CC BY
22
«Дни иммунологии в СПб 2017» Медицинская Иммунология
Immunology Days in St. Petersburg 2017 Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ИММУНОГЕНЕТИКА
ЗНАЧИМОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОВ СИСТЕМЫ HLA ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА
Гусева В.И.1, Лапин С.В.1, Мазинг А.В.1, Маслянский А.Л.2, Мячикова В.Ю.2
1ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет
им. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ,
Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБУ«ФГБУ «Северо-Западный федеральный
медицинский исследовательский центр
им. В.А. Алмазова»» Министерства здравоохранения
РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Предрасположенность к ревматоидному артриту (РА) определяется наличием ряда аллельных генов в локусе HLA-DRB1, при экспрессии которых образуются белки на мембране клеток иммунной системы, содержащие «общий эпитоп» (Shared Epitope [SE]). SE является последовательностью аминокислот QRRAA, находящейся в позиции 70-74 в третьей гипервариабельной области цепи DRß. Из-за повышенного сродства белков с SE к ци-труллиновым антигенам повышается риск развития серо-позитивного РА у лиц с генотипом, содержащим аллели HLA-DRB1 *01:01; *04:01; *04:04; *04:05; *04:08.
Цель и задачи. Проанализировать распределение генов системы HLA II класса локуса DRB1 с SE у больных РА с разными клиническими проявлениями. Сравнить встречаемость этих генов в популяции жителей Санкт-Петербурга и Северо-Западного района РФ. Оценить прогностическую роль SE для диагностики РА.
Материалы и методы. Генетические исследования выполняли для двух групп, одна из которых состояла из 72 пациентов, а другая — 1070 человек из контрольной группы. Выявление генов осуществляли с помощью ПЦР в режиме реального времени. ДНК каждого пациента экстрагировали из цельной крови, предварительно забранной в пробирку с ЭДТА.
Результаты. В популяции Северо-Запада России распределение SE-содержащего генотипа составило около 30%. Среди больных РА SE был обнаружен у 67% (48/72), а среди тех, у кого выявили аллели HLA-DRB1*01 и *04, SE был обнаружен у 89,6% (43/48). При этом у 80,5% пациентов с РА были выявлены антитела к циклическому цитруллин-содержащему пептиду.
Заключение. Определение SE может использоваться в комплексной диагностике РА, в том числе для прогнозирования развития серопозитвного РА.
СРАВНЕНИЕ ПОПУЛЯЦИИ ТАТАР ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ С ЕВРАЗИЙСКИМИ ПОПУЛЯЦИЯМИ ПО ПОЛИМОРФИЗМУ 745C > T ГЕНА TLR6
Евдокимов А.В., Бурмистрова А.Л.
ФГБОУ ВО «Челябинский государственный университет», Челябинск, Россия
Введение. Толл-подобные рецепторы (toll-like receptors, TLRs) универсально распространены среди млекопитающих и отвечают за распознавание молекул микробного происхождения, общих для разных групп микроорганизмов. В результате этого распознавания инициируются механизмы врожденного иммунного ответа. Полногеномные исследования выявили большое количество точковых полиморфизмов (single nucleotide polymorphisms, SNPs), расположенных в области генов TLRs. Некоторые из этих SNPs демонстрировали значимые отличия по частоте встречаемости в различных человеческих популяциях. К таким SNPs относится точковая замена 745C > T в гене TLR6: аллель с заменой (745*T) с более высокой частотой (около 50%) встречается в европейских популяциях, в то время как в азиатских популяциях практически не встречается. Функциональные исследования этого полиморфизма выявили связь между аллелем 745*T и снижением уровня активации TLR6. Высокую частоту этого аллеля в европеоидных популяциях связывают с адаптивными преимуществами в условиях частых эпидемий в Европе. Уральский регион представляет собой интересную территорию для популяционно-генети-ческих исследований: это перекресток миграционных путей из Азии и Европы. На этой территории проживают популяции самого различного происхождения, одной из самых многочисленных являются татары.
Цель. Сравнить популяцию татар Челябинской области по частоте встречаемости аллелей и генотипов по точковому полиморфизму 745C > T гена толл-подобного рецептора 6 (TLR6) с популяциями Евразии. Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:
1. Выполнить генотипирование исследуемой группы татар Челябинской области по SNP 745C > T гена TLR6.
2. С помощью многомерных методов определить положение татар среди некоторых евразийских популяций по аллелям и генотипам 745C > T гена TLR6.
Материалы и методы. Исследуемая группа татар (124 человека) отобрана из числа потенциальных доноров стволовой клетки, проживающих на территории Челябинской области. Этническая принадлежность определялась на основании генеалогического анамнеза в трех поколениях. Геномная ДНК выделена из венозной крови реагентами Axygen (Quiagen, Германия), с полученными образцами ДНК проведена полимеразная цепная реакция с использованием набора реагентов фирмы НПФ «Литех» (Москва)
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммуногенетика Immunogenetics
с электрофоретической детекцией в 3% агарозном геле. Информация о частотах встречаемости аллелей и генотипов по указанному полиморфизму в некоторых евразийских популяциях была получена из открытой базы данных ALFRED. Были использованы данные для 5 европейских популяций (тосканцы, иберийцы Испании, смешанная популяция европейцев Северо-Запада Европы, британцы, финны) и 6 азиатских популяций (китайцы хань из Пекина, китайцы дай, бенгальцы, пенджабцы, гуджаратцы, корейцы, вьетнамцы). Для определения положения татар среди популяций Евразии были использованы многомерные методы: кластерный анализ и анализ главных компонент.
Результаты. Частота встречаемости аллеля с заменой 745*T среди татар составила 28%, что в среднем в 1,5 раза ниже по сравнению с европейскими популяциями, но более чем в 10 раз превышает аналогичные значения для популяций Азии. Преобладающими генотипами у татар являются гомозиготы по аллелю 745*C и гетерозиготы (52 и 40% соответственно), гомозиготы по аллелю 745*T встречались редко (8%). Применение кластерного анализа позволило выделить 2 кластера популяций: азиатского и европейского происхождения. В последнюю группу вошла популяция татар. Согласно анализу главных компонент, формирование «европейского» кластера обусловлено увеличением доли аллеля с заменой 745*T и определяемых им генотипов (745*CT и 745*TT). Популяция татар располагается в «европейском» кластере рядом с популяциями тосканцев и иберийцев, на границе с «азиатским» кластером.
Заключение. Популяция татар Челябинской области по частотам встречаемости аллелей и генотипов, определяемых полиморфизмом 745C > T наиболее сходна с европейскими популяциями, особенно южного происхождения (тосканцы и иберийцы). В то же время среди европейских популяций татары занимают положение, близкое к южно-азиатским популяциям (гуджаратцы). Подобное положение татар связано со сложной историей формирования этой популяции, включавшей миграцию тюркских народов с Востока на территорию Европы, где происходило несколько раундов натурального отбора в ходе эпидемий инфекционных заболеваний, в результате чего доля аллеля 745*T и определяемого им генотипов в популяции увеличилась.
ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ПО ГЕНАМ КОМПЛЕКСА Н2 КЛАССА II НА СЕЛЕКЦИЮ И АКТИВАЦИЮ Т-ЛИМФОЦИТОВ CD4 В НОРМЕ И ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ
Логунова Н.Н., Капина М.А. Рубакова Э.И., Апт А.С.
ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия
Генетический контроль ответа хозяина на M. tuberculosis носит полигенный характер. Ранее в нашей лаборатории был идентифицирован один из генов контролирующих чувствительность к туберкулезной инфекции (ТБ) у мышей, классический ген Класса II H2-Ab1, кодирующий бета-цепь димера Н2-А. Молекулы Класса II критически важны для развития и дифференцировки T-клеток CD4+, причем как эффекторных, так и регу-ляторных. Эффективность иммунного ответа при ТБ во многом зависит от сбалансированности работы этих элементов ответа, поскольку избыточная супрессорная активность препятствует достижению необходимого уровня иммунологической защиты, а избыточная пролиферация и выработка цитокинов эффекторами повреждает ткани.
В данной работе мы исследовали роль полиморфизма по молекуле Н2-А в образовании и регуляции клеток Teff (CD4+FoxP3-) и Treg (CD4+FoxP3+) в норме и при ТБ, используя линии мышей В6 (Н2-АЬЕ0, устойчивая к ТБ), I/St (H2-AjEj, чувствительная к ТБ) и полученную нами рекомбинантную конгенную B6.I-9.3.19.8 (H2-AjE0, промежуточная чувствительность к ТБ), несущую сегмент комплекса Н2 17Ch: 34,18-34,34Mb от I/St на генетической основе В6. Изучение распределения Teff и Treg в периферических лимфоидных органах показало, что соотношение Teff:Treg зависит от линии мышей: доля Treg от всех клеток CD4+ у В6 составляет 14±0,3%; у I/St — 7,7±1,3% и у B6.I-9.3.19.8 - 19,4±0,2%. В отличие от В6, клетки Teff у I/St и B6.I-9.3.19.8 имеют активированный фенотип до заражения: в селезенке увеличен процент клеток, экспрессирующих активационный поверхностный антиген CD69: В6 = 5,5±1,0%, B6.I-9.3.19.8 = 7,3±1,4% и I/St 8,1±0,9%, а также CD44+CD62L-: 26,5±1,8; 38,1±4,0 и 33,3±3,1 соответственно. Более высокий уровень активации характерен и для Treg, среди которых не только процент клеток CD44+CD62L- выше у мышей I/St и B6.I-9.3.19.8, но и сам уровень экспрессии CD44 выше (средняя интенсивность свечения, MFI: В6 = 215±17, B6.I-9.3.19.8 = 305,3±18 и I/St = 311,3±11). Аналогичные показатели в норме обнаружены в легких, где получены следующие показатели по маркеру CTLA-4: MFI для Teff B6 = 9,2±0,8, B6.I-9.3.19.8 = 15,3±4,0 и I/St = 12,6±1,3 и для Treg, соответственно, 47,5±12,2; 73,7±16,5 и 107±4,4. Заражение ТБ приводило к более тяжелому течению заболевания у чувствительных линий, несмотря на то что активация Teff и Treg была выражена у них значительно сильнее, чем у В6. При этом, несмотря на диффе-ренцировку большого количества клеток CD4+ в хелперы Th1 во всех линиях мышей, количество клеток, продуцирующих IFNy в ответ на антигены микобактерий, было достоверно ниже у мышей I/St (3,7±1,0) и B6.I-9.3.19.8 (3,9±1,2) по сравнению с В6 (5,9±1,0). Более того, «удельная активность» продукции IFNy была выше у клеток В6 (MFI = 77,9±4,9 против 53,9±4,5 и 59,6±1,3).
Наши данные свидетельствуют, что аллельный вариант H2-Aj при селекции или дифференцировке приводит к недостаточности Treg звена иммунитета у чувствительных линий мышей, что выражается чрезмерной неспецифической активацией CD4 Teff клеток и препятствует образованию протективного адаптивного иммунитета при ТБ.
ВЫЯВЛЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ЦЕЛИАКИИ ПРИ РАЗНЫХ ГЕНОТИПАХ
Малкова А.М., Будкова А.И.
ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Целиакия — хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся поражением эпителия тонкой кишки в результате иммунного ответа организма на дезаминированный глиадин. Согласно рекомендациям ESPGHAN 2012 диагноз целиакия подтверждается с помощью серологической диагностики специфичных антител, гистологического исследования тонкой кишки, выявления HLA DQ2/DQ8 генотипов.
