CC BY
36
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
пульс-терапии метилпреднизолоном выявило снижение аллостимуляторной активности с 21037 (18614-21345) до 11531 (9494-20052) имп/мин, которое при индивидуальном анализе регистрировалось у 8 из 10 больных. В то же время снижение стимуляторной активности ДК в ауто-СКЛ после терапии регистрировалось только у 6 из 10 пациентов, тогда как в 4 случаях данный показатель возрастал (n = 3) или не менялся (n = 1). Соответственно, достоверного снижения ответа в ауто-СКЛ после пульс-терапии в целом по группе не наблюдалось (Ме 10126 против 12247 имп/мин). Сравнение пациентов, ответивших (группа 1) и не ответивших (группа 2) на терапию снижением стимуляторной активности ДК в ауто-СКЛ, не выявило различий в исходной активности заболевания и чувствительности к действию дексаметазона in vitro. При этом терапия у пациентов группы 1 сопровождалась более интенсивным снижением СОЭ, чем у пациентов группы 2 (35 против 23%).
Заключение. ДК больных РА сохраняют чувствительность к толерогенному действию дексаметазона, который подавляет способность ДК стимулировать пролиферацию не только аллогенных, но и аутологичных Т-лимфоцитов. Несмотря на подавление in vitro аллостимуляторной активности ДК у всех пациентов, ингибирующий эффект пульс-терапии метилпреднизолоном in vivo регистрируется только у 60% больных РА. Дальнейшие исследования стимуляторной активности ДК могут представлять интерес в качестве поиска предикторов эффективности терапии при РА.
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ, КОДИРУЮЩИХ CD38, ICAM-1, Fas И IL-2ra, В КЛЕТКАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ
Кхедри Ф.1, Курников Г.Ю.2, Фомина С.Г.1, Новиков В.В.1
1 Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия
2 Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород, Россия
Введение. Псориаз является хроническим воспалительным заболеванием кожи, характеризующимся высоким уровнем пролиферации кератиноцитов, а также инфильтрацией в дермис клеток как врожденного, так и адаптивного иммунного ответа. Передача сигналов в клетки иммунной системы осуществляется многими поверхностными рецепторами. Среди них мембранные молекулы CD38, ICAM-1, Fas и IL-2ra, участвующие в межклеточных взаимодействиях, активации клеток и инициации апоптоза. Характер экспрессии этих генов, определяемый по уровню их мРНК, может быть информативным показателем состояния иммунитета и течения иммуно-опосредованных заболеваний, в том числе псориаза.
Цель. Определение уровня мРНК CD38, ICAM-1, Fas и IL-2ra в цельной периферической крови больных псориазом.
Материалы и методы. Исследовали 80 образцов периферической крови больных псориазом, проходивших лечение в Нижегородской городской больнице № 13, а также 50 образцов периферической крови здоровых доноров, полученных из Нижегородского областного центра переливания крови. Выделение нуклеиновых кислот проводили методом фенол-хлороформной экстракции. Определение уровней мРНК осуществляли методом ОТ-ПЦР
в режиме реального времени. Относительные уровни исследуемых мРНК оценивали методом сравнения пороговых циклов (AACt). Больные по степени тяжести заболевания (PASI) были разделены на две группы: «от 10 до 30» и «от 30 и до 72». Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерной программы Statis-tica 10.0. Различия считали значимыми при p < 0.05.
Результаты. Полученные результаты показали статистически значимое увеличение уровня мРНК молекул IL-2ra в периферической крови больных псориазом как у первой группы (PASI от 10 до 30), так и у второй (PASI от 30 и до 72) в 9 и 12 раз, соответственно, по сравнению с донорами. Уровень мРНК молекул Fas в крови больных псориазом также был статистически значимо выше, чем в норме. У больных первой группы (PASI от 10 до 30) он повышался в 1,8 раза, а у больных второй группы — в 1,6 раза (PASI от 30 и до 72). В то же время уровень мРНК молекул адгезии CD38 и ICAM-1 у больных псориазом в обеих группах оставался в пределах нормы. Обращала на себя внимание лишь тенденция к увеличению уровня мРНК CD38 молекул у больных первой группы (PASI от 10 до 30).
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о повышении экспрессии генов, кодирующих a-цепь рецептора интерлейкина-2 и молекулы Fas (CD95) в суммарной фракции клеток крови. Обе молекулы являются маркерами активации клеток иммунной системы, при этом последняя участвует в инициации апоптоза по Fas-зависимому пути. Наиболее выраженное повышение уровня экспрессии обнаруживалось для гена IL-2ra.
ЗНАЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ TLRs И ПОЛИМОРФИЗМА ИХ ГЕНОВ В РАЗВИТИИ СОСУДИСТЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ
Левкович М.А., Галкина Г.А., Крукиер И.И., Воропай А.А., Григорянц А.А.
ФГБУ«Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Министерства здравоохранения РФ, Ростов-на-Дону, Россия
Сахарный диабет является важной медико-социальной проблемой современной медицины, что обусловлено увеличением его распространенности и тяжестью течения. В последние годы активно обсуждается роль иммунных механизмов, в частности, хронического воспаления, в развитии, как сахарного диабета, так и его сосудистых осложнений. Медиаторами воспалительного ответа, играющего важную роль в формировании микроангио-патии являются молекулы врожденного иммунитета — TLRs. Триггером активации TLRs при гипергликемии могут являться насыщенные жирные кислоты.
В этой связи целью исследования явилось определение роли экспрессии TLR-2, TLR-4 и полиморфизма их генов в формировании микроангиопатии при сахарном диабете (СД1) у подростков.
В исследование был включены 66 подростков в возрасте от 14 до 18 лет, с декомпенсацией СД1 и дислипидемией, которые были подразделены на 2 группы в зависимости от наличия или отсутствия микроангиопатий. В I группу вошли 38 пациентов с различными микроангиопатиями, во II группу — 28 пациентов без признаков микроциркулятор-ных нарушений. Группу контроля сформировали 18 «условно здоровых» подростков. Определение экспрессии TLR-2 (CD14+CD282+) и TLR-4 (CD14+CD284+) рецепторов на
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
моноцитах периферической крови проводилось методом двухцветной проточной цитофлуориметрии с использованием диагностических наборов HyCultbiotechnology (Нидерланды). Для удаления эритроцитов пробоподго-товку проводили с использованием лизирующего раствора OptiLiseC фирмы Immunotex (Франция). Результаты учитывали на проточном цитофлюориметре BECKMAN COULTER EPICS XL-II (США), используя стандартные протоколы. Определение аллельных вариантов генов проводили методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом тест-системами ГосНИИгенетика (Москва). Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.
Было установлено, что у пациентов I и II групп по сравнению с контрольной группой отмечались выраженные изменения показателей врожденного иммунитета в виде статистически значимого повышения экспрессии CD14+CD282+ на моноцитах (72,4±8,1% и 60,8±4,4% против 30,7±10,8% соответственно, р < 0,05). При анализе частоты полиморфизма генов TLR-2 обнаружено, что в I группе по сравнению с контрольной и II группой частота генотипа Arg/Arg встречалась достоверно чаще (68,7% против 25,6 и 24,5% соответственно, р < 0,05), следовательно, у носителей аллеля Arg гена TLR-2 риск развития микроангиопатии при сахарном диабете выше, а генотип Arg753Gly, вероятно, имеет протективный эффект.
Таким образом, увеличение экспрессии TLR-2, наличие полиморфизма кодирующих генов, могут приводить к каскаду внутриклеточных сигнальных событий, с последующей стимуляцией транскрипции многих провос-палительных регуляторных субстанций, которые, в свою очередь, способствуют развитию диабетической микро-ангиопатии.
ВЫЯВЛЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ЦЕЛИАКИИ ПРИ РАЗНЫХ ГЕНОТИПАХ
Малкова А.М., Будкова А.И.
ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Целиакия — хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся поражением эпителия тонкой кишки в результате иммунного ответа организма на дезаминированный глиадин. Согласно рекомендациям ESPGHAN 2012 диагноз целиакия подтверждается с помощью серологической диагностики специфичных антител, гистологического исследования тонкой кишки, выявления HLA DQ2/ DQ8 генотипов.
Цель. Определить достоверность встречаемости серологических маркеров целиакии при разных генотипах.
Материалы и методы. В качестве материала для исследования использовались образцы венозной крови 105 обследуемых лиц. Антитела к человеческой тканевой трансглутаминазе 2 типа и дезаминированному пептиду глиадину IgG определялись методом ИФА, антитела к эн-домизию IgA методом нРИФ.
Для определения генотипа HLA DQ2/DQ8 обследуемых применялся метод ПЦР real time.
Результаты. Из 105 обследуемых у 56 % (59/105) были выявлены специфичные для целиакии HLA- DQ генотипы. Среди них преобладают аллельные формы HLA-DQ2.5; HLA-DQ2.2 - 25% (13/59). Частота генотипа HLA-DQ2.5, как и HLA-DQ8 составила 23,1% (12/59), HLA-DQ8;HLA-DQ2.2 9,6% (5/59). Повышенные титры специфичных антител чаще всего наблюдаются при генотипе HLA-DQ2.5 - 25% (3/12).
Достоверно встречаемость повышенных титров специфичных антител выше у лиц с положительным генотипом.
Заключение. Исследование показало, что наиболее часто встречаемыми генотипами среди обследуемых являются аллельные формы HLA-DQ2.5; HLA-DQ2.2 , HLA-DQ8 и HLA-DQ2.5. При этом у лиц с генотипом HLA-DQ2.5 серологические маркеры целиакии выявляются чаще всего.
Поскольку была выявлена статистически значимая разница при анализе результатов серологической диагностики на антитела к тканевой трансглютаминазе, эндомизию и генотипирования, можно говорить об оправданности использования тестов на выявление повышенных титров именно этих антител для диагностики целиакии.
ЭКСПРЕССИЯ АКТИВАЦИОННЫХ МАРКЕРОВ Т-ХЕЛПЕРАМИ И ЦИТОТОКСИЧЕСКИМИ Т-КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ДЕТЕЙ С АУТОИММУННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ПРИ СТИМУЛЯЦИИ МИТОГЕНОМ IN VITRO
Пашнина И.А.
Областная детская клиническая больница № 1, Екатеринбург, Россия
Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург, Россия
Исследование экспрессии маркеров активации лимфоцитов широко используется для оценки функционального состояния этих клеток. При этом стимуляция митогенами in vitro позволяет исследовать общую реактивность той или иной клеточной популяции. Наиболее удобными объектами исследования при стимуляции являются рецепторы лимфоцитов, экспрессия которых увеличивается за короткий промежуток времени, в частности CD25, CD38, CD69. Увеличение экспрессии этих молекул можно зафиксировать с помощью проточной цитометрии уже через 4-24 часа после индукции. Целью настоящей работы явилось исследование спонтанной и стимулированной экспрессии CD25, CD38, CD69 у детей с аутоиммунными (ревматическими) заболеваниями соединительной ткани.
Обследованы дети 6-17 лет с ревматическими заболеваниями в стадии активности: ювенильным идиопа-тическим артритом (ЮИА, n = 75), ювенильной склеродермией (ЮСД, n = 16), системной красной волчанкой (СКВ, n = 15), а также условно здоровые дети (контроль, n = 32). Образцы цельной периферической крови разводили глутаминсодержащей средой RPMI-1640 (Пан-Эко, Россия) в соотношении 1:9 и инкубировали при 37 °С, 5% СО2 в течение 4-х часов (оценка экспрессии CD69) или 4-х часов (оценка экспрессии CD25, CD38) без стимулятора
