CC BY
33
ISSN 2412-608Х. МАСЛИЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. Вып. 1 (173), 2018
УДК 633.854.78:632.444.2:632.953.1 DOI 10.25230/2412-608Х-2018-1-173-87-93
ЭЛЕМЕНТЫ ЛАБОРАТОРНОГО РЕГЛАМЕНТА ПРОИЗВОДСТВА МИКРОБИОПРЕПАРАТОВ В ПРЕПАРАТИВНОЙ ФОРМЕ «СМАЧИВАЮЩИЙСЯ ПОРОШОК» НА ОСНОВЕ БАКТЕРИЙ-АНТАГОНИСТОВ ИЗ РОДА PSEUDOMONAS ПРИ ПОВЕРХНОСТНОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ НА ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
Л.В. Маслиенко,
доктор биологических наук
А.Х. Воронкова,
младший научный сотрудник
ФГБНУ ВНИИМК
Россия, 350038, г. Краснодар, ул. им. Филатова, д. 17 Тел.: (861) 275-85-19 E-mail: [email protected]
Для цитирования: Маслиенко Л.В., Воронкова А.Х. Элементы лабораторного регламента производства микробиопрепаратов в препаративной форме «смачивающийся порошок» на основе бактерий-антагонистов из рода Pseudomonas при поверхностном культивировании на жидкой питательной среде // Масличные культуры. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. -2018. - Вып. 1 (173). - С. 87-93.
Ключевые слова: микробиопрепараты, штамм-
продуцент, Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens, препаративная форма, поверхностное культивирование, смачивающийся порошок.
Разработаны элементы лабораторного регламента производства микробиопрепаратов в препаративной форме «смачивающийся порошок» (СП) при поверхностном культивировании на жидкой питательной среде перспективного бактериального штамма-продуцента Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens из коллекции лаборатории биометода. Определён оптимальный срок поверхностного культивирования на жидкой питательной среде Кинга В - пять суток. Оптимальный объём посевной культуры по отношению к объёму питатель-
ной среды составил 2,0 %. Опытные образцы микробиопрепарата в препаративной форме СП, полученные при поверхностном культивировании штамма Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens на жидкой питательной среде, образовывали в воде стойкую суспензию, имели исходный титр 108-9 КОЕ/г и влажность 6,0-6,8 %. При хранении СП микробиопрепарата в пакетах с доступом воздуха и в банках с плотно закрытой крышкой, независимо от способа отделения биомассы, в условиях постоянной низкой температуры (-18 °С) титр в течение двенадцати месяцев не снизился. При переменной температуре в помещении лаборатории (+24...+26 °С), независимо от упаковки и способа отделения биомассы, титр за двенадцать месяцев хранения снизился на четыре порядка (105 КОЕ/г), а при постоянной высокой температуре (+30 °С) - на пять-шесть порядков (104-3 КОЕ/г). Для сохранения опытных образцов СП микробиопрепарата на основе бактерий из рода Pseudomonas в пакетах с доступом воздуха при температуре +24... +26 °С в течение двенадцати месяцев с незначительным снижением титра в пределах порядка необходимо добавление одного из стабилизаторов: тиомочевины, гидрохинона, аскорбиновой кислоты или гумата натрия.
UDC 633.854.78:632.444.2:632.953.1
Elements of the laboratory regimen for production of microbiopreparation in form of 'wettable powder' based on bacteria-antagonists of a genus Pseudomonas on surface cultivation on liquid nutrient medium. Maslienko L.V., doctor of biology Voronkova A.Kh., junior researcher
All-Russia Research Institute of Oil Crops 17, Filatova str., Krasnodar, Russia 350038 Те!.: (861) 275-85-19 E-mail: [email protected]
Key words: microbiopreparations, strain-producer, Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens, preparation form, surface cultivation, wettable powder.
There were developed the elements of the laboratory regimen for production of microbiopreparation in the form of 'wettable powder' on surface cultivation on liquid nutrient mediums of perspective bacteria strain-producer Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens from a collection of the laboratory of biomethods. Period of 5 days was determined as optimal for surface cultivation on a liquid nutrient medium of King B. Optimal ratio between volumes of culture and nutrient medium was 2.0%. Test samples of microbiopreparation in the form of 'wettable powder' obtained on surface cultivation of the strain Sgrc-1
Pseudomonas fluorescens on a liquid nutrient medium formed a stable suspension in water and had an initial titer 108-9 CFU/g and a moisture content of 6.06.8 %. When storing a 'wettable powder' microbiopreparation in packages with air access and in jars with a tightly closed lid, regardless of the method of biomass separation, under conditions of permanent low temperature (-18 °С), the titer have not decreased within twelve months. When storing under variable temperature in the laboratory room (+24...+26 °С), regardless of the packaging and method of biomass separation, during the twelve months of storage, the titer decreased by four orders of magnitude (105 CFU/g), and under permanent high temperature (+30 °С) - by five to six orders of magnitude (104-3 CFU/g). To preserve test samples of a 'wettable powder' microbiopreparation based on bacteria of a genus Pseudomonas in packages with air access, under a temperature of +24...+26 °С, during twelve months with an insignificant decrease of titer within the order of magnitude, it is necessary to add one of the antiaging agents: thiourea, hydroquinone, ascorbic acid or sodium humate.
Введение. Для нашей страны немаловажным является возможность импорто-замещения дорогостоящих, опасных химических пестицидов экологически безопасными микробиопрепаратами, которые зачастую не уступают, а даже превосходят по эффективности химические фунгициды. Это особенно актуально в условиях повышенного интереса к получению экологически-безопасного продовольствия, сохранению здоровья людей и снижению загрязнения среды и сельскохозяйственной продукции пестицидами. Одной из проблем получения промышленных форм микробиопрепаратов является вопрос сохранения жизнеспособности и активности штаммов-продуцентов в процессе хранения.
В лаборатории биометода ФГБНУ ВНИИМК многие годы ведутся исследования по разработке микробиологических средств защиты масличных и других сельскохозяйственных культур от болезней. Создана уникальная коллекция штаммов грибов и бактерий-продуцентов микробиопрепаратов - биофунгицидов. Разрабатываются технологии производст-
ва разных препаративных форм микробиопрепаратов и технологии их применения [1].
Ранее в лаборатории биометода были разработаны препаративные формы микробиопрепаратов: жидкая культура, паста и порошок на основе твёрдых носителей -питательных сред (семянки, лузга, отходы от очистки семян подсолнечника) и перлита. Но жидкие культуры и пасты, особенно на основе грибных штаммов-продуцентов выдерживали хранение не более 10 суток и 3-х месяцев соответственно, даже в холодильнике, а порошки плохо смачивались в воде и забивали отверстия распылителей [2]. В отличие от грибных, жидкие культуры на основе бактериальных штаммов-продуцентов, особенно из рода Bacillus, могут сохраняться без добавления стабилизаторов в течение 6-и месяцев, что позволяет хранить препараты в течение сезона [3]. Но такой срок хранения жидких культур лишает возможности производить микробиопрепараты в период межсезонья.
Распространённым способом подготовки микробной биомассы к хранению является высушивание [4]. Применяемые способы высушивания микробной массы на распылительной и лиофильной сушилке довольно дорогостоящие, и, несмотря на добавление ПАВ и протекторов, воздействие стрессовых факторов на микроорганизмы (резкие перепады низких и высоких температур) снижает их выживаемость. Так, при высушивании на лио-фильной сушке бактерий рода Pseudomonas выживаемость микроорганизмов составляет не более 16 % [5]. При конвекционной сушке биоматериал смешивается с наполнителями и протекторами и сушится током воздуха в более мягких условиях, при максимально возможной для микроорганизма температуре.
Поэтому в последние годы нами решается задача по увеличению срока хранения биопрепаратов без снижения титра в препаративной форме «смачивающийся порошок» (СП), при конвекционной суш-
ке током воздуха. Ранее нами проведены исследования по отработке элементов лабораторного регламента производства микробиопрепаратов в препаративной форме СП при поверхностном культивировании на жидких питательных средах перспективных грибных штаммов-продуцентов из рода Pénicillium и бактерий из рода Bacillus [6; 7].
В данной работе приведены результаты исследований по разработке элементов лабораторного регламента производства микробиопрепарата в препаративной форме СП при поверхностном культивировании перспективного бактериального штамма-продуцента из коллекции лаборатории биометода Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens на жидкой питательной среде.
Материалы и методы. Штамм-продуцент выращивали поверхностно на жидкой питательной среде Кинга В [8] в трёхлитровых стеклянных баллонах, закрытых марлевыми крышками с крафт бумагой и повернутых набок, с объёмом питательной среды 500 мл при оптимальной температуре 25 °С. Выращенную биомассу бактерии отделяли двумя способами: с предварительным охлаждением при температуре +2 °С, с последующим сливом надосадочной жидкости и центрифугированием на Centrifuge MPW-340, в течение 5 мин с оборотом двигателя 4000 об./мин. Затем к биомассе добавляли прилипатель, растекатель и наполнитель в определённом процентном соотношении. Всё перемешивали, распределяли тонким слоем на гладкой поверхности, высушивали под вытяжкой при температуре 2830 °С и размалывали на мельнице с охлаждением. Влажность образцов определяли стандартным методом высушивания до постоянной массы (ГОСТ 5180-2015) [9]. Для установления оптимальных сроков поверхностного культивирования штамм-продуцент выращивали в течение 5, 10, 15
и 20 суток. Для определения оптимального объёма посевной культуры к 500 мл питательной среды добавляли 2 и 4 % глубинной культуры антагониста, которую предварительно выращивали на жидкой среде, на качалке (195 об./мин) в течение 36 час. Сроки хранения опытных образцов в препаративной форме СП определяли в зависимости от упаковки, температуры и стабилизаторов. Опытные образцы хранили при постоянных (+30 и -18 °С) и переменной (+24...+26 °С) температурах в двух упаковках: пластмассовых банках, с плотно закрытой крышкой объёмом 100 мл и бумажных пакетах, с доступом воздуха, при этом обе упаковки заполняли СП на 30 % от объёма. Определяли сырую массу, порошка и титр. При хранении СП в бумажных пакетах в условиях переменной температуры (+24.+26 °С) испытывали стабилизаторы: резорцин (0,1 %), тио-мочевину (0,05 %), аскорбиновую кислоту (0,05 %), бензоат натрия (0,1 %), сульфат меди (0,05 %), гумат натрия (0,5 %), гидрохинон (0,1 %), уголь активированный (0,5 %) и двуокись титана (1,0 %). Через 3, 6, 9 и 12 месяцев хранения микробиопрепарата определяли титр микробиологическим способом [10].
Результаты и обсуждение. Лабораторные образцы микробиопрепарата в препаративной форме СП, полученные при поверхностном культивировании штамма Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens на жидкой питательной среде, образовывали в воде стойкую суспензию, исходный титр 108-9 КОЕ/г.
Установлен оптимальный срок поверхностного культивирования на жидкой питательной среде Кинга В и объём посевной суспензии бактериального штамма-продуцента Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens при отделении биомассы бактерии методами слива (табл. 1) и центрифугирования (табл. 2).
Влияние срока поверхностного культивирования на жидкой питателяной среде и объёма посевной суспензии бактериального штамма-продуцента микробиопрепарата Sgrc-l Рееи(1отопае fluorescens на массу смачивающегося порошка и титр опытаых образцов микробиопрепарата (при отделянии биомассы методом слива)
г. Краснодар, 13 НИИМК, 2017 г.
ВЕ1^ ри-ана ОЛъ-ем по-сьв-ной сус-шн- зии, % Срок культово вовкния, супки
5 10 15 02
мас са СП*, г аир, КОЕ/г1 масса СП*, г аиар, КОЕ/г масса СП*, г ара)]) КОЕ/г масса СП* г аиар, КОЕ/г
Ссс! 2,0 16,78 1,(5 х 10® 13,412 1,2 0 10® 1(5,(52 1,9 х 9 8® 1444 1,0 х 1(0
3,0 17,37 1,8 х 10» 16,177 1,5 х 10® 18,80 1,1 х 90® 1(5,51 1,13 х 1(0
Примечание: * СП - микробиопрепарат р препаративной форме «смачивающийсо порошок»
Таблица 2
Влияние срока поверхностного культивирования на жидкой питателяной среде бактериального штамма-продуцента микробиопрепарата Sgrc-l Рееи(1отопае Аиогоесепе на массу смачивающегося порошка и титр опытных образцов микробиопрепарата (при отделянии биомассы методом центрифугировании)
г. Краснодар, 13НИИМК, 2 0)17 г.
Объ- Срок ьпоьтивирования, сутки
ём 5 10 15 20
по-
сев- масса СП*, * масса СП*, г мас-сн СП*, г масса сп«,, г
риант ной сус-ПеН- зпг, % титр, КОЕ/г ртр, КОЕ/г титр, КОЕ/г титр, КОЕ/г
2,0 3,87 7,4 х 1038 2,35 5>,2 х 101 41,(551 3,9) >г 108 2,43 1,0 х 108
Примечание: * СП - мимробиопрепарат в препаративной форме «смачивающийся порошок»
Установлено, что при всех сроокх поверхностного культивированвя 8§гс-1 РяеисСотопоп Аиогегсет на жидкоо питательной среде при отделении биимасаа1 балтеаии методом слива получен СП с влажностью 6,8 %, с примернв одинаковой массой, с незначительным ппеьышеь нием этого показателя при еЛльшем объёме посевной суспензии. Так, при объёме посевной суспензии И,0 % с 55(30 мл
питательной среды поььуеьво 14,4216,78 г СП против 16,17-18,80 г при добавлении И, 0 % посевной йуапьвзии. Тигр СП не зависел ото сроков культивирования и объёма посевной суапьвзии шеамма-продуцента и Иыл одного порядка ао осех вариантах (1,1-1,8 г 109 КОЕ/г).
При отделении Ииомкааы бактетии методом центрифугирования полуеьв СП с влажностью (5,0 %, а макаимальная масса установлена через пять ауаок поверхностного культивирования на жидкой питательной среде. При оЛъёмь посевной суспензии 2 % вес смкеивающегосо порошка в этом варпанаь аоаахтил 3,87 г против 2,333; 2,64 и 2,49 а Х00 мл питательной среды при срокь выфащевания 10, 15 и 20 суток. Титр С(П при исех сроках культивирования штамма-иродуцента
о
был одного порядка (1,0-7,4 оЦ КОЕ/г).
Таким образом, при оЛоич апособах отделения бппматсы опаимальнынй срок поверхностного культивироисппн Лакте-риабьнмго шеамма 8§гс-1 о'sтрdрmmnas fluorаscens на жпдаог) арьиь Кингн В составил пятс с^^туотс, опаималоныш об>ъ><з^ посевной суспензии р 2,0 ГУ к еЛъёму питательной йреды. При итом маакх С^П рна-чительно больше при отделении биомассы методом сливав 114,42-18,80 г против 2),30?—85^8,07 4), при Лольь высоком, в
о
пределах порядка, титрь (1,8-7,4 х 10 г 1,1-0,8 х 109КОЕ/г). Больь вылсокае муга.с;с;;а СП в этомварпанте свяеана а Лольшим весом сырой бактериальной маакы и, соответственно, с; большим количеством наполнителя. выыаокий татр СП
объяснив б>ек)с^и(ны]бб споаоЛом оаделенпя бактерии от тультуральной йедкостп, что предотвращает гибель (5г1^гг^]о:га..Ш:.^]ы:;б клеток. Тогда как ери жёатком отдспониб биомассы бактекеии на цьнарпфугп происходит рибель части клеток паевдомонадыл.
Установоены сроки ^срж-^^^^51 оиытшнх образцов микроСпопрьпкрктк шк основн бактериальяого шиaммк-пеoиуцeнтй мтк-робиопрепарита -с Рзеиёотеиая
;Аиогспсет в п])^п!^1ба'^и^ной ф орме СП в зачиспмостх от) гepмeтиенрсаи упаковки и температуре! б^оения ^ггía.í5..Iт, 3, -4)).
Влияние температуры и упаковки на титр опытных образцов микробиопрепарата в препаративной форме «омачивающийся порошок» на основе бактериального штамма-продуцента Sgrc-l Ряеийотопая fluorescens в процессе хракения (отделение биомассы методом слика)
г. Краснодар, ВНИИМК, 2017 г.
Срок хнане-ния, месяцев Титр, КОЕ/г
+24...+26 °С +30 °С -18 °С
пакет банка пакет банка пакет банка
3 5,3 х 108 98 х 108 3,3 х 105 4,0 х 104 3,32 х 109 1,7 х 109
6 5,8 х 1О7 33 х 107 4,3 х 103 2,1 х 103 1,3 х 109 3,3 х 109
9 2,3 х 105 2,8 х 105 1,3 х 103 1,9 х 103 1,8 х 109 2,9 х 109
12 1,3 х 105 2,7 х 105 1,8 х 103 1,37 х 103 2, 3 х 109 2,7 х 109
Таблица 4
Влияние температуры и упаковки на титр опытных образцов микробиопрепарата в препаративной форме «омачивающийся порошок» на основе бактериального штамма-продуцента Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens в процессе хракения (отделение биомассы методом центрифугирования)
г. Краснодар, ВНИИМК, 2017 г.
(Срок хранения, месяцев Титр, КОЕ/г
+24...+26 °С +30 °С -18 °С
пакет банка пакет банка пакет бннка
3 2,0 х 108 3,3 х 108 1,3 х 106 1,3 1 106 (5,1 х 108 6,0 х 108
6 5,1 х 107 3,0 х 707 4,4 х 101 3,3 1 101 6,6 х 108 8,1 х 108
9 3,3 х 105 3! ,5 х 5 05 3,9 х 104 3,3 X 104 9,9 х 108 97,7 х 108
13 3,0 х 105 2,8 х 1 05 3,4 х 104 2,3 x 104 8,7 х 108 9,9 х 108
Установлено, что при обоих способах отделения биомассы при хранении! опытных образцов СП микробиопрепарата на основе штамма 8§гс-1 Ряеиёотопая Аиоге$сет в пакетах и банках при постоянной низкой температуре (--8 °С) в течение двенадцати месяцев титр сохранялся на пераоначальном уровне (8,7-9,9 х 108 - 2,4-2,7 109 КОЕ/г). При переммнной температура (-+24 - +26 °С) при обоих способах отделения биомассы через шесть месяцав титр снизился на два порядка как в банке, так и в пакете, а через двенадцать месяцав ещё на два порядка и составил 3 ,2-55,8 х 107- 1,55-3,0 х 105 КОЕ/г соответственно.
Особенно следует нтметить, атн при постоянной высокой температуре (+30 °С) исходный титр уже через три месяца снизился на четыре и три порядка при отделении биомассы методами слива и центрифугирования (3,3-4,0 х 105 и 1,21,4 х 106 КОЕ/г). Через двенадцать месяцев титр снизился до 103 КОЕ/г при способе отделения биомассы методом слива и до 104 КОЕ/г - методом центрифугирования.
Таким обр&зом, при хранении микробиопрепарата на основе штамма 8§гс-1 Ряеиёотопая fluorescens в препаративной форме СП в пакетах и банках в условиях постоянно низкой температуры (-18 °С), независимо от способа отделения биомассы, титр в течение двенадцати месяцев не снизился. При переменной температуре в помещении лаборатории (+24.. .+26 °С) за шесть месяцев хранения СП, при обоих способах отделения биомассы, титр снизился на два порядка как в банке, так и в пакете (10' КОЕ/г), а через двенадцать месяцев хранения - на четыре порядка (105 КОЕ/г). При постоянно высокой температуре (+30 °С) за двенадцать месяцев хранения титр СП снизился на пять-шесть порядков (103-4 КОЕ/г).
Определяли влияние стабилизаторов на сроки хранения опытных образцов микробиопрепарата на основе бактериального штамма-продуцента Б§гс-1 Р&еи-с!отопа8 fhюrescens в препаративной форме СП в бумажных пакетах при переменной температуре (табл. 5, 6).
В контроле без добавок титр микробиопрепарата на основе штамма 8§гс-1 Ряеиёотопая fllюrescens при хранении в бумажном пакете в условиях переменной температуры от +24 до +26 °С в течение двенадцати месяцев снизился с 109 до 105 КОЕ/г. При добавлении тиомочевины, гидрохинона, гумата натрия и аскорбиновой кислоты титр снизился в пределах порядка (1,1-2,6 х 108 КОЕ/г). В остальных ввааррииааннттаах титр снизился до 106-10' КОЕ/г, а в варианте с активированным углём - до уровня контроля (105 КОЕ/г).
Влияние стабилизаторов нн титр опытных образцов микробиопрепарат а на основе бактериального штамма-продуцента Sgrc-1 PseuUomonns fluorescens в препаративной форме СП при хранении в бумажньх пакетр в условиях переменной температуры (отделение биомассы методом слива)
г. Краснодар, ВНИИМК, 2017 г.
Титр, КОЕ/г, через, месяцев
3 6 9 12
Контроль 5,3 х 108 5,8 х 107 2,2 х 101 1,5 х 101
Резорцин, 0,1 % 4,9 х 107 5,5 х 107 5,5 х 106 2,2 х 106
Тиомочевина, 4,05 % 5,5 х 107 1,9 х 108 8,9 х 107 1,) х 108
Аскорбиновая кислота, 0,01 % 5,0 х 107 5,5 х 107 5,5 х 107 5,45 х 107
Бензоат натрия, 0, 1 % 2,4) х 107 3,1 х 106 2,2 х 106 2,2 х 106
Сульфат меди, 4,001 % 3,0 х 107 3,8 х 107 1,) х 106 1,) х 106
Гидрохиноеа 0, 1 % 6,3 х 108 6,0 х 108 5,7 х 108 2,2 х 108
Гумат натрия, 4,1 % 6,2 х 108 6,1 х 108 1,) х 108 2,2 х 108
Меласоа, 0,3 % 2,0 х 108 2,) х 108 4,6 >i 107 1,4) X 107
Двуокись титано, 1,0) % 1,3 х 107 2,8 х 106 2,2 х 106 1,1 х 106
Уголь акоивк-рованньш, 0,5 % 1,8 х 106 5,5 х 101 4,0 х 101 1,0 х 101
Таблица 6
Влияние стабилизаторов нн титр опытных образцов мииробиопрепарата нн основе бактериального штамма-продуцента Sgrc-1 PseuUomonns fluorescens в препаративной форме СП,при хранннии в бумажных пакетр в условиях переменной температуры (отделение биомассы методом центрифугирования)
г. Краснодар, ВНИИМК, 20)17 г.
ВОРКОИТ Тктр, КОЕ/г, через, мясяияв
3 6 9 12
Каштрать 2,0 х 808 1,1 1 707 3,3 1 101 3,0 1 101
Резардк и, 0 , 1 % 4,4 1 707 1,4 1 707 3 ,1 1 707 3 ,8 1 707
Ткамачевшю, 4,01 % 6,0 1 707 1 ,6 1 808 1 ,3 1 808 1,1 1 808
Аскарбкиавоя ккста-то, 0,05 % 2,2 1 808 1 ,6 1 808 1 ,1 1 808 1,4 1 808
Бянзаот иртркя, 0 , 1 % 1,7 1 707 4,2 1 606 1,4 1 606 1,4 1 606
Сульфот медк, 4,445 % 6,3 1 606 4,4 1 606 2,4 1 606 1,4 1 606
Гкдрахкиаи, 0 , 1 % 3,6 1 808 3 ,7 1 808 2,6 1 808 1,4 1 808
Гумот иагркя, 0,5 % 4,4 1 808 2,0 1 808 2,3 1 808 2,1 1 808
Матаасо, 0 ,1 % 1,1 1 707 1,9 1 707 0,9 1 707 8,4 1 606
Доуакксь тктоиа, 1,0 % 5,5 1 106 1,8 1 606 1,0 1 606 1,4 1 606
Угать октквкравои-иый, 0,5 % 3,8 1 707 1 ,1 1 606 1 ,3 1 101 2,4 1 101
Таким образом, установлено, что для сохранения опытных образцов СП микробиопрепарата на осневе бактериК изо рода Pseudomonas с незнечительным сниженном титра в пределах ппрядка в течение двенадцати месяцев необходимо добавлении одного из стабилизаторов: тиомочевины, гидрохинене, аскорбини-вой киклоты или гумата натрия.
Выводы. 1. Опытные образцы микробиопрепарата в препаративней форме СП, получению при ппверхнестном культивировании штамма Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens на жидкой питательной среде, образовывали в воде стойкую суспанзию, имели икходный титр) 108-9 КОЕ/г и влажность 6,0-6,8 %.
2. Оптимальный с рок п пверхнестного культикирования бактери-льнего штамма Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens не жидкой среде Кинга В составил пять суток, а объём ппсевней суспензик - 2,0 % к объёму питательней среды.
3. При хранении опытных образцов микробикпрепарата на основе штамма Sgrc-1 Pseudomonasfluorescens в препаративней форме СП при постоянной низкой темпаратуре (-181 °С) в течение двенадцо-ти месяцов титр), незавикимо от способа отделения бикмассы и упаковки, сохранялся не первонечальном уровне.
4. При паремениой температуре (++4... +26 °С), независимо от упаковки и способа отделения бикмассы, титр) опытных образцов (СП за двенадцоть месяцов хранения снизился на четыре порядка (101 КОЕ/г), а при постоянно высокой темпаратуре - не пять-шесть порядков (104-3 КОЕ/г).
5. Для сохранения опытных образцов СП микробиопрепарата на основе бактерий из рода Pseudomonas в пакетах с доступом воздуха при температуре +24...+26 °С в течение двенадцати месяцов с незнечительным снижением титра в пределах порядка необходимо добавление одного из стабилизаторов - тиомочевикы, гидрохинона, аскорбиновой кислоты или гумата натрия.
Исследования выполнены при финансовой поддержке РФФИ и администрации Краснодарского края, грант № 16-484-2320209)3.
Список литературы
1. Маслиенко Л.В. Обоснование и разработка микробиологического метода борьбы с болезнями подсолнечника: дис. ... докт. биол. наук: защищена 03.06.05, утв. 07.10.05. -Краснодар, 2005. - 377 с.
2. Маслиенко Л.В. Лаборатория биологических средств защиты растений (вчера, сегодня, завтра) // В кн.: История научных исследований во ВНИИМКе за 90 лет. -Краснодар, 2003.- С. 273-281.
3. Acamypoea A.M. Перспективные штаммы бактерий-продуценты микробиопрепаратов для снижения вредоносности фузариоза на подсолнечнике: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 06.01.11 / Анжела Михайловна Асатурова. - СПб, 2009. - 22 с.
4. Берестецкий А.О., Сокорноеа C.B. Получение и хранение биопестицидов на основе микромицетов // Микология и фитопатология. - 2009. - Т. 43. - Вып. 6 - С. 473-489.
5. Петриков К.В., Власова Е.П., Ветрова A.A. [и др.]. Получение сухой формы биопрепарата для очистки от нефтяных загрязнений и изучение его свойств при долговременном хранении // Известия Тульского государственного университета. Естественные науки. -2010. - Вып. 1. - С. 186-195.
6. Маслиенко Л.В., Воронкова А.Х. Элементы лабораторного регламента производства микробиопрепаратов на основе грибных штаммов-продуцентов в препаративной форме «смачивающийся порошок» // Масличные культуры: Науч.-тех. бюл. ВНИИМК. - 2016. -Вып. 4 (168). - С. 100-107.
7. Маслиенко Л.В., Воронкова А.Х. Элементы лабораторного регламента производства микробиопрепарата в препаративной форме «смачивающийся порошок» на основе бактерий-антагонистов из рода Bacillus // Масличные культуры: Науч.-тех. бюл. ВНИИМК. - Краснодар, 2017.- Вып. 3 (171) С. 93-96.
8. King E. O., Ward M. K., Raney D. E Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescin // J. Lab. Clin. Med. - 1954. -Vol. 44. - P. 301-307.
9. ГОСТ 5180-2015 Грунты. Методы лабораторного определения физических характеристик.
10. Нетрусов Ф.И., ЕгороваМ.А., Захарчук Л.М. Практикум по микробиологии. - М.: Издательский центр «Академия», 2005. - 608 с.
References
1. Maslienko L.V. Obosnovanie i razrabotka mikrobiologicheskogo metoda bor'by s bolezn-yami podsolnechnika: dis. ... dokt. biol. nauk: zashchishchena 03.06.05, utv. 07.10.05. - Krasnodar, 2005. - 377 s.
2. Maslienko L.V. Laboratoriya biologi-cheskikh sredstv zashchity rasteniy (vchera, se-godnya, zavtra) // V kn.: Istoriya nauchnykh issledovaniy vo VNIIMKe za 90 let. -Krasnodar, 2003. - S. 273-281.
3. Asaturova A.M. Perspektivnye shtammy bakteriy-produtsenty mikrobiopreparatov dlya snizheniya vredonosnosti fuzarioza na podsol-nechnike: avtoref. dis. ... kand. biol. nauk: 06.01.11 / Anzhela Mikhaylovna Asaturova. -SPb, 2009. - 22 s.
4. Berestetskiy A.O., Sokornova S.V. Polu-chenie i khranenie biopestitsidov na osnove mik-romitsetov // Mikologiya i fitopatologiya. -2009. - T. 43. - Vyp. 6 - S. 473-489.
5. Petrikov K.V., Vlasova E.P., Vetrova A.A. [i dr.]. Poluchenie sukhoy formy biopreparata dlya ochistki ot neftyanykh zagryazneniy i izuchenie ego svoystv pri dolgovremennom khranenii // Izvestiya Tul'skogo gosudarstven-nogo universiteta. Estestvennye nauki. - 2010. -Vyp. 1. - S. 186-195.
6. Maslienko L.V., Voronkova A.Kh. Ele-menty laboratornogo reglamenta proizvodstva mikrobiopreparatov na osnove gribnykh shtam-mov-produtsentov v preparativnoy forme «smachivayushchiysya poroshok» // Maslichnye kul'tury: Nauch.-tekh. byul. VNIIMK. - 2016. -Vyp. 4 (168). - S. 100-107.
7. Maslienko L.V., Voronkova A.Kh. Ele-menty laboratornogo reglamenta proizvodstva mikrobiopreparata v preparativnoy forme «smachivayushchiysya poroshok» na osnove bakteriy-antagonistov iz roda Bacillus // Maslichnye kul'tury: Nauch.-tekh. byul. VNIIMK. - Krasnodar, 2017.- Vyp. 3 (171) S. 93-96.
8. King E. O., Ward M. K., Raney D. E Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescin // J. Lab. Clin. Med. - 1954. -Vol. 44. - P. 301-307.
9. GOST 5180-2015 Grunty. Metody laboratornogo opredeleniya fizicheskikh kharakteristik.
10. Netrusov F.I., Egorova M.A., Zakharchuk L.M. Praktikum po mikrobiologii. - M.: Iz-datel'skiy tsentr «Akademiya», 2005. - 608 s.
