Чутливість до лікувальних фагів стафілококів, виділених від вагітних Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

© Черник В. I., Зубарева I. М., Вшшков А. I. УДК 477.6:616.523

Черник В. I., Зубарева I. М., BiHHiKOB А. I.

ЧУТЛИВЮТЬ ДО Л1КУВАЛЬНИХ ФАГ1В СТАФ1ЛОКОК1В,

ВИД1ЛЕНИХ В1Д ВАГ1ТНИХ

Днiпропетровський нацiональний унiверситет iM. Олеся Гончара (м. Дшпропетровськ)

microviro@rambler.ru

Дане дослiдження виконано у межах держ-бюджетно! теми «Структурно-функцюналыы осо-бливостi природних мiкробiоценозiв та механiзм бiологiчноI дИ мiкробних препаратiв», № державно! реeстрацiI 0115и002385.

Вступ. Стафiлококи - однi з найбтыш розповсю-джених збудникiв уражены людини. Особливу загрозу цей мiкроорганiзм представляв у пологових будин-ках, де вщбуваетыся передавання цих бактерм вiд персоналу до немовлят, як в свою чергу заражаюты матерiв стафiлококами, що вегетуюты у них в носг Встановлена не ттыки висока вiрогiднiсты Ыф^ван-ня новонароджених та породiлы внутршныолкарня-ними штамами стафiлококу, але й iнтенсивне вине-сення !х у родину новонароджених, у результат чого спостерiгаeтыся висока захворюванюты породiлы та новонароджених пюля виписування - в 20 разiв вища у порiвняннi з пологовими будинками [2,5].

Особливого ризику Ыф^вання стафiлококами надае значне поширення серед !х штамiв стiйкостi до антибiотикiв. У багатыох кгмычних монiторингових дослщженнях по стафiлококу показано, що зустр^ чаютыся множиннорезистентнi штами, стiйкi до 5-10 i бiлыш препаратiв. За даними деяких дослщниюв, серед стафтокоюв, видiлених вiд хворих людей, таю штами зустрiчаютыся частiше нiж в 5-10% випадюв [3,4]. Тому виникае потреба у пошуку алытернативних схем терапи стафiлококових уражены i серед найбтыш перспективних препаратiв називаюты бактер^ офаги, до яких стафтококи не маюты стiйкостi [1].

Отже, метою роботи було вивчити чутливюты до препара^в лiкувалыних бактерiофагiв штамiв золотистого стафiлококу, що видтеы вiд вагiтних.

Завданнями роботи було:

• вивчити видовий спектр видтених штамiв стафiлококiв;

• дослiдити чутливюты видтених штамiв золотистого стафтококу до лiкувалыних препаратiв бактерiофагiв.

Об'ект i методи дослiдження. Дослiдження проводили на базi КЗ «Павлоградсыкий пологовий будинок» ДОР»

Було дослiджено бюлопчний матерiал (назалынi змиви) вiд ваптних жiнок, що ставали на облк у по-логовому будинку м. Павлоград (п=47). Матерiал вiдбирали тампоном з носово! порожнини. З тампону здмснювали висiв на щтыне середовище Стаф^ лококовий агар (ЬЛМесНа, lндiя). Посiви iнкубували за температури +37°С 18 годин. Зi зрослих колонм вщ-бирали матерiал для мiкроскопiчного та кулытуралы-

ного доотдження. 1дентиф1кац1ю вид1лених штам1в стаф1локок1в здмснювали в1дпов1дно до рекомен-дац1й наказу № 535 вщ 22.04.1985р. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» [6]. Для виявлення прояву фактор1в патогенност1 у видтених 1золят1в стаф1-локоюв проводили вис1в досл1джуваного матер1алу на жовтково-сольовий агар та 5% кров'яний агар. Основними диференц1йно-д1агностичними ознака-ми золотистого стафтокока е позитивна плазмо-коагулазна активн1сть, ДНК-азна реакц1я, i фермен-тац1я манiту в анаеробних умовах [3], як визначали вщповщно до стандартних методик [6].

Для дослщження чутливостi до лiкувальних пре-паратiв бактерiофагiв використовували препарати «!нтест^фаг» та «Бактерiофаг стафiлококовий рщ-кий» (Микроген, РФ). Використовували крапельний метод. На поверхню чашки з м'ясо-пептонним агаром наносили суспензт клггин (0,1 мл) доотджу-вано! культури, що мiстила 109 КУО/мл, розтирали шпателем рiвномiрно по всiй II площк 1нкубували 30-40 хвилин. Чашку подтяли на два сектори, на як наносили краплями дослiджуванi препарати (краплi наносили iнсулiновим шприцем). 1нкубували 24 го-дини. Штам вважали чутливим за умов формування зони повного лiзису культури в мющ потрапляння краплi фiльтрату або при появi в цiй дiлянцi дрiбних стерильних п'ятен-колонiй бактерiофага [7,8].

Результати дослщжень та Ух обговорення. З 47 дослiджених зразкiв бiологiчного матерiалу на-явнiсть стафiлококiв було визначено у 26 зразках, що склало 55,3% i що е високим показником носмства. Видова iдентифiкацiя (рис. 1) дозволила встанови-ти, що з 26 iзолятiв, iдентифiкованих як стафтококи, 12 належали до виду Staphylococcus aureus i 10 -до виду S. epidermidis, 3 - до виду S. saprophyticus i 1 щентифковано як Staphylococcus spp.

Визначено, що плазмокоагулазу продукували вс штами S. aureus i жоден з iзолятiв коагулазонегатив-них стафтокоюв. Лiпазу та лецитiназу продукували 83,3% видтених штамiв S. aureus, до продукцп ге-молiзинiв здатними були 91,7% його штамiв. Зони гемолiзу були вiд 2 до 8 мм. З коагулазонегативних стафтокоюв здатними до продукцiI гемолiзинiв ви-явилися лише 30% штамiв S. epidermidis i жодного серед Ыших видiлених коагулазонегативних ста-фiлококiв. З останых продукцiя лiпази та лецитЫа-

Staphylococcus spp

" 3,8%

S. saprophyticus 11,5%

S. aureus ^46,2%

S. epidermid

38,5%

Рис. 1. Видовий спектр видiлених штамiв стафiлококiв.

зи була виявлена для Staphylococcus spp., та для менше ыж 60% S. epidermidis та S. saprophyticus.

Для Bcix видтених iзолятiв дослiджували прояв факторiв патогенност (рис. 2).

На чутливiсть до л^вальних препаратiв фагiв ви-вчали лише видтеы штами золотистого стафтоко-ку, що мали активний прояв факторiв патогенностi. Кожен з 12 штамiв тестували на чутливiсть до фапв з препаратiв iнтестi-бактерiофаг та стафтококовий бактерiофаг рiдкий.

Результати вивчення чутливост видiлених iзоля-тiв до дм бактерiофагiв з лiкувальних препаратiв дозволили встановити (рис. 3), що вс видiленi iзоляти

у тм чи iншiй мiрi були чутливi до препарату стафiлококовий бактерюфаг рiдкий та бть-шiсть - до препарату 1нтесп-фаг, що, вiропд-но, може бути пояснено вщсутнютю специфiч-ного фага у препарат.

У дослiдженнях iз усiма видтеними iзо-лятами спостерiгали утворення зон лiзису. Найбiльш ефективний лiзис спостер^али для фагiв з препарату стафтококовий бактер^ офаг рiдкий, який давав зони повного лiзи-су культури у мiсцях нанесення препарату. 1нтесп-фаг викликав повний лiзис культури у 5 випадках (71,4%) та слабкий лiзис з форму-ванням окремих бляшок на газонi культури у 2 випадках (28,6%). Отже, використання стаф^ лококового бактерюфагу е бтьш ефективним.

Для лiкувальних цiлей застосовують пере-важно препарати фагiв, активних проти золотистого стафтокока, вiрогiдно саме тому бiльшу ефективнiсть проявив спецiалiзова-ний стафiлококовий фаг, що мютить декiлька рiзних вiрусiв, до яких чутливий цей мiкроорганiзм. Натомють iнтестi-фаг мiстить обмежену групу ста-фiлококових фагiв, а отже, велика вiрогiднiсть того, що потрiбного для лiзису кожно! конкретно! культури серед них не буде [9,10].

Висновки

1. Частота виявлення назального носмства стаф^ лок^в серед вагiтних склала 55,3%. Серед видiлених штамiв як Staphylococcus aureus було щентифкова-но 46,2%, S. epidermidis - 38,5%, S. saprophyticus -11,5% та Staphylococcus spp. - 3,8%.

2. Визначено, що плазмокоагулазу продукували вс штами S. aureus i жоден з iзолятiв коагулазоне-

5

э

£

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

100

100

100

Плазмокоагулаза

Л'таза

Лецитназа

Продукця гемол1зин1в

BS. aureus sS. epidermidis □ S. saprophyticus н Staphylococcus spp Рис. 2. Частота прояву факторiв патогенност iзолятами стафiлококiв.

гативних стафтокоюв. Лiпазу та лецитЫа-зу продукували 83,3% видтених штамiв S. aureus, до продукци гемолiзинiв здатни-ми були 91,7% його штамiв. З коагулазо-негативних стафiлококiв лише 30% штамiв S. epidermidis продукували гемолiзини. До продукцiI лiпази та лецитшази була здат-нi Staphylococcus spp., та менше нiж 60% S. epidermidis та S. saprophyticus.

3. Bei видтеы штами S. aureus були чут-ливi до дм стафiлококового бактерiофага рiдкого та 58,3% штамiв до дм iнтестi-фага.

Перспективи подальших дослiджень. Дослiдження серед вагiтних жiнок часто-ти виявлення стафтокоюв та 1х бiологiчних властивостей дае необхiдну iнформацiю для розробки заходiв профiлактики поширення цих мiкроорганiзмiв та для запобкання роз-витку ускладнень вагiтностi. Знання про чут-ливють до фагiв у перспективi можуть бути використанi для пiдбору схем рацюнально! терапи стафiлококових уражень у ваптних у разi неможливостi або неефективност за-стосування антибiотикiв.

Л^ература

1. Акимкин В. Г. Бактериофаги: исторические и современные аспекты их применения, опыт и перспективы / В. Г. Акимкин,

О.С. Дарбеева, В. Ф. Колков // Клиническая практика. - 2010. - № 4. - С. 48-54.

2. Карабак В. И. Микробиологический мониторинг за возбудителями нозокомиальных инфекций (на примере отделений реа-

нимации и интенсивной терапии) / В. И. Карабак // Антибиотики и химиотерапия. - 2000. - № 3. - С. 20-23.

3. Коротяев А. И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. - СПб: Медицина,

2008. - С. 409-416.

4. Макушенко P. C. Видовий склад та чутливють до антибютиюв оксацилшрезистентних штамiв стафтокоюв / P. C. Макушенко,

Л. В. Авдеева, Я. Ю. Мачерет // AML. - 2008. - № 1-2. - С. 14-19.

5. Маянский А. Н. Микробиология для врачей / А. Н. Маянский. - Нижн. Новгород: Свитязь, 1999. - 400 с.

6. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностиче-

ских лабораториях лечебно-профилактических учреждений: приказ № 535. - [чинний вщ 22.04.1985р.]. - М.: МОЗ СССР, 1985. - 65с.

7. Полщук В. П. Поабник з практичних занять з курсу «Загальна вiрусологiя» / В. П. Полщук, I. Г. Будзашвська, Т. П. Шевченко. -

К.: Фп-осоцюцентр, 2005. - 204 с.

8. Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов / под ред. С. Г. Дзагурова, Ф. Ф. Резепова. - М: Медицина,

1995. - 116 с.

9. Matsuzaki S. Bacteriophage therapy: a revitalized therapy against bacterial infectious diseases / S. Matsuzaki, M. Rashel, J. Uchiyama

[et al.] // J. Infect. Chemother. - 2005. - № 11. - Р. 211-219.

10. Paul V. D. Lysis-deficient phages as novel therapeutic agents for controlling bacterial infection / V. D. Paul, S. Sundarrajan, S.S. Rajagopalan [et al.] // BMC Microbiol. - 2011. - Vol. 31-11. - P. 195.

УДК 579:61

ЧУТЛИВЮТЬ ДО Л1КУВАЛЬНИХ ФАГ1В СТАФ1ЛОКОК1В, ВИД1ЛЕНИХ В1Д ВАГ1ТНИХ Черник В. I., Зубарева I. М., Вшшков А. I.

Резюме. Мета. Вивчити чутливють до препара^в лкувальних бактерюфапв штамiв золотистого стафг лококу, що видтеы вщ ваптних. Методи. Бактерюлопчы - для видтення та щентифкаци бактерм та кра-пельний метод - для до^дження чутливост до бактерюфапв. Результати. Встановлено, що частота назального носмства стафток^в серед ваптних 55,3%. Серед стафтокоюв видтено представниюв видiв S. aureus - 46,2%, S. epidermidis - 38,5%, S. saprophyticus - 11,5% та Staphylococcus spp. - 3,8%. ЛНпазу та лецитЫазу продукували понад 80% видтених штамiв S. aureus, Staphylococcus spp. та менше ыж 60% S. pidermidis та S. saprophyticus. До продукци гемолiзинiв здатними були 91,7% штамiв S. aureus та 30% штамiв S. epidermidis. ВЫ видтеы штами S. aureus були чутливi до дм стафтококового бактерюфага рщкого та 58,3% штамiв до дм Ытестгфага. Висновки. При доогмджены назального носмства стафтококу серед ваптних було встановлено домшування S. aureus (46,2% штамiв). ВЫ видтеы його штами мали активний прояв факторiв патогенностк Доотдження чутливост штамiв S. aureus до л^вальних препара^в бактерюфапв показало, що значно бтьш ефективним був полiвалентний препарат стафтококовий бактерюфаг рщкий, що мютить специфiчнi протистафiлококовi фаги. Чутливими до нього виявилися вс видiленi штами S. aureus.

Ключовi слова: стафiлокок, видовий спектр, фактори патогенностi, чутливiсть до л^вальних бактерю-фагiв, вагiтнiсть.

100

100

90

80

.щ

S 70

СП

к

d 60

X

х rn 50

X

Ü 40

■Г

ÖS 30

20

10

0

58,3

Стафтоко ковий бактерюфаг

1нтест1-фаг

Рис. 3. Чутливють видтених штамiв S. Aureus до л^вальних препаратiв фапв.

УДК 477.6: 616.523

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ЛЕЧЕБНЫМ ФАГАМ СТАФИЛОКОККОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БЕРЕМЕННЫХ

Черник В. И., Зубарева И. М., Винников А. И.

Резюме. Цель. Изучить чувствительность к препаратам лечебных бактериофагов штаммов золотистого стафилококка, выделенных от беременных. Методы. Бактериологические - для выделения и идентификации бактерий и капельный метод - для исследования чувствительности к бактериофагам. Результаты. Установлено, что частота назального носительства стафилокков среди беременных составила 55,3%. Среди стафилококков выделены представители видов S. aureus - 46,2%, S. epidermidis - 38,5%, S. saprophyticus -11,5% и Staphylococcus spp. - 3,8%. Липазу и лецитиназу продуцировали более 80% выделенных штаммов S. aureus, Staphylococcus spp. и менее 60% S. epidermidis и S. saprophyticus. К продукции гемолизинов были способны 91,7% штаммов S. aureus и 30% штаммов S. epidermidis. Все выделенные штаммы S. aureus были чувствительны к действию стафилококкового бактериофага жидкого и 58,3% штаммов к действию Интести-фага. Выводы. При изучении назального носительства стафилококка среди беременных было установлено доминирование S. aureus (46,2% штаммов). Все выделенные его штаммы показали активное проявление факторов патогенности. Исследование чувствительности штаммов S. aureus к лечебным препаратам бактериофагов показало, что значительно более эффективным был поливалентный препарат стафилококковый бактериофаг жидкий, содержащий специфические противостафилококковые фаги. Чувствительными к нему были все выделенные штаммы S. aureus.

Ключевые слова: стафилококк, видовой спектр, факторы патогенности, чувствительность к лечебным бактериофагам, беременность.

UDC 477.6: 616,523

SENSITIVITY TO THERAPEUTIC PHAGES OF STAPHYLOCOCCI, ISOLATED FROM PREGNANT

Chernik V. I., Zubareva I. M., Vinnikov A. I.

Abstract. Staphylococci are one of the most common pathogens, caused lesions of human. Special threat this microorganisms represents in hospitals, where the transfer of bacteria from the staff to the babies, latter infect mothers and staphylococci vegetate in their nose. The installed not only a high probability of infection of newborns and mothers by nosocomial strains of staphylococci, but intensive making their newborn into the family, resulting in a high incidence observed mothers and infants, even after discharge. Special offers of staphylococci infection is risk of widespreading of antibioticresistance among strains. Therefore there is a need to find alternative strategies against staphylococcal lesions, and among the most promising drugs there are the bacteriophages, for which staphylococci have not resistance. The aim of research was to study the sensitivity of Staphylococcus aureus strains, isolated from pregnant women, to bacteriophages drugs. The objectives of the work were to study the species range of selected strains of staphylococci; explore the sensitivity of isolated strains of Staphylococcus aureus to bacteriophage drugs. Methods. Bacteriological - for isolation and identification of bacteria and drop method -to study the sensitivity to bacteriophages. It was investigated the biological material (nasal washings) of pregnant women (n = 47) were registered in the maternity of town Pavlohrad. To study the sensitivity to preparations used the bacteriophage drugs "Intesti-phage" and "Bacteriophage staphylococcal liquid". Results. It was established, that the incidence of nasal carriage of staphylococci among pregnant was 55.3%. Among the isolated staphylococci S. aureus was dominant - 46,2%, S. epidermidis - 38,5%, S. saprophyticus - 11,5% and Staphylococcus spp. -3,8%. Lecitinase and lipase produced more than 80% selected strains of S. aureus, Staphylococcus spp. and less than 60% of S. epidermidis and S. saprophyticus isolates. Able to produce hemolysins were 91.7% of S. aureus strains and 30% of S. epidermidis strains. All isolated strains of S. aureus were sensitive to staphylococcal bacteriophage liquid and 58.3% of strains - to intesti-phage. The most effective lysis observed for phage of preparation "staphylococcal bacteriophage liquid", which gave complete lysis zone. Intesti-phage lysis full culture were confirmed in 5 cases (71.4%) and weak lysis with the formation of individual plaques on the lawn culture in 2 cases (28.6%). Consequently, the use staphylococcal bacteriophage is more efficient. Study the frequency of detection of staphylococci among pregnant women and biological properties of microbial culture provides the necessary information to develop preventive measures against spread of these microorganisms and to prevent the development of pregnancy complications. Knowledge of the sensitivity to phages in prospects can be used for the rational therapy schemes of staphylococcal lesions in pregnancy in case of failure or ineffectiveness of antibiotics use. Conclusions. In the study of nasal carriage of staphylococci among pregnant was found dominance of S. aureus (46,2% of strains). All strains had marked his active expression of pathogenicity factors. Study of sensitivity of S. aureus strains to the bacteriophage drugs showed that polyvalent staphylococcal bacteriophage liquid, containing specific antistaphylococcal phages, was significantly more effective. All selected strains of S. aureus were sensitive to it.

Keywords: staphylococci, species range, pathogenicity factors, sensitivity to bacteriophages drugs, pregnancy.

Рецензент- проф. Громова А. М.

Стаття надшшла 10.11.2015 року