CC BY
19
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммуногенетика Immunogenetics
с электрофоретической детекцией в 3% агарозном геле. Информация о частотах встречаемости аллелей и генотипов по указанному полиморфизму в некоторых евразийских популяциях была получена из открытой базы данных ALFRED. Были использованы данные для 5 европейских популяций (тосканцы, иберийцы Испании, смешанная популяция европейцев Северо-Запада Европы, британцы, финны) и 6 азиатских популяций (китайцы хань из Пекина, китайцы дай, бенгальцы, пенджабцы, гуджаратцы, корейцы, вьетнамцы). Для определения положения татар среди популяций Евразии были использованы многомерные методы: кластерный анализ и анализ главных компонент.
Результаты. Частота встречаемости аллеля с заменой 745*T среди татар составила 28%, что в среднем в 1,5 раза ниже по сравнению с европейскими популяциями, но более чем в 10 раз превышает аналогичные значения для популяций Азии. Преобладающими генотипами у татар являются гомозиготы по аллелю 745*C и гетерозиготы (52 и 40% соответственно), гомозиготы по аллелю 745*T встречались редко (8%). Применение кластерного анализа позволило выделить 2 кластера популяций: азиатского и европейского происхождения. В последнюю группу вошла популяция татар. Согласно анализу главных компонент, формирование «европейского» кластера обусловлено увеличением доли аллеля с заменой 745*T и определяемых им генотипов (745*CT и 745*TT). Популяция татар располагается в «европейском» кластере рядом с популяциями тосканцев и иберийцев, на границе с «азиатским» кластером.
Заключение. Популяция татар Челябинской области по частотам встречаемости аллелей и генотипов, определяемых полиморфизмом 745C > T наиболее сходна с европейскими популяциями, особенно южного происхождения (тосканцы и иберийцы). В то же время среди европейских популяций татары занимают положение, близкое к южно-азиатским популяциям (гуджаратцы). Подобное положение татар связано со сложной историей формирования этой популяции, включавшей миграцию тюркских народов с Востока на территорию Европы, где происходило несколько раундов натурального отбора в ходе эпидемий инфекционных заболеваний, в результате чего доля аллеля 745*T и определяемого им генотипов в популяции увеличилась.
ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ПО ГЕНАМ КОМПЛЕКСА Н2 КЛАССА II НА СЕЛЕКЦИЮ И АКТИВАЦИЮ Т-ЛИМФОЦИТОВ CD4 В НОРМЕ И ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ
Логунова Н.Н., Капина М.А. Рубакова Э.И., Апт А.С.
ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия
Генетический контроль ответа хозяина на M. tuberculosis носит полигенный характер. Ранее в нашей лаборатории был идентифицирован один из генов контролирующих чувствительность к туберкулезной инфекции (ТБ) у мышей, классический ген Класса II H2-Ab1, кодирующий бета-цепь димера Н2-А. Молекулы Класса II критически важны для развития и дифференцировки T-клеток CD4+, причем как эффекторных, так и регу-ляторных. Эффективность иммунного ответа при ТБ во многом зависит от сбалансированности работы этих элементов ответа, поскольку избыточная супрессорная активность препятствует достижению необходимого уровня иммунологической защиты, а избыточная пролиферация и выработка цитокинов эффекторами повреждает ткани.
В данной работе мы исследовали роль полиморфизма по молекуле Н2-А в образовании и регуляции клеток Teff (CD4+FoxP3-) и Treg (CD4+FoxP3+) в норме и при ТБ, используя линии мышей В6 (Н2-АЬЕ0, устойчивая к ТБ), I/St (H2-AjEj, чувствительная к ТБ) и полученную нами рекомбинантную конгенную B6.I-9.3.19.8 (H2-AjE0, промежуточная чувствительность к ТБ), несущую сегмент комплекса Н2 17Ch: 34,18-34,34Mb от I/St на генетической основе В6. Изучение распределения Teff и Treg в периферических лимфоидных органах показало, что соотношение Teff:Treg зависит от линии мышей: доля Treg от всех клеток CD4+ у В6 составляет 14±0,3%; у I/St — 7,7±1,3% и у B6.I-9.3.19.8 - 19,4±0,2%. В отличие от В6, клетки Teff у I/St и B6.I-9.3.19.8 имеют активированный фенотип до заражения: в селезенке увеличен процент клеток, экспрессирующих активационный поверхностный антиген CD69: В6 = 5,5±1,0%, B6.I-9.3.19.8 = 7,3±1,4% и I/St 8,1±0,9%, а также CD44+CD62L-: 26,5±1,8; 38,1±4,0 и 33,3±3,1 соответственно. Более высокий уровень активации характерен и для Treg, среди которых не только процент клеток CD44+CD62L- выше у мышей I/St и B6.I-9.3.19.8, но и сам уровень экспрессии CD44 выше (средняя интенсивность свечения, MFI: В6 = 215±17, B6.I-9.3.19.8 = 305,3±18 и I/St = 311,3±11). Аналогичные показатели в норме обнаружены в легких, где получены следующие показатели по маркеру CTLA-4: MFI для Teff B6 = 9,2±0,8, B6.I-9.3.19.8 = 15,3±4,0 и I/St = 12,6±1,3 и для Treg, соответственно, 47,5±12,2; 73,7±16,5 и 107±4,4. Заражение ТБ приводило к более тяжелому течению заболевания у чувствительных линий, несмотря на то что активация Teff и Treg была выражена у них значительно сильнее, чем у В6. При этом, несмотря на диффе-ренцировку большого количества клеток CD4+ в хелперы Th1 во всех линиях мышей, количество клеток, продуцирующих IFNy в ответ на антигены микобактерий, было достоверно ниже у мышей I/St (3,7±1,0) и B6.I-9.3.19.8 (3,9±1,2) по сравнению с В6 (5,9±1,0). Более того, «удельная активность» продукции IFNy была выше у клеток В6 (MFI = 77,9±4,9 против 53,9±4,5 и 59,6±1,3).
Наши данные свидетельствуют, что аллельный вариант H2-Aj при селекции или дифференцировке приводит к недостаточности Treg звена иммунитета у чувствительных линий мышей, что выражается чрезмерной неспецифической активацией CD4 Teff клеток и препятствует образованию протективного адаптивного иммунитета при ТБ.
ВЫЯВЛЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ЦЕЛИАКИИ ПРИ РАЗНЫХ ГЕНОТИПАХ
Малкова А.М., Будкова А.И.
ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Целиакия — хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся поражением эпителия тонкой кишки в результате иммунного ответа организма на дезаминированный глиадин. Согласно рекомендациям ESPGHAN 2012 диагноз целиакия подтверждается с помощью серологической диагностики специфичных антител, гистологического исследования тонкой кишки, выявления HLA DQ2/DQ8 генотипов.
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Цель. Определить достоверность встречаемости серологических маркеров целиакии при разных генотипах.
Материалы и методы. В качестве материала для исследования использовались образцы венозной крови 105 обследуемых лиц. Антитела к человеческой тканевой трансглутаминазе 2 типа и дезаминированному пептиду глиадину IgG определялись методом ИФА, антитела к эн-домизию IgA методом нРИФ.
Для определения генотипа HLA DQ2/DQ8 обследуемых применялся метод ПЦР real time.
Результаты. Из 105 обследуемых у 56% (59/105) были выявлены специфичные для целиакии HLA-DQ генотипы. Среди них преобладают аллельные формы HLA-DQ2.5; HLA-DQ2.2 - 25% (13/59). Частота генотипа HLA-DQ2.5, как и HLA-DQ8 составила 23,1% (12/59), HLA-DQ8;HLA-DQ2.2 9,6% (5/59). Повышенные титры специфичных антител чаще всего наблюдаются при генотипе HLA-DQ2.5 - 25% (3/12).
Достоверно встречаемость повышенных титров специфичных антител выше у лиц с положительным генотипом.
Заключение. Исследование показало, что наиболее часто встречаемыми генотипами среди обследуемых являются аллельные формы HLA-DQ2.5; HLA-DQ2.2, HLA-DQ8 и HLA-DQ2.5. При этом у лиц с генотипом HLA-DQ2.5 серологические маркеры целиакии выявляются чаще всего.
Поскольку была выявлена статистически значимая разница при анализе результатов серологической диагностики на антитела к тканевой трансглютаминазе, эндоми-зию и генотипированию, можно говорить об оправданности использования тестов на выявление повышенных титров именно этих антител для диагностики целиакии.
ЭТНИЧЕСКИ АССОЦИИРОВАННЫЕ ФАКТОРЫ РИСКА ВЫСОКОГО УРОВНЯ МЛАДЕНЧЕСКОЙ СМЕРТНОСТИ У ДЕТЕЙ КОРЕННОГО НАСЕЛЕНИЯ КРАЙНЕГО СЕВЕРА: ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ (MBL2, FCN2) К ИНФЕКЦИОННЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ
Смольникова М.В., Епанешникова В.Б., Терещенко С.Ю.
Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера ФИЦКНЦ СО РАН, Красноярск, Россия
Младенческая смертность детей коренного населения северных регионов остается крайне высокой, несмотря на значительные положительные изменения в организации медицинской помощи и финансовые вложения. Такая ситуация характерна не только для России, но и для других стран арктического присутствия. В последние годы показаны генетически обусловленные особенности метаболизма и иммунного реагирования у детей коренного населения северных территорий, которые могут способствовать тяжелому течению распространенных инфекционных заболеваний, с повышенным риском летального исхода.
Маннозосвязывающий лектин - острофазовый белок, относящийся к системе врожденного иммунитета и активно участвующий в элиминации широкого круга патогенных микроорганизмов посредством активации системы комплемента. Значительная часть человеческой популяции имеет врожденно низкий уровень продукции и/или низкую функциональную активность MBL вслед-
ствие носительства различных вариантов гена MBL2, что потенциально увеличивает предрасположенность к более тяжелому течению инфекционных заболеваний. Фико-лины — лектин-распознающие молекулы, структурно и функционально гомологичные MBL.
Цель. Выявить генотипы MBL2 и FCN2, предрасполагающие к тяжелому течению бактериальных инфекций в различных этнических популяциях новорожденных коренных национальностей Таймырского Долгано-Ненецкого района Красноярского края.
Материалы и методы. Использованы 586 проб сухой капли крови новорожденных Таймырского Долгано-Ненецкого района Красноярского края и г. Красноярска из банка КГУЗ «Красноярский краевой консультативно-диагностический центр медицинской генетики». Этнический состав групп: 1) 126 новорожденных с преимущественно ненецким населением; 2) 90 детей с преимущественным долгано-нганасанским населением; 3) 167 новорожденных из арктических поселков; 4) 203 новорожденных г. Красноярска, преимущественно европеоиды.
Для выделения ДНК использован набор DIAtomTM DNA Prep («Центр молекулярной генетики», Москва). Генотипирование аллельных вариантов генов MBL2 (rs11800451 и rs1800450) и FCN2 (rs17549193 и rs7851696) осуществлено с помощью ПДРФ-анализа с дальнейшей визуализацией в у/ф свете.
Результаты. Редкий аллель гена MBL2 (rs1800451) выявлен только у одного новорожденного в популяции г. Красноярска (генотип СС), во всех остальных образцах ДНК был установлен генотип АА. Крайне редкая встречаемость аллеля С (1 гомозигота на 582 обследованных, частота 0,0034) описана впервые для различных Российских популяций: коренных жителей арктических регионов и европеоидов.
В обеих популяциях коренных жителей Арктики статистически значимо реже, чем в европеоидной популяции г. Красноярска, встречался вариантный аллель B (rs1800450), ассоциированный с дефектной структурой протеина MBL2. Частота гомозиготного генотипа ВВ у новорожденных ненцев составила 1,6% (OR = 0,13, CI = 0,03-0,58, p = 0,002 в сравнении с европеоидами), долган-нганосан - 1,1% (OR = 0,09, CI = 0,01-0,69, p = 0,004 в сравнении с европеоидами), смешанной арктической популяции — 6,1%, а у европеоидов г. Красноярска — 10,9%. Те. популяции арктических регионов России (ненцы и долгане-нганосане) обладают генотипом, ассоциированным с высоким уровнем активности MBL2 — важнейшего фактора неспецифической проти-воинфекционной защиты.
Описано, что для мутации rs17549193 гена FCN2 наличие вариантного аллеля Т (генотипы СТ и ТТ) сопряжено с низкой авидностью фиколина к патогенам. Нами установлено, что в популяциях арктических регионов значительно реже встречается вариантный аллель Т в гетерозиготном состоянии (генотип СТ). В популяции ненцев значительно реже встречается «неблагоприятный» аллель Т в гомозиготном состоянии. Эта тенденция верна как при сравнении ненцев с долгано-нганасанами (OR = 0,23, CI = 0,05-1,2, p = 0,05), так и с европеоидами г. Красноярска (OR = 0,16, CI = 0,04-0,07, p = 0,005). Частота аллеля Т в ненецкой популяции была статистически значимо ниже в сравнении с долгано-нганасанской и европеоидной популяциями. Мы предполагаем, что такой генотип, характерный для ненецкой
