сыворотках мышей, иммунизированных гликоконъюгатом методом ИФА. Результаты. Установлена иммуногенная активность гликоконъюгата на основе белка-носителя БСА и синтетического гексасахарида, отражающего фрагмент цепи капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14. После двукратной иммунизации в сыворотке крови мышей определяли антитела к гексасахаридному лиганду и БСА. Титр антител к гексасахариду в 4,2 превышал уровень у интактных мышей. БСА в составе конъюгата не влиял на выработку антител к гексасахариду. Заключение. Разработанная экспериментальная тест-система на основе синтетического гликоконъюгата является пригодной для оценки уровня антител к S. pneumoniae серотипа 14 у зараженных, а возможно, и бактерионосителей.
Журн. микробиол., 2013, № 6, С. 56—63
Ключевые слова: синтетический гексасахарид, S. pneumoniae серотипа 14, конъюгат, бычий сывороточный альбумин, антитело
E.A.Kurbatova1, D.S.Vorobiev1, N.B.Egorova1, I.B.Semenova1, E.V.Sukhova2, D.V.Yashunsky3, Yu.E.Tsvetkov2, N.E.Nifantiev2
IMMUNOGENIC ACTIVITY OF A CONJUGATE OF SYNTHETIC HEXASACCHARIDE RELATED TO A STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE SEROTYPE 14 CAPSULE POLYSACCHARIDE CHAIN FRAGMENT
1Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, 2Zelinsky Research Institute of Organic Chemistry, 3Orekhovich Research Institute of Biomedical Chemistry, Moscow, Russia
Aim. Study antigenic and immunogenic activity of a conjugate of synthetic hexasaccharide related to a S. pneumoniae serotype 14 capsule polysaccharide chain fragment with bovine serum albumin (BSA). Materials and methods. Synthetic glucoconjugate based on BSA protein carrier and hexasaccharide ligand reflecting capsule polysaccharide chain fragment was obtained by using squarate method. Natural polysaccharide-protein complex from S. pneumoniae serotype 14 strain was obtained from cultural fluid supernatant by acetone precipitation. IgG titer against hexasac-charide/capsule polysaccharide was determined in antimicrobial sera and sera of mice immunized
with glucoconjugate by EIA method. Results. Immunogenic activity of glucoconjugate based on BSA protein carriers and synthetic hexasaccharide reflecting S. pneumoniae serotype 14 capsule protein chain fragment was established. After 2 immunizations antibodies against hexasaccharide ligand and BSA were determined in blood sera of mice. Antibody titers against hexasaccharide exceeded the level in intact mice by 4.2 times. BSA in the conjugate did not have effect on production of antibodies against hexasaccharide. Conclusion. The developed experimental test-system based on synthetic glucoconjugate is useful for evaluation of level of antibodies against S. pneumoniae serotype 14 in infected and, probably, carriers of bacteria.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2013, No. 6, P. 56-63
Key words: synthetic hexasaccharide, S. pneumoniae serotype 14, conjugate, bovine serum albumin, antibody
ВВЕДЕНИЕ
Пневмококковая инфекция, этиологическим фактором которой являются бактерии Streptoccoccus pneumoniae, вызывает заболевания различной локализации, преимущественно респираторного тракта. По различиям в химической структуре поли-сахаридной капсулы насчитывают более 90 серотипов S. pneumoniae. Этиологически значимыми являются около 20 серотипов пневмококка, среди которых S. pneumoniae типа 14 занимает одно из ведущих мест и входит в состав всех разрешенных к применению в России коммерческих пневмококковых вакцин, конструируемых на основе природных полисахаридов пневмококка: 23-валентной полисахаридной вакцины «Пневмо 23» и конъюгированных — «Превенар», «Превенар 13», «Синф-лорикс».
Наряду с традиционными вакцинами, полученными при культивировании штаммов S. pneumoniae в питательных средах, на протяжении последних 30 лет разрабатывают синтетические вакцины. Эти исследования проводят не только в отношении S. pneumoniae [2, 8, 9], но и в отношении других микроорганизмов, имеющих полиса-харидную капсулу и другие внеклеточные полисахариды, играющие важную роль в патогенезе заболевания — Haemophilus influenzae типа b [4, 18], Meningococcus group C [6], Staphylococcus aureus [5], то есть тех микроорганизмов, у которых капсульный полисахарид играет ведущую роль в патогенезе заболевания. У S. pneumoniae капсуль-ный полисахарид является важным фактором вирулентности, и по данным ряда исследователей выработка антител к нему является главным механизмом в защите от пневмококковой инфекции [3, 14, 16].
Химическая структура капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14, состоящего из повторяющихся тетрасахаридных звеньев, хорошо изучена [11]. Известно, что иммунологически активными являются тетра-, гекса-, окта- и другие олигосаха-риды, отражающие различные участки капсульного полисахарида. Иммуногенность олигосахаридных лигандов зависит от структурных характеристик — размера, моно-сахаридной последовательности, наличия разветвлений и ряда других особенностей [17]. Это является основанием для разработки подходов к конструированию синтетической пневмококковой вакцины против S. pneumoniae. Одним из модельных полисахаридов такой вакцины может быть капсульный полисахарид S. pneumoniae се-ротипа 14 [2, 9].
В этом аспекте важное значение имеет конъюгация синтетических олигосахарид-ных фрагментов или капсульного полисахарида с белком-носителем для индукции Т-зависимого иммунного ответа. В современных коммерческих конъюгированных вакцинах («Превенар», «Превенар 13») используют рекомбинантный дифтерийный анатоксин CRM197 (нетоксичный мутантный белок Corynebacterium diphtheriae). В пневмококковой вакцине «Синфлорикс» — D-протеин нетипируемой H. influenzae в ассоциации со столбнячным и дифтерийным анатоксинами. Конъюгирование про-
водят путем ковалентного связывания природного полисахарида пневмококка с белком-носителем. Вопрос о выборе протеина для конъюгации с полисахаридами решается фирмами-производителями различно. Преимущества и недостатки этих препаратов изучены недостаточно. До сих пор нет единого мнения о влиянии белка-носителя в составе конъюгата на иммунореакивность организма.
В рамках изучения подходов к конструированию синтетической гликоконъюгат-ной вакцины против S. pneumoniae серотипа 14 в данной работе представлено исследование по выяснению роли белка-носителя в составе конъюгата на примере бычьего сывороточного альбумина (БСА). Отметим, что данная работа проведена только с исследовательскими целями, так как из-за структурной близости БСА и человеческого сывороточного альбумина БСА не может использоваться для создания вакцин.
Цель исследования — изучение антигенной и иммуногенной активности конъюгата синтетического гексасахарида, родственного фрагменту цепи капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14, с бычьим сывороточным альбумином.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Гликоконъюгат 1 (рис.) на основе белка-носителя БСА и гексасахаридного лиган-да, отвечающего фрагменту цепи капсульного полисахарида, получали, как описано в [1] с использованием скваратного метода для проведения присоединения лигандов с БСА. Очистку конъюгата 1 проводили методом гель-хроматографии на колонке Sephadex G-15 (350х25 мм) и использовали в виде лиофильно высушенного аморфного порошка.
Получение природного полисахаридно-белкового комплекса из штамма S. pneumoniae серотипа 14 (коллекция штаммов НИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова). Микробные клетки культивировали в сердечно-мозговом бульоне в течение 24 ч при температуре 37°С, клетки отделяли центрифугированием, полисахаридно-белковый комплекс выделяли из супернатанта осаждением ацетоном. Полученный препарат использовали в качестве покрывающего лунки антигена при проведении ИФА.
Мышам линии Balb/c 5-кратно внутрибрюшинно вводили нарастающие дозы живой культуры штамма S. pneumoniae серотипа 14, начиная с 106 м.к. до 109 или 2х109 с десятикратным шагом с интервалом 14 дней. Сыворотку крови получали через 14 суток после последней иммунизации. Наряду с этим исследовали сыворотку мышей через 27 суток после однократного введения живой культуры S. pneumoniae серотипа 14.
Мышей линии Balb/c иммунизировали внутрибрюшинно двукратно разовой дозой 40 мкг/мышь гликоконъюгата 1 с интервалом 14 суток. Иммунизирующая доза по гексасахариду составила 8 мкг/мышь. Тотальный забор крови проводили под эфирным наркозом в соответствии с «Правилами работы с лабораторными животными» на 14 сутки после последней иммунизации.
Определение антигенной активности иммунных сывороток проводили методом твердофазного ИФА. Титр IgG к гексасахариду/капсульному полисахариду определяли в антимикробных сыворотках и сыворотках мышей, иммунизированных глико-конъюгатом 1. На плоскодонных 96-луночных планшетах (ВНИИ «Медполимер») сорбировали 0,2 мкг/лунка гликоконъюгата 1, в качестве контроля — 1,6 мкг/лунка БСА (в перерасчете на содержание БСА в гликоконъюгате 1), 1 мкг/лунка природного полисахаридно-белкового комплекса, растворенных в ФСБ («Sigma», США) в течение 2 ч при температуре 37°С, затем оставляли на ночь при температуре 4°С. После сорбции в лунки вносили по 100 мкл/лунка исследуемой сыворотки в двукратных разведениях, начиная с 1:100. Сыворотки разводили в ФСБ с 0,05% Tween 20 («Panreac Sintesis», Испания) и инкубировали в термостате в течение 1 ч при 37°С. После 3-кратного отмывания сыворотки с помощью ФСБ с Tween 20 в объеме 200 мкл/лунка вносили рабочее разведение конъюгата 2 в объеме 100 мкл. В качестве конъюгата 2 ис-
Строение использованного гликоконъюгата 1 на основе синтетического гексасахаридного лиганда и белка-носителя.
пользовали антитела диагностические против IgG (H+L) мыши, меченные пероксидазой, сухие (антивидовые) (ООО «Медгамал», НИИЭИ им. Н.Ф. Гамалеи). После 3-кратного отмывания сыворотки с помощью ФСБ с Tween 20 в объеме 200 мкл/лунка вносили проявляющий реагент — тетраметилбензидин (ООО НПО «БиоТест Системы») в объеме 100 мкл/лунка. Через 20 мин реакцию останавливали 1М раствором H2SO4 («Sigma», США). Оптическую плотность определяли на ИФА-ридере («iMark», Япония) при длине волны 450 нм. В качестве контроля использовали сыворотки интактных мышей.
Статистическую обработку данных проводили с использованием программ Microsoft Exel 2007 и Biostat.
РЕЗУЛ ЬТАТЫ
В предыдущих исследованиях разработана схема получения синтетического гек-сасахарида, отвечающего фрагменту цепи капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14 [1], в том числе включающего тетрасахаридное повторяющееся звено. Для повышения иммуногенной активности синтетического гексасахарида проведена его конъюгация с белком-носителем, в качестве которого выбран БСА. Содержание углеводных лигандов в гликоконъюгате 1 (рис.) (18 лигандов на одну молекулу БСА) определяли методом масс-спектрометрии MALDI-TOFF
Оценку антигенной активности гликоконъюгата 1 проводили методом ИФА (табл. 1). На твердой фазе сорбировали гликоконъюгат 1 в двукратных разведениях от 4 до 0,125 мкг/лунка и определяли титр специфических антител к гексасахариду, используя две антимикробные сыворотки, полученные при иммунизации мышей живой культурой S. pneumoniae серотипа 14. Установлено, что сыворотка 1 содержала меньшее количество IgG, распознающих гликоконъюгат 1, однако в этом случае выявлены оптимальные сорбирующие дозы, находящиеся в диапазоне от 0,125 до 1 мкг/лунка. В сыворотке 2 титр антител к конъюгату 1 составил 1:600 при отсутствии разницы
Таблица 1. Определение оптимальной сорбирующей дозы гликоконъюгата 1
Антимикробная сыворотка к S. pneumoniae серотипа 14 Титр IgG (разведение сыворотки) при ОП450 к гликоконъюгату 1 при его использовании в разных сорбирующих дозах (мкг/лунка):
0,125 0,25 0,5 1 2 4
1 300±100 300±100 300±100 300±100 200±0 200±0
2 600±200* 600±200* 600±200* 600±200* 600±200* 600±200*
Неиммунная (контроль) 100±0 100±0 75±35,4 100±35,4 75±35,4 100±35,4
Примечание. Антимикробные сыворотки получены на 14 сутки после 5-кратной иммунизации мышей нарастающими дозами живой культурой S. pneumoniae типа 14. Исследовали пул сывороток от 10 мышей в 4-кратных повторах. Разность между опытом и контролем — * р<0,05.
между сорбирующими дозами. Уровень антител в сыворотке 2 достоверно превышал титр антител у интактных (контроль) животных. В результате для дальнейших исследований при постановке ИФА выбрана сорбирующая доза 0,2 мкг/лунка.
Полученные данные свидетельствуют о том, что гликоконъюгат 1, включающий синтетические гексасахаридные лиганды, родственные капсульному полисахариду S. pneumoniae серотипа 14, специфически связывается с IgG к соответствующему оли-госахариду, присутствующими в антимикробной сыворотке. Однако антимикробная сыворотка мышей является поливалентной, то есть в ней после многократной иммунизации большими дозами живой культуры присутствуют антитела различной специфичности: к капсульному полисахариду S. pneumoniae серотипа 14, различным белкам пневмококка, С-полисахариду, липидам, нуклеиновым кислотам и другим клеточным антигенам, а также антитела другой специфичности, в том числе к БСА, что происходит вследствие поликлональной активации В-клеток [12].
Проведено исследование титра IgG к БСА в гипериммунной антимикробной сыворотке после 5-кратного и однократного введения живой культуры S. pneumoniae серотипа 14 при сорбции на твердой фазе гликоконъюгата 1 и БСА в концентрациях 0,2 и 1,6 мкг/лунка соответственно.
В сыворотке мышей после многократной иммунизации живой культурой выявлены IgG к гликоконъюгату 1 в титре 600±115,5 и к БСА в титре 150±28,8 (р<0,05). В сыворотке неиммунизированных мышей уровень IgG был ниже фонового значения (<100). После однократного введения живой культуры титр антител к гексасахариду в сыворотке мышей составил 1:200, тогда как антител к БСА не обнаружено (ОП45о=0,131). Полученные результаты показали, что у мышей, выживших после однократного введения живой культуры, образуются IgG к гликоконъюгату 1, хотя и в меньшей степени, чем после многократного введения. В этом исследовании также показано, что при введении конъюгата олигосахарида с белком-носителем к последнему образуются IgG. Разработанная экспериментальная тест-система пригодна для оценки уровня антител к S. pneumoniae, в данном случае к серотипу 14.
При исследовании иммуногенности гликоконъюгата 1 в сыворотке крови мышей, иммунизированных 2-кратно дозой 8 мкг по гексасахариду, определяли титр IgG через 14 суток после последней иммунизации (табл. 2). Использование тест-системы, где в качестве антигена, сорбированного на твердой фазе, был конъюгат 1, показало, что при иммунизации этим препаратом животных в высоком титре образуются антитела как к гексахариду, так и к БСА. При этом титр IgG как в том, так и в другом
случае составил 1:12 800. Это свидетельствовало о существенном вкладе БСА в антителообразование, и для оценки титров антител к конъюгату такая тест-система неинформативна. В сыворотке неиммунизированных мышей уровень IgG к гексасахариду и БСА был ниже фоновых значений (<100).
Так как разницы в титрах антител между конъюгатом 1 и БСА выявить не удалось, антитела к БСА абсорбировали при внесении в сыворотку БСА в различных концентрациях (от 25 до 2000 мкг/ лунка). Внесение в лунки БСА в концентрации 25 и 50 мкг/лунка оказалось недостаточным для выявления различий в титре антител, хотя в лунках, покрытых конъюгатом 1, он уменьшился до 800 — 1600, но оставался на уровне 1:12 800 в
Таблица 2.Пир IgG в сыворотке мышей, иммунизированных гаиококоньюгатом 1
Сыворотка мышей, иммунизированных глико-конъюгатом 1 Абсорбирующая концентрация БСА для нейтрализации сыворотки, мкг/лунка Титр IgG (разведение сыворотки) при сорбции на твердой фазе
Глико-конъюгат 1 БСА
Нативная 0 12800+0 12800+0
иммунная
После аб- 25 1600+0 12800+0
сорбции 50 800+0 12800+0
антител БСА 100 375+25 3200+0
400 375+25 6400+0
2000 375+25 200+0
Неиммунизи- 0 87,5+12,5 87,5+12,5
рованные (контроль)
Примечание. Абсорбцию антител к БСА проводили путем добавления в сыворотку различных концентраций БСА в объеме 10 мкл.
лунках, сорбированных БСА. Увеличение абсорбирующей концентрации БСА, прибавляемой к исследуемой сыворотке до 100 — 400 мкг/лунка, привело к дальнейшему, но недостаточному снижению титра антител к БСА до 3200 — 6400, хотя в лунках, на которых сорбировали конъюгат 1, титр антител снизился до 375+25. Дальнейшее увеличение дозы БСА, вносимого в сыворотку, позволило выявить различия. Титр антител к гексасахариду оставался на уровне (375+25), а к БСА снизился до 1:200.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что IgG к гексасахариду и БСА образуются параллельно.
Для подтверждения антигенной активности конъюгата 1 использовали альтернативный сорбирующий антиген, не содержащий БСА — природный полисахаридно-белковый комплекс S. pneumoniae типа 14, полученный из культуральной надосадоч-ной среды путем осаждения ацетоном. В этом случае титр антител после 2-кратной иммунизации мышей конъюгатом 1 составил 375+25 против 87,5+12,5 в контроле (р<0,05 — достоверность различий между опытом и контролем).
Это подтвердило данные об иммуногенности гликоконъюгата 1 в другой тест-системе. Титр антител к гексасахариду в 4,2 раза превышал уровень у интактных животных.
ОБСУЖДЕНИЕ
В настоящее время зарегистрирован ряд коммерческих гликоконъюгированных вакцин на основе природных капсульных полисахаридов S. pneumoniae. Эти вакцины предназначены для иммунизации детей младшей возрастной группы, для которых иммунизация полисахаридными вакцинами является неэффективной. В качестве белка-носителя в применяемых вакцинах используют рекомбинантные анатоксины (дифтерийный, столбнячный или их комбинацию D-протеином H. influenzae типа b).
Гликоконъюгированные вакцины иллюстрируют возможность создания Т-зависимого ответа на вакцинацию с индукцией иммунологической памяти. Одной из особенностей конъюгированных вакцин является использование схем, предусматривающих необходимость введения бустерной дозы вакцины [13, 15], так как в некоторых случаях количество антител после первичной иммунизации недостаточно и не может обеспечить защиту от заболевания [13].
Другой особенностью конъюгированных вакцин является ограниченное число белковых носителей, используемых в практике. Это предполагает увеличивающееся число введений конъюгированных вакцин, содержащих одни и те же молекулы носителя, а именно, столбнячный или дифтерийный анатоксины. При этом, во-первых, может возникнуть ситуация, когда происходит гипериммунизация анатоксинами и снижается иммунный ответ на полисахарид [7]. Во-вторых, остается неясным вопрос, как влияет иммунизация конъюгированными вакцинами на основе анатоксинов на иммунореактивность организма, подвергнутого ранее иммунизации адсорбированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной (АКДС). Будет ли при этом происходить активация В-клеток памяти на столбнячный и дифтерийный анатоксины и можно ли расценивать это как положительный факт? В-третьих, неизвестно, будет ли происходить при введении вакцин, конъюгированных с дифтерийным или столбнячным анатоксином, снижение эффекта вакцинации АКДС-вакциной за счет нейтрализации дифтерийных и столбнячных антител избыточным количеством антигена?
В проведенном исследовании установлена иммуногенная активность гликоконъюгата 1 на основе белка-носителя БСА и синтетического гексасахарида, отражающего фрагмент цепи капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 14. После двукратной иммунизации в сыворотке крови мышей появлялись антитела к гексасаха-ридному лиганду и к БСА. Известно, что интенсивность антителообразования к лиганду и белку-носителю зависит от структуры конъюгата [17]. В настоящем исследовании при сорбции на твердой фазе гликоконъюгата 1 выявлен меньший уровень
IgG к БСА по сравнению с использованием БСА в качестве «покрывающего» антигена. Вероятно, в составе конъюгата белок-носитель, в данном случае БСА, подвергся химической модификации и его активность снизилась за счет конформационных изменений антигенных детерминант молекулы, хотя и оставалась высокой. При использовании для сорбции на планшетах природного полисахаридно-белкового комплекса — то есть антигена, не содержащего БСА, выявлен истинный титр антител к гексасахариду, который в 4,2 превышал уровень у интактных мышей. Установлено, что БСА в составе конъюгата не влиял на выработку антител к гексахариду. Разработанная экспериментальная тест-система на основе гликоконъюгата 1 является пригодной для оценки уровня антител к пневмококку этого серотипа у зараженных, а возможно, и бактерионосителей.
ЛИТЕРАТУРА
1. Курбатова Е.А., Воробьев Д.С., Семенова И.Б. и др. Разработка подходов к созданию экспериментальной тест-системы для оценки антигенной активности синтетических олигоса-харидных лигандов, родственных фрагментам цепи капсульного полисахарида Streptoccoccus pneumoniae типа 14. Биохимия. 2013, 7: 1046-1052.
2. Нифантьев Н.Э., Бакиновский Л.В., Кочетков Н.К. Синтез капсулярного полисахарида S. pneumoniae, тип 14. Поликонденсация мономера и характеристика полисахарида. Биоорганическая химия. 1987, 13 (8): 1102-1108
3. Breukels M.A., Rijkers G.T., Voorhorst-Ogink M.M. et al. Pneumococcal conjugate vaccine primes for polysaccharide indusible IgG 2 antibody reponse in children with recurrent otitis media acuta. J. Infect Dis. 1999, 179: 1152-1156.
4. Fernandez-Santana V., Cardoso F., Rodriguez A. et al. Antigenicity and immunogenicity of a synthetic oligosaccharide-protein conjugate vaccine against Haemophilus influenzae type b. Infect. Immun. 2004, 72: 7115-7123.
5. Gening M.L., Maira-Litran T., Kropec A. et al. Synthetic ß(1^6)-linked N-acetylated and non-acetylated oligoglucosamines used to produce conjugate vaccines for bacterial pathogens. Infect. Immun. 2010, 78: 764-772.
6. Granoff D.M., MeHugh YE., Raff H.V. et al. MF59 adjuvant enhances antibody response of infant baboons immunized with Haemophilus influenzae type b and Neisseria meningitides group C oli-gosaccharide-CRM197 conjugate vaccine. Infect. Immun. 1997, 65: 1710-1715.
7. Insel R.A. Potential alterations in immunogenicity by combining or simultaneously administering vaccine components. Ann. NY Acad. Sci. 1995, 754: 35-47.
8. Jansen WT., Snippe H. Short-chain oligosaccharide protein conjugates as experimental pneumococcal vaccines. Indian. J. Med. Res. 2004, 119 (Suppl): 7-12.
9. Kochetkov N.K., Nifant'ev N.E., Backinowsky L.V Synthesis of the capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae type14. Tetrahedron. 1987, 43 (13) : 3109-3121.
10. Lanzavcchia A., Sallusto F. Regulation T cell immunity by dendritic cells. Cell. 2001, 106: 263266.
11. Lindberg B., Loongren J. Structural studies on the specific type 14 pneumococcal polysaccharide. Carbohydr. Res. 1977, 58: 177-186.
12. Mammen M., Choi S.-K., Whitesides G. M. Polyvalent interactions in biological systems: implications for design and use of multivalent ligands and inhibitors. Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37: 2754-2794.
13. McVernon J., Andrews N., Slack M.P. et al. Risk of vaccine failure after Haemophilus influenzae type b (Hib) combination vaccines with acellular pertussis. Lancet. 2003, 361: 1521-1523.
14. Primula R., Peeters P., Chrobok V. et al. Pneumococcal capsular polysaccharide conjugated to protein D for prevention of acute otitis media caused by both Sterptococcus pneumoniae and non-typeble Haemophilus influenzae: a randomized double-blind efficacy study. Lancet. 2006, 367: 740-748.
15. Ramsay M.E., McVernon J., Andrews N.J. et al. Estimating Haemophilus influenzae type b vaccine effectiveness in England and Wales by use of the screening method. J. Infect. Dis. 2003, 188: 481485.
16. Rennels M.B., Edwards K.M., Keyserling H.L. et al. Safety and immunogenicity of heptavalent
pneumococcal vaccine conjugated to CRM197 in United States infants. Pediatrics. 1998, 101: 604611.
17. Safari D., Dekker H.A.T., Joosten A.F. Identification of the smallest structure capable of evoking opsonophagocytic antibodies against S. pneumoniae type 14. Infection and Immunity. 2008, 76 (10): 4615-4623.
18. Verez-Bencomo V., Fernandez-Santana V., Hardy E. et al. A synthetic conjugate polysaccharide vaccine against Haemophilus influenzae type b. Science. 2004, 305: 522-525.
Поступила 12.02.13
Контактная информация: Курбатова Екатерина Алексеевна, д.м.н., проф.,
105064, Москва, М.Казенный пер., 5А, р.т. (495)917-57-74
© А.Л.БУРМИСТРОВА, Ю.Ю.ФИЛИППОВА, 2013 А.Л.Бурмистрова, Ю.Ю.Филиппова
РАСТВОРИМАЯ ФОРМА ТРИГГЕРНОГО РЕЦЕПТОРА, ЭКСПРЕССИРОВАННОГО НА МИЕЛОИДНЫХ КЛЕТКАХ 1 ТИПА, КАК МАРКЕР СМЕШАННОГО МИКРОБНОГО ИНФИЦИРОВАНИЯ ОЖОГОВЫХ РАН
Челябинский государственный университет
Цель. Выявление ранних небактериологических маркеров смешанного микробного инфицирования ожоговых ран. Материалы и методы. Исследован уровень растворимой формы триггерного рецептора, экспрессированного на миелоидных клетках 1 типа (soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1, sTREM-1) и цитокинов в сыворотке крови 60 ожоговых больных на 3 — 6 и 10 — 17 дни после ожога методом твердофазного ИФА. Результаты. На ранних сроках ожоговой болезни уровень sTREM-1 в сыворотке крови может являться небактериологическим маркером смешанного инфицирования ожоговых ран: на 3 — 6 сутки после травмы — выше 298,8 пг/мл, на 10 — 17 сутки после ожога — выше 294,2 пг/мл. Заключение. В качестве дополнительного лабораторного маркера смешанного микробного инфицирования ожоговых ран может быть предложен уровень sTREM-1 в сыворотке крови пациентов с тяжелой термической травмой.
Журн. микробиол., 2013, № 6, С. 63—68
Ключевые слова: ожоги, сепсис, цитокины, растворимая форма триггерного рецептора, экспрессированного на миелоидных клетках-1 типа (sTREM-1)
A.L.Burmistrova, Yu.Yu.Filippova
SOLUBLE FORM OF TRIGGER RECEPTOR EXPRESSED ON MYELOID CELLS-1 AS A MARKER OF BURN WOUND MIXED INFECTION
Chelyabinsk State University, Russia
Aim. Detection of early non-bacteriological markers ofburn wound mixed microbial infection. Materials and methods. The level of soluble form of trigger receptor expressed on myeloid cells-1 (sTREM-1) and cytokines in blood sera of 60 burn patients on days 3 — 6 and 10 — 17 after the burn was studied by solid phase enzyme immunoassay. Results. At the early periods ofburn disease the level of sTREM-1 in sera may be a non-bacteriological marker ofburn wound mixed infection: at days 3 — 6 after the injury — higher than 298.8 pg/ml, at days 10 — 17 after the burn — higher than 294.2 pg/ml. Conclusion. Level of sTREM-1 in blood sera of patients with severe thermic injury could be proposed as an additional laboratory marker ofburn wound mixed microbial infection.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2013, No. 6, P. 63—68
