CC BY
21
dioaktivnogo zagryazneniya / T.G. Kalita, V.N. Minchenko, A.I. Artyuhov, T.I. Vas'kina //Zootekhniya. 2016. № 5. S. 18-19.
6. Kochish I.I., Sidorenko L.I., SHCHerbatov V.I. Biologiya sel'skohozyaystvennoy ptitsy. M. : Koloss, 2005. 203 s.
7. Lakin G.F. Biometriya. M. : Vysshaya shkola, 1990. 352 s.
8. Malyshev M.A. Nekroz golovki bedrennoy kosti u broylerov [Elektronnyy resurs]. - Rezhim dostu-pa: http://docplayer.ru/37189460-Nekroz-golovki-bedrennoy-kosti-u-broylerov.html.
9. Minchenko V.N., Adel'geym E.E. Morfologiya i himicheskiy sostav grudnyh myshts tsyplyat-broylerovpri vvedenii v ratsion BAV//Prodovol'stvennaya bezopasnost': otzavisimosti k samostoyatel'nosti: materialy Mezhdunarodnoy nauchno-prakticheskoy konferentsii, 12-13 dekabrya 2017 g. Smolensk, 2017. S. 238-243.
10. Smektitnyy trepel dlya umen'sheniya soderzhaniya mikotoksinov v kormah / V.E. Podol'nikov, L.N. Gamko, YU.V. Krivchenkova, K.A. Poprygo, D.A. Pilyugaytsev // Zootekhniya. 2017. № 11. S. 11-13.
11. Slesarenko N.A. Strukturnye korrelyanty funktsional'nyh narusheniy kostnogo gomeostaza u sobak //Aktual'nye problemy diagnostiki, terapii i profilaktiki bolezney domashnih zhivotnyh: materialy Mezhdunarodnoy nauchno-prakticheskoy konferentsii, 21-22 sentyabrya 2006 g. Voronezh, 2006. S. 270-272.
12. Tayguzin R.SH., CHekurov I.V., Aznabaev I.R. Mikrostruktura pecheni tsyplyat-broylerov krossa cobb-500 pri ispol'zovanii v ratsionah gomogenata trutnevyh lichinok // Intensivnost' i konkurentosposob-nost' otrasley zhivotnovodstva: materialy natsional'-noy nauchno-prakticheskoy konferentsii, posvyashchen-noy 85-letiyu so dnya rozhdeniya Zasluzhennogo rabotnika vysshey shkoly RF, Pochetnogo rabotnika vysshego professional'nogo obrazovaniya RF, Pochetnogo grazhdanina Bryanskoy oblasti, Pochetnogo professora universiteta, doktora biologicheskih nauk, professora E.P. Vashchekina, 25 yanvarya 2018 g. / redkol.: I.V. Malyavko i dr. Bryansk: Izd-vo Bryanskiy GAU, 2018. S. 192-196.
13. Nauchnoe obosnovanie primenenie sorbenta «Kovelos - Sorb» i energeticheskoy kormovoy do-bavki «Kovelos - Energiya» v ratsionah sel'skohozyaystvennyh zhivotnyh: monografiya /N.A. Yurina, Z.V. Pskhatsieva, E.A. Maksim, N.N. Esaulenko, V.V. Erohin. M.: Krasnodar, 2014. 167s
УДК 636.22/.28:612.664
ДИНАМИКА ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МОЛОЗИВА И МОЛОКА КОРОВ
Dynamics of Proteolytic Activity of Cow's Colostrum and Milk
Поляков В.Ф., д.биол.н., профессор Ипатова О.М., канд. биол.н.
Усачев И.И., д.вет.н., профессор кафедры Polyakov V.F., Ipatova O.M., Usachov I.I.
ГНУ ВИЭВ им. Я Р. Коваленко 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, к.1.
All-Russian Research Institute of experimental veterinary science of Ya.R. Kovalenko
ФГБОУ ВО Брянский ГАУ 243365, Брянская обл., Выгоничский р-н, с. Кокино, ул.Советская, 2а Bryansk State Agrarian University
Реферат. Изучена протеолитическая активность молозива и молока коров черно-пестрой и айрширской пород. Установлено, что изучаемые секреты отличаются содержимым и активностью ферментов. Выявлено, что протеолитическая активность молозива и молока коров, изменяется в зависимости от сезона года и периода лактации. Исследования показали, что молозиво коров айршир-ской породы, в течение всего года по сравнению с молозивом коров черно-пестрой породы, обладает более высокой протеиназ ингибирующей активностью.
Summary. The proteolytic activity of cows' colostrum and milk of black-and-white and Ayrshire breeds has been studied. It is established that the secretions studied differ in the content and activity of the enzymes. It is revealed that the proteolytic activity of cows' colostrum and milk varies with the season of the year and the lactation period. The studies have shown that throughout the year Ayrshire cows' colostrum has a higher proteinase inhibitory activity, as compared with the colostrum of black-and-white cows.
Ключевые слова: коровы, ингибиторы протеиназ, ферменты молока.
Keyword: cows, proteinase inhibitors, milk enzymes.
Введение. Наибольшая интенсивность роста телят наблюдается в первые 2-3 месяца жизни. В этот период организм новорожденного нуждается в большом количестве белков, жиров, углеводов и минеральных веществ. Поэтому рост и развитие телят зависит от количества и качества используемых кормов, а в первый месяц - от качества молока и, особенно, молозива[2,с-242].
В состав молозива и молока входят вещества, необходимые для установления всех синтетических процессов в организме новорожденного. Больше того, накопленные наукой факты позволяют рассматривать молоко как биологическую жидкость, которая в определенной степени подобно крови участвует в обмене веществ, являясь связующим звеном между материнским организмом и новорожденным в смысле продолжения функции матки в постфетальном периоде[1, с-16].
Несмотря на определенные успехи в изучении состава молозива и молока остается много неясностей относительно роли некоторых микрокомпонентов в питании новорожденных, влиянии их на состояние здоровья, скорость роста и развитие организма. [3; 5,с-58; 6; 7,с-109; 8,с-72; 9,с-54; 10,с-241; 11,с-135; 12; 13; 14]
К числу таких малоизученных, на наш взгляд, микрокомпонентов относятся ферменты молока, несмотря на то, что первые упоминания об энзиматической активности молока коров датируется концом 19 века.
Изучение механизма ферментативных процессов пищеварения у телят в первые дни их жизни, роли и участия в них ферментов самого молозива, а именно, протеолитических является актуальным, что позволит расшифровать механизмы, способствующие возникновению диспепсии у телят из-за различного по составу и свойствам выпаиваемого молозива. Кроме того, изучение протеолитического фермента молока, его физико-химических свойств и содержания в зависимости от разнообразных факторов даст возможность учитывать активность фермента при обработке молока и молочных продуктов, предохранить возникновение вкусовых пороков.
Все вышеизложенные факта объясняют интерес исследователей к трипсиноподобному протео-литическому ферменту молока коров.
Изучая литературу по этому вопросу, нам удалось найти ограниченное число работ по определению протеолитической активности только молока и методов выделения. До сих пор не доказано одна ли в молоке коров протеаза, или, как полагают их, по меньшей мере, две. Кроме того, совершенно ничего не известно об истинном содержании фермента в молозиве и молоке, распределении его по фракциям молока, о его взаимодействии с молозивным ингибитором трипсина.
В связи с вышеизложенным, перед нами стояла задача определить истинное содержание и динамику протеолитической активности молозива и молока коров в течение двух первых месяцев лактации.
Материал и методы. В связи с вышеизложенным, целью нашей работы было изучение динамики содержания активных форм ингибитора трипсина в молозиве и молоке коров.
Опыт проводили на двух группах коров черно-пестрой породы и айширской, живой массой 500-550 кг, продуктивностью в предыдущую лактацию — 4000-4500 кг, в летний и зимний стойловый периоды; животные содержались на общехозяйственном рационе, сбалансированном по основным питательным веществам.
Образцы проб молозива и молока отобрали по схеме через 1, 3, 5, 7, 9, 15 и 24 часа после отела. В течение последующих шести дней составлялась среднесуточная проба от трех удоев, а до 60-го дня лактации — подекадная среднесуточная проба.
Образы проб, отобранных для анализа на содержание ингибитора трипсина, обрабатывали по методу B. R.Westrom et al (1976) и по методу J. Bainter (1976). Активность ингибитора протеаз определяли по методу D. Cechova (1976).
Протеазингибирующая активность молозива и молока выражалась в условных ингибиторных единицах (ИЕ). За одну ИЕ принято такое количество молозива и молока, который тормозит гидролиз трипсином 1 мкмоля бензоил-аргинин-пара-нитроанилида за 1 мин при 37 °С.
Результаты и методы. Установлено, что в молозиве всех анализируемых коров самая высокая общая активность ингибитора трипсина через час после отела была во фракции, полученной после центрифугирования молозива при 100000г один час составила 451-326 ИЕ. В пробах обезжиренного молока эта величина составила только 386,85 - 152, 63 ИЕ, что на 14% ниже. У коров айширской породы, содержащихся на зимнем рационе, первоначальный высокий уровень (386-342 ИЕ) сохраняется в течение первых пяти часов после отела, а за следующие два часа снижается около 25%. За девять часов, прошедших после отела, протеазингибирующая активность молозива коров айширской породы
снизилась более чем на 50%,а к концу первых суток составила только 50-45 ИЕ или 12% от величины первоначальной наивысшей активности. За последующие 6 дней активность ингибитора упала приблизительно еще на 5%.
Через 20 дней после отела активность ингибитора сериновых протеаз в молоке коров айшир-ской породы составила только 7% от первоначальной величины. За последующие 40 дней активность снизилась еще на 5% и к 60-му дню лактации молоко коров айширской породы, содержащихся на зимнем общехозяйственном рационе, обладало протеазингибирующей активностью 15-13 ИЕ или только 4% от первоначальной величины.
В образцах молока коров айширской породы, содержащихся на летнем рационе, активность ингибитора трипсина изменялась приблизительно по той же схеме. Так, через 7 часов после отела величина активности ингибитора трипсина составила 60% от наивысшей, полученной через час после отела, а к концу первых суток - только 25%.
Необходимо отметить, что активность ингибитора трипсина в молозиве коров, содержащихся на летнем рационе, изменяется сразу же после отела. Так, за первые сутки происходит снижение более чем на 75%. Молоко коров, содержащихся на зимнем рационе, сохраняет наивысший уровень в течение более чем пяти часов после отела, а затем за последующие 4 часа падает сразу на 50%. К концу первых суток, через 24 часа после отела, уровень активности ингибитора трипсина в молозиве коров обеих пород в зимний и летний сезоны года был приблизительно на одном уровне (64-48 ИЕ).
При исследовании активности ингибитора трипсина в сыворотке, полученной подкислением проб молозива и молока до рН 4,6, было установлено, что через час после отела протеазингибирую-щая активность в молозиве коров обеих групп в летний и зимний сезоны года была приблизительно на одном уровне (389-328 ИЕ).
Схема снижения протеазингибирующей активности в образцах сыворотки совпадает со снижением активности ингибитора в образцах обезжиренного молозива и молока. Так, активность ингибитора в молозиве коров айширской породы, содержащихся на зимнем рационе, сохраняется на одном уровне в течение первых пяти часов после отела (330-311 ИЕ), за тот же период времени в молозиве коров, содержащихся на летнем рационе, активность упала более чем на 30% (368-253 ИЕ соответственно).
Необходимо отметить, что изменение концентрации ингибитора трипсина в образцах молозива коров айширской породы в зимний период совпадает с изменениями концентрации ингибитора трипсина в молозиве коров черно-пестрой породы, содержащихся на летнем рационе.
Для получения сыворотки молозива и молока, рН образцов доводили до 4,6, что приводило к створаживанию молока и удалению основной массы казеина. По нашему мнению, протеазингибиру-ющая активность сыворотки молозива складывается из активности низкомолекулярного кислотоустойчивого ингибитора, предполагаемой активности иммуноглобулинов и активности ингибиторов трипсина, занесенных кровотоком в молочную железу и способных сохранять свои ингибирующие свойства при рН 4,6. Известно, что «истинный» ингибитор трипсина молозива коров - кислотоустойчивый гликопептид с молекулярным весом 12000, выделение, очистку которого производят при рН 4,6-4,2. Однако оптимум рН ингибирования для этого белка лежит в пределах 7,8-8,1. Снижение рН до 4,6 при получении сыворотки могли приводить к потере протеазингибирующих свойств или удалению (денатурации) других, более высоко молекулярных белков, ассоциированных с мицеллами казеина и тоже обладающих ингибирующими свойствами.
Поэтому параллельно с определением активности ингибитора трипсина в образцах сыворотки молозива и молока мы проводили определение активности ингибитора в исследуемых пробах молозива и молока, после механического удаления основной массы казеиновых мицелл центрифугированием при 100000g в час при 0°С.
Активность ингибитора трипсина в супернатантах молозива, полученного через час после отела у коров обеих пород в зимний и летний сезоны года, отмечалась недостоверно. Наивысшей активностью обладало молозиво коров айширской породы, содержащихся на зимнем рационе (451 ИЕ), что оказалось на 20% выше активности ингибитора трипсина в молозиве коров черно-пестрой породы в тот же период года.
Протеазингибирующая активность в супернатантах первых порций молозива у коров обеих пород в летний период года практически не отличалась (326,42 ± 74,52 ИЕ для коров айширской породы и 326,44 ± 67,88 ИЕ - для коров черно-пестрой породы соответственно.
Разница по сезонам года у коров айширской породы составила 25%; активность ингибитора в супернатантах молозива коров, содержащихся на зимнем рационе, на 25% выше, чем на летнем. Аналогично у коров черно-пестрой породы, только разница эта составляет 10%.
За семь часов после отела активность ингибитора трипсина в исследуемых супернатантах снижалась. У коров айширской породы на 37 и 30% в зимний и летний сезоны года, а у коров черно-пестрой породы - на 25 и 45% соответственно.
Активность ингибитора трипсина в соответствующих образцах сыворотки молозива снижалась более интенсивно и через 15 часов после отела составила 84 и 87% для коров айширской породы и 90 и 70% от первоначальной величины - для коров черно-пестрой породы.
К концу первых суток протеазингибирующая активность в образцах сыворотки молозива была также ниже, чем в супернатантах.
Таким образом, изменение значений рН образцов молозива и молока до 4,6 оказывает значительное влияние на активность ингибитора и приводит к снижению активности. Так, активность ингибитора трипсина к 60 дню лактации в сыворотке молока на 30% ниже, чем супернатантах.
Определение динамики изменения активности ингибитора трипсина в образцах молозива и молока, обработанных 2,5%-ным раствором ТХУ, позволило рассчитать активность кислотоустойчивого ингибитора, который является «истинным» ингибитором трипсина молозива коров, и именно он предназначен для предохранения иммуноглобулинов от разрушения в желудочно-кишечном тракте новорожденных.
Анализ полученных данных показал, что самой высокой активностью кислотоустойчивого ингибитора обладало молозиво коров айширской породы, содержащихся на зимнем рационе (187,10 ± 25,12 ИЕ).
У той же группы коров, содержащихся на летнем рационе, активность ингибитора была незначительно меньше.
У коров черно-пестрой породы при зимнем типе кормления активность кислотоустойчивого ингибитора в первых порциях молозива была на 30% ниже, чем у коров айширской породы и на 20% ниже, чем у коров той же группы (черно-пестрой породы) при летнем типе кормления.
Изменение концентрации ТХУ-устойчивого ингибитора в молозиве коров айширской породы в летний и зимний сезоны года происходит приблизительно одинаково.
Так, через 6 часов после отела активность ингибитора при зимнем и летнем типе кормления снижается на 13%, а через 15 часов после отела - на 33 и 40% соответственно. К концу первых суток лактации происходит еще более значительное падение активность (47 и 40% соответственно).
В дальнейшем сезон года оказывает на снижение активности ТХУ-устойчивого ингибитора более существенное влияние. Так, к 7 дню лактации протеазингибирующая активность молока резко снижается до нормальной величины и на 7 день лактации используемым методом не определяется вообще, в то время как в молозиве коров айширской породы, содержащихся на зимнем рационе, это снижение происходит более плавно, и в небольших количествах ингибиторы определяются в молоке даже на 7 день лактации (0,99 ИЕ).
В более позднем молоке (от 20 до 60 дня лактации) активность кислотоустойчивого ингибитора данным методом не определялась вообще. Эти данные согласуются с данными, полученными целым рядом исследователей.
В противоположность коровам айширской породы, активность кислотоустойчивого ингибитора трипсина в молозиве и молоке коров черно-пестрой породы в зависимости от сезона года изменяется рельефно.
Так, содержание ТХУ-устойчивого ингибитора в первых порциях молозива в летний период года было на 20% выше, чем в зимний период. Кроме того, в зимний период происходит более быстрое падение концентрации ингибитора, чем в летний. Так, через 7 часов после отела активность снижается на 30%, а через 24 часа - на 80%, в то время как при летнем типе кормления происходит более плавное снижение активности. Например, в течение первых 5-ти часов в молозиве коров черно-пестрой породы поддерживается с небольшим колебанием почти постоянный уровень активности кислотоустойчивого ингибитора , устойчивого к ТХУ, снижается только на 35%, в то время как в зимний период снижение активности происходит более чем на 50%.
К концу первых суток при содержании животных на летнем рационе в молозиве сохраняется более 40% ингибитора, а зимой - только 20%.
Кроме того, необходимо отметить, что в зимний период года за вторые сутки, прошедшие после отела, содержание кислотоустойчивого ингибитора снижалось до минимума, а на третьи сутки не улавливалось совсем, в то время как при содержании животных на летнем рационе, активность кислотоустойчивого ингибитора сериновых протеаз обнаруживалась даже на седьмые сутки после отела.
Так же, как и для цельного молока, активность истинного ингибитора в молозиве и молоке коров айширской породы, содержащихся на зимнем рационе, сравнима с активностью ингибитора в
молозиве и молоке коров черно-пестрой породы, содержащихся на летнем рационе.
Более высокая концентрация ингибитора трипсина в молозиве коров черно-пестрой породы, содержащихся на летнем рационе, может служить подтверждением мнения относительно участия ингибитора в создании резистентности организма к внешним условиям в раннем онтогенезе. Известно, что в летний период телята были подвержены различным желудочно-кишечным инфекционным заболеваниям. Поддерживание постоянного уровня ингибитора трипсина в первые пять часов после отела способствует установление прочного «колострального» иммунитета в организме новорожденного.
Коровы айширской породы сравнительно недавно завезены в Советский Союз, в среднюю полосу и, соответственно, их организм в настоящее время подвержен разнообразным адаптационным процессам. Нам не удалось найти в литературе совершенно никаких данных по содержанию ингибитора трипсина в молозиве коров этой породы. На основании собственных исследований можно сделать вывод, что молозиво коров айширской породы в течение всего года по сравнению с молозивом коров черно-пестрой породы обладает более высокой протеазингибирующей активностью.
Кроме того, активность истинного кислотоустойчивого ингибитора трипсина составила около 70% от общей трипсинингибирующей активности в первых порциях молозива у коров айширской породы, а у коров черно-пестрой породы - только 45%.
Таким образом, протеазингибирующая активность молозива и молока коров представляет собой суммарную величину трипсина и активности «истинного» кислотоустойчивого ингибитора трипсина и активности молекул белка, имеющих более высокий молекулярный вес, разрушающихся при воздействии 2,5%-ным раствором ТХУ и простом подкислении рН образца до 4,6.
Суммарная протеазингибирующая активность молозива наивысшая сразу после отела постепенно снижается и через 24 часа остается только 15% от первоначального наивысшего значения.
Молоко же на протяжении всего времени исследования (60 дней) обладало незначительной протеазингибирующей активностью (5-2%), величина которой не зависит от породы животных и недостоверно зависит от сезона года.
Концентрации «истинного» ингибитора трипсина наивысшая в молозиве коров обеих групп в первых порциях секрета значительно снижается за 24 часа, а к конце седьмых суток лактации не обнаруживаются совсем.
Причем у коров черно-пестрой породы в зимний период активность ингибитора снижается до минимума уже за два дня после отела.
Заключение. Динамика протеолитической активности молозива у коров зависит от многих факторов, среди которых, на наш взгляд сезон года, рацион животных, порода, удой и время после отела. Особо следует отметить состояние молочной железы животных, от которой зависит состояние изученных показателей.
Библиографический список
1. Мосолов В.В. Химия протеолитических ферментов: материалы 2-го всесоюзного симпозиума по химии протеолитических ферментов. Углич, 1979. С. 15-19.
2. Николаевская В.Р., Черников М.П. Успехи современной биологии. 1981. Т. 91. Вып.2. С. 241-251.
3.Усачев И.И. Динамика иммуноглобулинов и бактериоценоза в организме ягнят в раннем постнатальном онтогенезе: автореф. дис. ... канд. вет. наук. М., 1994.
4.Воробьев А.А., Несвежский Ю.В., Лещетский Е.М. Исследование пристеночной микрофлоры кишечника человека // Микробиология. 2003. № 1. С. 60-63.
5.Усачев И.И., Усачев К.И. Способы повышения жизнеустойчивости животных в раннем постнатальном онтогенезе // Вестник Брянской ГСХА. 2007. № 6. С. 56-61.
6.Усачев И.И., Поляков В.Ф. Роль иммуноглобулинов в жизнедеятельности животных: монография. Брянск, 2007.
7.Савченко О.В., Усачев И.И. Микробиоценоз в химусе тощей кишки овец и ягнят в раннем постнатальном онтогенезе // Экологические и селекционные проблемы племенного животноводства: научные труды. Брянск, 2009. С. 106-107.
8. Микробиоценоз взрослых овец в различные сезоны года / И.И. Чеченок, О.В. Савченко, И.И. Усачев, К.И. Усачев // Овцы, козы, шерстяное дело. 2009. № 3. С. 71-73.
9. Усачев И.И., Поляков В.Ф. Коррекция энтеральных дисбиотических нарушений у животных // Вестник Брянской ГСХА. 2009. № 2. С. 53-57.
10. Усачев К.И., Усачев И.И. Результаты исследований микробиоценоза слизистой оболочки подвздошной кишки овец // Вестник Орловского государственного аграрного университета. 2012. Т. 38, № 5. С. 135-136.
11. Нормативы кишечной микрофлоры у овец: методическое положение / И.И. Усачев, В.Ф. Поляков, В.В. Пономорев, Н.Н. Чеченок, К.И. Усачев, И.В. Каничева, О.В. Гомонова. Брянск, 2013.
12. Усачев И.И., Поляков В.Ф. Микробиоценоз различных отделов кишечника и фецеса у овец. Брянск, 2013.
13. Рекомендации по оценки микробиоценоза подвздошной, слепой, ободочной и прямой кишок ягнят в молозивный, молочный и смешанный периоды питания (1-60 суток) / И.И. Усачев, В.Ф. Поляков, И.В. Каничева, К.И. Усачев. Брянск, 2015.
References
1. Mosolov, V. V. Chemistry ofproteolytic enzymes. Materials of the 2nd All-Union Symposium on the chemistry of proteolytic enzymes. Uglich, 1979. P. 15-19.
2. Nikolaevskaya V.R., ChernikovM.P. Successes of modern biology. 1981. Vol.91(2). P. 241-251.
3. Usachev I.I. Dynamics of immunoglobulins and bacteriocenosis in the body of lambs in early postnatal ontogenesis: Abstract of Diss... of Cand. Veterinary. Moscow, 1994.
4. Vorobyov A.A., Nesvezhsky Yu.V., Leschetski E.M. Study of the parietal microflora of the human intestine //Microbiology, 2003, № 1. P. 60-63.
5. Usachev, I.I., Usachev K.I. Ways to improve sustainability of animals in the early postnatal ontogenesis// Vestnik of the Bryansk State Agricultural Academy. 2007. № 6. P.56-61.
6. Usachev I.I., Polyakov V.F. The role of immunoglobulins in animals' life. Monograph. Bryansk, 2007.
7. Savchenko O.V., Usachev I.I. Microbiocenosis in the chymus of the jejunum of sheep and lambs in early postnatal ontogenesis //Ecological and breeding problems of livestock breeding. Proceedings// Bryansk, 2009. №2. P. 106-107.
8. Microbiocenosis of adult sheep in different seasons of the year / I.I. Chechenok, O.V. Savchenko, I.I. Usachev, K.I. Usachev //Sheep, goats, wool business. 2009. № 3. P. 71-73.
9. Usachev I.I., Polyakov V.F. Correction of enteral dysbiotic disorders in animals// Vestnik of the Bryansk State Agricultural Academy. 2009. № 2. P. 53-57.
10. Usachev K.I., Usachev I.I. The study results of microbiocenosis of the mucous membrane of sheep's ileum// Bulletin of the Orel State Agrarian University. 2012. Vol.38. № 5. P. 135-136.
11. Standards of the intestinal microflora in sheep. Methodical provision/ I.I. Usachev, V.F. Polyakov, V.V. Ponomarev, N.N. Chechenok, K.I. Usachev, I.V. Kanicheva, O.V. Gomonova. Bryansk, 2013.
12. Usachev I.I., Polyakov V.F. Microbiocenosis of different parts of the intestine and feces of sheep. Bryansk, 2013.
13. Recommendations for the assessment of microbiocenosis iliac, blind, colon and rectum of the lambs at colostric, dairy and mixed feeding periods (1-60 days) / I.I. Usachev, V.F. Polyakov, I.V. Kanicheva, K.I. Usachev. Bryansk, 2015.
