CC BY
29
ISSN 2412-608Х. МАСЛИЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. Вы1п. 3 (175), 2018
УДК 633.854.78:632.444.2:632.953.1 DOI 10.2523 0/2412-608Х-2018-3-175-110-116
ЭЛЕМЕНТЫ ЛАБОРАТОРНОГО РЕГЛАМЕНТА ПРОИЗВОДСТВА МИКРОБИОПРЕПАРАТОВ В ПРЕПАРАТИВНОЙ ФОРМЕ «СМАЧИВАЮЩИЙСЯ ПОРОШОК» НА ОСНОВЕ СМЕСИ ПЕРСПЕКТИВНЫХ ШТАММОВ-ПРОДУЦЕНТОВ ИЗ РОДОВ PENICILLIUM И BACILLUS
Л.В. Маслиенко,
доктор биологических наук
А.Х. Воронкова,
младший научный сотрудник
ФГБНУ ФНЦ ВНИИМК
Россия, 350038, г. Краснодар, ул. им. Филатова, д. 17 Тел.: (861) 275-85-19 E-mail: biometod@yandex.ru
Для цитирования: Маслиенко Л.В., Воронкова А.Х. Элементы лабораторного регламента производства микробиопрепаратов в препаративной форме «смачивающийся порошок» на основе смеси перспективных штаммов-продуцентов из родов Pénicillium и Bacillus // Масличные культуры. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. - 2018. - Вып. 3 (175). - С. 110-116.
Ключевые слова: микробиопрепараты, штаммы-продуценты Визр-24 Penicilliumvermiculatum б Б-12 Bacillus licheniformis, препаративная форма, смачивающийся порошок.
С целью расширения спектра действия микробиопрепаратов устанавливали возможность получения смесевых препаратов в препаративной форме «смачивающийся порошок» (СП) на основе перспективных бактериального (Б-12 Bacillus licheniformis) и грибного (Визр-24 Pénicillium ver-miculatum) штаммов-продуцентов. Определена совместимость штаммов-продуцентов смесевого микробиопрепарата на агаризированных и жидких питательных средах. На нейтральной агаризиро-ванной питательной среде (картофельно-сахароз-ном агаре) гриб и бактерия росли, не мешая друг другу, тогда как на специализированной для бак-
терии среде (Тайлона-3) бактерия занимала большую часть поверхности питательной среды и подавляла рост гриба-продуцента. Установлена нецелесообразность совместного поверхностного культивирования исследованных грибного и бактериального штаммов-продуцентов микробиопрепарата на жидких питательных средах, так как бактерия занимала всю поверхность питательной среды и подавляла рост колонии гриба, даже на специализированной для него среде Рудакова. Установлено, что для получения смесевого препарата необходимо СП на основе отдельных штаммов-продуцентов смешивать в соотношении 1 : 1. Определён оптимальныый срок поверхностного культивирования на жидких питательных средах обоих штаммов-продуцентов: для грибного - на жидкой среде Рудакова 15 суток, для бактериального, на жидкой среде Тайлона-3 10 суток. Определены оптимальные сроки хранения лабораторный образцов СП смесевого микробиопрепарата и на основе отдельных штаммов-продуцентов в зависимости от температурных условий. Установлена нецелесообразность хранения смесевого препарата при постоянно высокой температуре (+30 °С), так как титр грибного штамма-продуцента резко снижался - до 103 КОЕ/г.
UDC 633.854.78:632.444.2:632.953.1
Elements of laboratory regimen for production of microbiopreparations in a form "wettable powder" based on a mixture of promising strains-producers of Penicillium and Bacillus species. L.V. Maslienko, doctor of biology A.Kh. Voronkova, junior researcher
All-Russian research institute of oil crops by
Pustovoit V.S. (VNIIMK)
17, Filatova str., Krasnodar, 350038, Russia
Те1.: (861) 275-85-19
E-mail: biometod@yandex.ru
Key words: microbiopraparation, strains-producers Vizr-24 Pénicillium vermiculatum and Б-12 Bacillus licheniformis, preparation form, wet-table powder.
The purpose of the work; was to enlerge oction area of microbiopreparation. Wc considered a possibility to obtain mix preparation in a form "wettable powder" based on pro mising fungus (Vizr-24 Peninil-lium vermiculatum) and bacterium (B-12 Bacillus lichenifoimis) strains-producers. We determined fompatibility ob strains-producers from mixed micro-f iopreparation on agar and liquid nutrienr mediums. A fungus and bacterium grown up aup developed togethor on a neutral potato-saccharose agae, but on a opedRc medium for bacterium (Tailon-3) bacterium occupied the most part of medium surface and
depressed a fungus-producer growth. We stated unvi-ability of joined surface cultivation of studied strain-producers on liquid nutrient mediums, as the bacterium occupied a whole surface of nutrient medium and depressed a growth of fungus colony, even when growing on a specific for this fungus Rudakov's medium. We ascertained it is necessary to mix wettable powders based on a separate strains-producers in a rate 1 : 1. We determined optimal period for surface cultivation on liquid nutrient mediums for both strains-producers: for fungus strain - liquid Rudakov's medium, 15 days, for bacterium one - liquid Tailon's medium, 10 days. Also we worked out the optimal stonage periods depending on temperature conditions for laboratory samples of wettable powder of mixed microbiopreparation and preparation based on the separate strains-producers. Storage of mixed preparation at permanent high temperature (+30 °C) is unreasonable as titer of fungus strain-producer is hard decreased - up to 103 CFU per gram.
Введение. В лаборатории биометода ФГБНУ ФНЦ ВНИИМК многие годы ведутся исследования по разработке микробиологических средств защиты масличных и других сельскохозяйственных культур от болезней. Создана уникальная коллекция штаммов грибов и бактерий продуцентов микробиопрепаратов - биофунгицидов. Разрабатываются технологии производства и применения разных препаративных форм микробиопрепаратов [1]. Разработаны препаративные формы микробиопрепаратов «жидкая культура», «паста» и «порошок» на основе твёрдых носителей - питательных сред (семянки, лузга, отходы от очистки семян подсолнечника) и перлита [2]. В последние годы нами решается задача по увеличению срока хранения микробиопрепаратов без снижения титра, с минимальной нормой расхода, образующих в воде однородные суспензии. Разрабатывается препаративная форма «смачивающийся порошок» (СП) при поверхностном культивировании отдельных штаммов-продуцентов на жидких питательных средах.
Ранее нами проведены исследования по отработке элементов лабораторного регламента производства микробиопрепаратов в препаративной форме СП при поверхностном культивировании на жидких питательных средах перспективных грибных штаммов-продуцентов из рода Pénicillium [3], бактерий из рода Bacillus [4] и Pseudomonas [5].
С целью расширения спектра действия микробиопрепаратов устанавливали возможность получения смесевых препаратов в препаративной форме СП на основе нескольких штаммов-продуцентов. В данной работе приведены результаты исследований по разработке элементов лабораторного регламента производства и хранения лабораторных образцов смесе-вого микробиопрепарата в препаративной форме СП на основе перспективных бактериального (Б-12 Bacillus licheniformis) и грибного (Визр-24 Pénicillium vermicu-latum) штаммов-продуцентов.
Материалы и методы. Определение совместимости штаммов-продуцентов микробиопрепарата Визр-24 Pénicillium vermiculatum и Б-12 Bacillus licheniformis проводили методом двойных (встречных) культур на агаризированных средах -картофельно-сахарозном агаре (КСА) и Тайлона-3 [6]. В чашки Петри (ЧП) высевали агаровые блоки с мицелием гриба и бактериальной плёнкой на расстоянии 6 см друг от друга. Культуры инкубировали в течение 15 дней при температуре +25,0 °С. Контрольные варианты - чистые культуры гриба и бактерии, посеянные отдельно. Учеты проводили ежедневно. Отмечался характер взаимоотношений гриба и бактерии: наличие или отсутствие зон, их размер, изменение цвета, плотности, толщины и направления роста мицелия гриба и бактериальной плёнки бактерии.
Штаммы-продуценты Визр-24 Penicillium vermiculatum и Б-12 Bacillus licheniformis выращивали поверхностным
способом на жидких питательных средах (Рудакова [7] и Тайлона-3 соответственно) отдельно и совместно на каждой среде, при оптимальны>1х температурах (27 и 30 оС соответственно) в трёхлитровыых стеклянный баллонах, с объёмом питательной! среды>1 500 мл. Выросшую биомассу, как отдельно каждого штамма-продуцента, так и при совместном вылра-щивании, отделяли сливом культураль-ной жидкости. Затем к биомассе добавляли прилипатель, растекатель и наполнитель. Всё перемешивали, распределяли тонким слоем на гладкой поверхности, выюушивали под вытяжкой при температуре 25-28 °С до влажности 6-7 % и размалывали на мельнице с охлаждением. Влажность образцов определяли стандартны™ методом, выгсушиванием до постоянной массы1 (ГОСТ 5180-2015) [8]. Второй вариант получения смесевого препарата заключался в смешивании (СП, полученныгс из отдельно выфащеннык штаммов-продуцентов, в соотношении 1:1.
Для установления оптимальны.« сроков поверхностного культивирования на жидкой питательной среде грибной и бактериальный штаммыл-продуценты выращивали в течение 10 и 15 суток, с предварительным добавлением 2 % глубинной культуры! продуцентов к объёму питательной среды1. Определяли вес порошка и титр.
Сроки хранения лабораторный образцов в препаративной (форме (СП определяли в зависимости от температуры>1. Лабораторныге образцы^ хранили в пакетах из крафт бумаги с доступом воздуха, при постоянный (+30 и -18 0С) и переменной (+24...+26 оС) температурах. Через 3, 6, 9 и 12 месяцев хранения микробиопрепарата определяли титр микробиологическим способом [9]. Титр) гриба-продуцента определяли на среде КСА, бактерии - на среде Тайлона-3. Определение числа ко-лониеобразующих единиц этим методом включало три этапа: приготовление разведений, посев на питательную среду в ЧП и подсчет выросших колоний. Затем 1,0 г исследуемого порошка переносили в
колбу с 99,0 мл стерильной воды>1 и встряхивали на качалке 20 минут. Для приготовления разведений стерильную водопроводную воду разливали по 9,0 мл в стерильные сухие пробирки. Затем отбирали 1,0 мл суспензии и переносили в пробирку с 9,0 мл стерильной воды.1. Полученное разведение тщательно перемешивали, несколько раз вбирая в дозатор и вышуская из него полученную суспензию клеток. Таким же образом готовили все последующие разведения. Высев исследуемой суспензии осуществляли поверхностны™ (для гриба) и глубинным (для бактерии) способом. При поверхностном способе по 0,1 мл из соответствующего разведения переносили в три стерильныле "ЧП на агаризированную питательную среду (КСА) и тщательно растирали шпателем. При глубинном способе п о 1, 0 мл из соответствующего разведения переносили в три стерильныге ЧП. Затем заливали в чашки по 15,0-20,0 мл средыы, расплавленной! и остуженной до +41,0.. .+10,0 °С, и смешивали питательную среду с посевным материалом легкими вращательныши движениями, после чего чашки оставляли на горизонтальной поверхности до заставания среды. Колонии антагонистов подсчитывали через 5в суток инкубации. Количество колоние-образующих единиц в 1,0 г исследуемого порошка вы>1числяли по формуле:
T
ах 1 0 n V
где Т - количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1,0 г;
a - сред нее число колоний выросших после посева из данного разведения;
V - объем суспензии взятый для посева;
10>П - коэффициент разведения.
Результаты и обсуждение. Определена совместимость штаммов-продуцентов микробиопрепарата Визр-24 Penicillium vermiculatum и Б-12 Bacillus licheniformis методом двойныых (встречныых) культур на
агаризированных средах. Установлено, что на нейтральной питательной среде КСА гриб и бактерия росли, не мешая друг другу. Тогда как на специализированной для бактерии среде Тайлона-3 бактерия занимала большую часть поверхности питательной среды>1 и подавляла рост гриба-продуцента (рис. 1).
Рисунок 1 - Совместное культивирование грибного Визр-24 РетсШтт vermiculatum и бактериального Б-12 ВасШш и^аепфгт^^ штаммов-продуцентов микробиопр2парата на агаризированныых питательныых средах: а - Тайлона-3; б - КСА (ориг.)
При раздельном поверхностном культивировании на жидкихпитательных средах (Рудакова и Тайлона-3) каждый штамм образовывал сплошную толстую мицелиальную и бактериальную плёнки. Лабораторные образцы микробиопрепаратов в препаративной форме СП, полученные при поверхностном культивировании кажсдого штамма на жидкой питательной среде, образовывали в воде стойкую суспензию, исходный титр препаратов на основе гриба составил Ю10 КОЕ/г, а на
12
основе бактерии - 10 КОЕ/г. Влажность лабораторных образцов СП микробиопрепаратов составляла <5,0-7,1 %.
Установлен оптимальный срок поверхностного культивирования на жидких питательных средах отдельно для грибного и бактериального штаммов-продуцентов (табл. 1).
При поверхностном культивировании Визр-2 4 РетсИНит на жид-
кой питательной среде Рудакква максимальная масса СП получена через 15 суток.
Титр СП не зависел от сроков культиви-Сования грибного штaммa-птoдyц/ниa и был одного порядка в обоих вapызноax ныращивания (^8-6,1 х 109 КОЕ/г).
Таблица 3
Влияние срока поверхностного культивирования на жидких питательных средах грибного Визр-24 РетсИИит уегтжиЫит и бактериального Б-12 ВасШт licheniformis штаммов-продуцентов на массу смачивающегося порошка и титр лабораторных образцов микробиопрепаратов
г. Краснодар, ВНПИМК, 2038 г.
Вариант Объём посевной сузпен-зии, % Срок культиви) эования, сутки
10 у5
Масса СП, г Титр), КОЕ/г Масса СП, г Титр), КОЕ/г
Визр-Л4 л,о 8,1 6,1 х 309 31,3 5,8 х309
Б-1Л 2,0 з,а т,3 х1032 з,а Л,9 х 3032
Оптимальный срок поверхностного культивирования бактериальнсго штамма-продуцента Б-32 Bacillоs составил 30 суток, так как с увеличением срока культивирования масса СП не увеличивалась, а титр был одного порядка в обоих вариантах вымащивания (2,9-3,7 х 3032 КОЕ/г).
Таким образом, оптимальный срок поверхностного культивирования грибного штамма Визр-24 ТепшШот vlrmicоlotоm на жидкой среде Рудакова составил 15 суток. Для бактериального штамма Б-12 Bocillоs lichl2iformis оптимальный срок поверхностного культивирования на жидкой среде Тайлона-3 составил 10 суток.
При совместном поверхностном культивировании на обеих жидких питатель-ныых средах бактерия занимала всю поверхность питательной среды, образовывала толстую бактериальную плёнку и подавляла рост колонии гриба, даже на специализированной для гриба среде Рудакова (рис. 2).
Изготовленнью лабораторныле образцы микробиопрепарата в препаративной форме СП, полученные при совместном поверхностном культивировании грибного и бактериального штаммов на обезх
жидких питательных средах образовывали в воде стойкую суспензию, но имели исходный титр препарата только на основе бактерии 1010 КОЕ/г, который был на два порядка меньше, чем в лабораторном образце (СП, полученном на основе отдельного бактериального штамма.
Рисунок 2 — Совместное поверхностное культивирование грибного Визр-24 РетсШтт уегт1сиШит и бактериального Б-12 ВасШш 11сИет/огт18 штаммов-продуцентов микробиопрепарата на жидких питательных средах: а - Тайлона-3; б - Рудакова (ориг.)
Таким образом, установлена нецелесообразность совместного поверхностного культивирования исследованных грибного и бактериального штаммов-продуцентов микробиопрепарата на жидких питательных средах.
Определяли сроки хранения лабораторных образцов микробиопрепаратов, полученных из отдельно выращ енных штаммов-продуцентов в условиях переменной температуры (+24...+26 °С) в бумажных пакетах с доступом воздуха (табл. 2), а также смесевого препарата, полученного при смешивании (СП на основе отдельных штаммов в соотношении 1 : 1, в зависимости от температуры (табл. 3).
Установлено, что при хранении лабораторных образцов (СП микробиопрепаратов, полученных из отдельно выращенных штаммов-продуцентов, в условиях переменной температуры +24...+26 °С, титр бактериального препарата через 122 месяцев сохранился на исходном уровне,
тогда как у грибного - снизился на поря-
12
док, но сохранялся высоким (1,5 х 10 и 2,55 х 109 КОЕ/гсоответственно).
Таблица 2
Влияние сроков хранения лабораторных образцов микробиопрепаратов в препаративной форме «смачивающийся порошок» на основе отдельно выгращенныгх грибного Визр-24 РетеШшт уегткиШит и бккте-рльльного Б-12 ВасШш licheniformis шмам-мов-продуцентов иа титр
г. Краснодар, ВНИИМК, 2018 г.
Вариант Титр, КООЕ/г, через, месяцев
0 и 6 9 02
Визр-24 2,8 х 1О10 1,5 х 0 0й 8,5 х 0 О9 6,8 х 009 2,5 х 109
Б-12 3,7 х 1012 6,5 х 1012 4,33 х 0 О02 2,8 х 0002 0,1 хх 10°!
Таблица 3
Влияние температуры на титр лабораторного образца анесевого микробиопрепарата в препаративной форме; ««смачивающийся порошок» на основе смеси грибного Визр-24 РешсНИит уегтжиЫит и бактеррального Б-12ВасШи$ 1^1иеп1^1}гтЛ!и штаммов-продуцентов в процессе хранения
г. Краснодар, ВНИИМК, 2018 г.
Срок хранения, месяц Штамм Титр, КОЕ/г
Притемпературе, °С
+44...+2(5 °С +30 °С -18 "С
3 Визр-24 1,5 х 1010 41,3 х 109 4, б х 10°°
Б-П 6,5 х 10 10 6,8 х 1012 7, х х ю12
6 Визр-24 8,5 х 109 8,6 х 105 4,х 0 Ю"1
Б-П 4,3 х 10 12 3,(5 х 10 12 6,х 0 Ю"2
9 Визр-24 6,8 х 109 4,3 х 104 5 , х х 10311
Б-2 2 2,8 х 10 12 1,3 х 10 12 7,0 х Ю"2
12 Визр-24 2,5 х 109 23 х 103 3,х 0 10311
Б-! 2 1,5 х 10 12 0, х х 10 12 4,х 0 10з2
Примечание: исходный титр СП смесевого микробиопрепарата: Визр-24- 3,5 х КО^Е^/^г; Б-12 -"7,1 х 1012 КОЕ/г
1 0 4
При хранении лабораторных образцов смесевого микробиопрепарата при переменной температуре (+24.. .+26 °С), также как и для СП на основе отдельных штаммов-продуцентов, титр бактериального штамма-продуцента сохранялся через
двенадцать месяцев на исходном уровне 12
(1,5 х 1012 КОЕ/г), а у грибного - снизился на порядок (2,5 х 109 КОЕ/г).
При постоянной высокой температуре (+30 °С) титр лабораторных образцов СП смесевого микробиопрепарата через двенадцать месяцев для бактериального штамма сохранился на первоначальном уровне, а для грибного - снизился до 10 КОЕ/г, поэтому хранить смесевой препарат в этих условиях нецелесообразно.
При хранении лабораторных образцов СП смесевого микробиопрепарата при постоянной низкой температуре (-18 °С) через двенадцать месяцев титр сохранялся на первоначальном уровне как у грибного, так и у бактериального штаммов-продуцентов (3.8 х 1010 КОЕ/г и 4,8 х 1012 КОЕ/г соответственно).
Выводы. 1. Определена совместимость штаммов-продуцентов смесевого микробиопрепарата на агаризированных питательных средах. На нейтральной питательной среде (КСА) гриб и бактерия росли, не мешая друг другу, тогда как на специализированной для бактерии среде (Тайлона-3) бактерия занимала большую часть поверхности питательной среды и подавляла рост гриба-продуцента.
2. Оптимальный срок поверхностного культивирования грибного штамма Визр-24 Penicillium vermiculatum на жидкой среде Рудакова составил 15 суток, а для бактериального штамма Б-12 Bacillus licheniformis-3 на жидкой среде Тайлона-3 -10 суток.
3. Установлена нецелесообразность совместного поверхностного культивирования исследованных грибного и бактериального штаммов-продуцентов микробиопрепарата, так как на обеих
жидких питательных средах бактерия занимала всю поверхность питательной средыл и подавляла рост колонии гриба, даже на специализированной для гриба среде Рудакова.
4. При переменной температуре (+24...+26 °С) через двенадцать месяцев хранения лабораторных образцов СП смесевого микробиопрепарата также, как и на основе отдельных штаммов-продуцентов,
титр бактериального штамма сохранялся на
12
исходном уровне (1,5 х 1012 КОЕ/г), а у грибного - снизился на порядок, но оставался высоким (2,5 х 109 КОЕ/г)
5. При постоянно вылсокой температуре (+30 °С) хранение смесевого препарата не целесообразно, так как титр грибного штамма-продуцента резко снижался - до 103 КОЕ/г.
6. При постоянной низкой температуре (-18 °С) через двенадцать месяцев хранения лабораторныых образцов СП смесевого микробиопрепарата титр сохранялся на первоначальном уровне как у грибного, так и у бактериального штаммов-продуцентов.
Список литературы
1. Маслиенко Л.В. Обоснование и разработка микробиологического метода борьбы>1 с болезнями подсолнечника: дис. ... д-р. биол. наук: защищена 03.06.05; утв. 07.10.05. - Краснодар, 2005. -377 с.
2. Маслиенко Л.В. Лаборатория биологических средств защиты растений (вчера, сегодня, завтра) // История научных исследований во ВНИИМКе за 90 лет. -Краснодар, 2003. - С. 273-281.
3. Маслиенко Л.В., Воронкова А.Х. Элемента лабораторного регламента производства микробиопрепаратов на основе грибнылх штаммов-продуцентов в препаративной форме «смачивающийся порошок» // Масличные культуры. Науч-тех. бюл. ВНИИМК. - 2016. - Выш. 4 (168). - С. 100-107.
4. Маслиенко Л.В., Воронкова А.Х. Элементы лабораторного регламента производства микробиопрепарата в препаративной форме «смачивающийся порошок» на основе бактерий-антагонистов из рода Bacillus // Масличные культуры: Науч.-тех. бюл. ВНИИМК. - 2017.-Вып. 3 (171). - С. 93-96.
5. Маслиенко Л.В., Воронкова А.Х. Элементы лабораторного регламента производства микробиопрепарата в препаративной форме «смачивающийся порошок» на основе перспективного бактериального штамма-продуцента Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens при поверхностном культивировании на жидкой питательной среде // Масличные культуры: Науч.-тех. бюл. ВНИИМК. - 2018. -Вып. 1 (173). - С. 87-93.
6. Егоров Н.С. Выделение микробов-антагонистов и биологические методы учета их антибиотической активности. -М.: Изд-во МоскЛВского ун-та, 1957. -78 с.
7. Рудаков О.Л. Микофильные грибы, их биология и практическое значение. -М.: Наука, 1981. - 160 с.
8. ГОСТ 5180-2015 Грунты. Методы лабораторного определения физических характеристик. - М.: Изд-во ФГУП «Стандартинформ», 2016. - 23 с.
9. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. - М.: Наука, 2004. - 525 с.
References
1. Masliyenko L.V. Obosnovaniye i razrabotka mikrobiologicheskogo metoda bor'by s boleznyami podsolnechnika: dis. ... d-r. biol. nauk: zashchishchena 03.06.05; utv. 07.10.05. - Krasnodar, 2005. - 377 s.
2. Masliyenko L.V. Laboratoriya biologicheskikh sredstv zashchity rasteniy (vchera, segodnya, zavtra) // Istoriya nauchnykh issledovaniy vo VNIIMKe za 90 let. - Krasnodar, 2003. - S. 273-281.
3. Masliyenko L.V., Voronkova A.KH. Elementy laboratornogo reglamenta proizvodstva mikrobiopreparatov na osnove gribnykh shtammov-produtsentov v preparativnoy forme «smachivayushchiysya poroshok» // Maslichnyye kul'tury. Nauch.-tekh. byul. VNIIMK. - 2016. - Vyp. 4 (168). -S. 100-107.
4. Masliyenko L.V., Voronkova A.KH. Elementy laboratornogo reglamenta proizvodstva mikrobiopreparata v preparativnoy forme «smachivayushchiysya poroshok» na osnove bakteriy-antagonistov iz roda Bacillus // Maslichnyye kul'tury: Nauch.-tekh. byul. VNIIMK. - 2017. - Vyp. 3 (171). - S. 93-96.
5. Masliyenko L.V., Voronkova A.KH. Elementy laboratornogo reglamenta proizvodstva mikrobiopreparata v preparativnoy forme smachivayushchiysya poroshok na osnove perspektivnogo bakterial'nogo shtamma-produtsenta Sgrc-1 Pseudomonas fluorescens pri poverkhnostnom kul'tivirovanii na zhidkoy pitatel'noy srede // Maslichnyye kul'tury: Nauch.-tekh. byul. VNIIMK. - 2018. - Vyp. 1 (173). - S. 87-93.
6. Egorov N.S. Vydeleniye mikrobov-antagonistov i biologicheskiye metody ucheta ikh antibioticheskoy aktivnosti. - M.: Izd-vo MoskLVskogo un-ta, 1957. - 78 s.
7. Rudakov O.L. Mikofil'nyye griby, ikh biologiya i prakticheskoye znacheniye.- M.: Nauka, 1981. - 160 s.
8. GOST 5180-2015 Grunty. Metody laboratornogo opredeleniya fizicheskikh kharakteristik. - M.: Izd-vo: FGUP «Standartinform», 2016. - 23 s.
9. Egorov N.S. Osnovy ucheniya ob antibiotikakh. - M.: Nauka, 2004. - 525 s.
Получено: 07.09.2018 Принято: 17.09.2018 Received: 07.09.2018 Accepted: 17.09.2018
