CC BY
27
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
реакции и восстановления регуляторных Т-клеток, а также нарушения в гуморальном звене иммунитета. Для более полной характеристики особенностей иммунопатогенеза саркоидоза необходимо тщательное изучение механизмов и межклеточных взаимодействий. Анализ состава Ти В-лимфоцитов в периферической крови был выполнен у больных саркоидозом (п = 40) и у условно здоровых добровольцев (п = 47), подбор группы сравнения осуществлялся с учетом возрастного и полового состава больных саркоидозом. Исследования выполнены с помощью метода многоцветной проточной цитометрии. Относительное содержание Т-хелперов (ТЪ) в периферической крови достоверно не различалось между группами, однако абсолютное содержание ТЪ у больных было снижено (р < 0,001) до 605 (483; 757) кл/мкл по сравнению с группой контроля 757 (670; 923) кл/мкл. Анализ уровня дифференцировки ТЪ выявил снижение как относительного, так и абсолютного числа клеток памяти с фенотипами CD27+CD28+CD45RA-CD62L+ (с 40,04% (35,44; 47,36) до 28,81% (25,58; 35,16) и с 299 (257; 377) до 181 (128; 245) кл/мкл (р < 0,001) и клеток памяти с фенотипами CD27+CD28+CD45RA-CD62L-(с 15,97% (12,22; 20,11) до 11,18% (8,70; 15,16) и с 119 (99; 165) до 62 (49; 101) кл/мкл (р < 0,001). Относительное и абсолютное число «наивных» ТЪ было сопоставимо у больных саркоидозом и в группе сравнения, в то время как число зрелых эффекторных CD27-CD28- ТЪ у больных саркоидозом было достоверно выше (р = 0,001). Известно, что именно эти субпопуляции (клетки памяти CD27+CD28+CD45RA-CD62L+ и CD27+CD28+CD45RA-CD62L-) «патрулируют» периферические лимфоидные органы и способны мигрировать в воспаленные ткани соответственно. Таким образом, на фоне общей анергии Т-звена иммунного ответа на периферии, при более детальном анализе субпопуляций Т-лимфоцитов у больных саркоидозом выявлено существенное повышение числа Т-клеток-эффекторов, мигрирующих в очаги воспаления. При изучении регуляции гуморального ответа установлено снижение относительного числе «циркулирующих» фолликулярных ТЪ (Т£Ъ) с фенотипом CD45RA-CXCR5+ с 18,29% (14,48; 21,37) до 14,07% (10,32; 16,22) (р < 0,001) у больных саркоидозом. Существенные изменения выявлены и в субпопуляционном составе Т£Ъ у больных отмечено снижение СХСЯ5+СХСК3+ ТЫ с 3,63% (2,43; 5,12) до 2,10% (1,42; 2,53) (р < 0,001) и СХСЯ5+ССЯ6+ ТШ7 с 3,63% (2,43; 5,12) до 1,31% (0,85; 1,65) (р = 0,001), при повышенном числе CXCR5+CCR4+ Т&2 (р = 0,001). Изменение «баланса» между субпопуляциями «циркулирующих» фолликулярных Т1Ъ (ТШ — с одной стороны и Т1Ъ2 и Т&17 — с другой) рассматривается в качестве важнейшего признака нарушения гуморального ответа, так как Т1Ъ2 и Т&17 играют ведущую роль в регуляции механизмов переключения классов синтезируемых иммуноглобулинов. При анализе общего числа В-лимфоцитов не было выявлено достоверных различий у больных сарко-идозом (12,41%, 8,25; 16,42) — и в группе здоровых — 13,78% (9,71; 15,48) (р = 0,675). Однако более углубленный анализ В-лимфоцитов с учетом стадий их дифференцировки по интенсивности ко-экспрессии CD27 и IgD молекул показал, что 77,31% В-лимфоцитов периферической крови больных саркоидозом (66,79; 81,35) обладали «наивным» фенотипом IgD+CD27-, в группе контроля — 60,91% (54,15; 72,42) (р < 0,001). При этом у больных саркоидозом снижено число В-клеток памяти с фенотипом IgD+CD27+ (7,56% [5,07; 10,34] и 12,95% [9,37; 19,69] [р < 0,001]) и IgD-CD27+ (10,34% [7,06; 14,73] и 16,50% [13,00; 21,91] [р < 0,001]).Уста-новлена достоверная корреляционная связь между числом
Tfh17 и уровнем зрелых В-клеток памяти, в геноме которых произошло переключение с IgM на другие классы иммуноглобулинов (г = 0,502 при р < 0,001). Таким образом, при анализе субпопуляционного состава Т- и В-лимфоцитов в периферической крови больных саркоидозом выявлены новые закономерности регуляции субпопуляций Ти В-лимфоцитов, как на уровне эффекторных клеток, так и на уровне клеток иммунологической памяти.
ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ МИШЕНИ ПУЛЬС-ТЕРАПИИ ГЛЮКОКОРТИКОИДАМИ У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМИ АРТРИТОМ
Курочкина Ю.Д., Тихонова М.А., Тыринова Т.В., Олейник Е.А., Сизиков А.Э., Чумасова О.А., Коненкова Л.П., Сулутьян А.Э., Останин А.А.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
Введение. Дендритные клетки (ДК) играют важную роль в патогенезе ревматоидного артрита (РА), обладая способностью презентировать хрящевые гликопротеины, продуцировать провоспалительные цитокины и активировать Т-клетки к продукции Th1- и ТЫ7-цитокинов. Наряду со стимулирующей активностью, ДК могут оказывать толерогенный эффект посредством индукции апоптоза/анергии Т-лимфоцитов и генерации регуляторных Т-клеток. Поскольку такие ДК являются негативными регуляторами аутореактивных Т-лимфоцитов, усиление толерогенного потенциала ДК рассматривается в качестве новой стратегии лечения РА. Ранее нами показано, что дексаметазон in vitro ингибирует созревание, продукцию провоспалительных цитокинов и аллости-муляторную активность ДК больных РА, генерируемых из моноцитов в присутствии GM-CSF и интерферона-а (IFN-ДК). Однако влияют ли глюкокортикоиды на способность INF-ДК больных активировать аутологичные Т-клетки и воспроизводится ли данный эффект in vivo на фоне пульс-терапии глюкокортикоидами, остается неисследованным.
Цель и задачи. Изучить влияния дексаметазона на способность ДК больных РА стимулировать пролиферацию аутологичных Т-клеток in vitro и оценить аутости-муляторную активность INF-ДК в динамике до и после пульс-терапии глюкокортикоидами ex vivo.
Материалы и методы. В исследование было включено 10 пациентов с РА с высокой и умеренной активностью заболевания (DAS 28 > 3,1). Генерацию ДК и оценку их свойств проводили до проведения пульс-терапии метил-преднизолоном 500 мг № 3 и после пульс-терапии. ДК генерировали путем культивирования моноцитов в течение 5 суток с GM-CSF и IFNa в отсутствие и присутствии декасаметазона, вносимого на 3 сутки. LPS в качестве дозревающего стимула вносили на 4 сутки. Функцию ДК оценивали по способности стимулировать пролиферацию аллогенных (алло-СКЛ) и аутологичных (ауто-СКЛ) мононуклеарных клеток (МНК).
Результаты. Генерированные в присутствии дексаме-тазона ДК больных обладали меньшей стимуляторной активностью как в алло-СКЛ (p = 0,01), так и в ауто-СКЛ (p = 0,05). Ингибирующий эффект дексаметазона на стимуляторную активность в алло-СКЛ составлял 49% (LQ-UQ 38-55%), в ауто-СКЛ - 57% (LQ-UQ 38-55 %). Сравнение стимуляторной активности ДК до и после
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
пульс-терапии метилпреднизолоном выявило снижение аллостимуляторной активности с 21037 (18614-21345) до 11531 (9494-20052) имп/мин, которое при индивидуальном анализе регистрировалось у 8 из 10 больных. В то же время снижение стимуляторной активности ДК в ауто-СКЛ после терапии регистрировалось только у 6 из 10 пациентов, тогда как в 4 случаях данный показатель возрастал (n = 3) или не менялся (n = 1). Соответственно, достоверного снижения ответа в ауто-СКЛ после пульс-терапии в целом по группе не наблюдалось (Ме 10126 против 12247 имп/мин). Сравнение пациентов, ответивших (группа 1) и не ответивших (группа 2) на терапию снижением стимуляторной активности ДК в ауто-СКЛ, не выявило различий в исходной активности заболевания и чувствительности к действию дексаметазона in vitro. При этом терапия у пациентов группы 1 сопровождалась более интенсивным снижением СОЭ, чем у пациентов группы 2 (35 против 23%).
Заключение. ДК больных РА сохраняют чувствительность к толерогенному действию дексаметазона, который подавляет способность ДК стимулировать пролиферацию не только аллогенных, но и аутологичных Т-лимфоцитов. Несмотря на подавление in vitro аллостимуляторной активности ДК у всех пациентов, ингибирующий эффект пульс-терапии метилпреднизолоном in vivo регистрируется только у 60% больных РА. Дальнейшие исследования стимуляторной активности ДК могут представлять интерес в качестве поиска предикторов эффективности терапии при РА.
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ, КОДИРУЮЩИХ CD38, ICAM-1, Fas И IL-2ra, В КЛЕТКАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ
Кхедри Ф.1, Курников Г.Ю.2, Фомина С.Г.1, Новиков В.В.1
1 Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия
2 Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород, Россия
Введение. Псориаз является хроническим воспалительным заболеванием кожи, характеризующимся высоким уровнем пролиферации кератиноцитов, а также инфильтрацией в дермис клеток как врожденного, так и адаптивного иммунного ответа. Передача сигналов в клетки иммунной системы осуществляется многими поверхностными рецепторами. Среди них мембранные молекулы CD38, ICAM-1, Fas и IL-2ra, участвующие в межклеточных взаимодействиях, активации клеток и инициации апоптоза. Характер экспрессии этих генов, определяемый по уровню их мРНК, может быть информативным показателем состояния иммунитета и течения иммуно-опосредованных заболеваний, в том числе псориаза.
Цель. Определение уровня мРНК CD38, ICAM-1, Fas и IL-2ra в цельной периферической крови больных псориазом.
Материалы и методы. Исследовали 80 образцов периферической крови больных псориазом, проходивших лечение в Нижегородской городской больнице № 13, а также 50 образцов периферической крови здоровых доноров, полученных из Нижегородского областного центра переливания крови. Выделение нуклеиновых кислот проводили методом фенол-хлороформной экстракции. Определение уровней мРНК осуществляли методом ОТ-ПЦР
в режиме реального времени. Относительные уровни исследуемых мРНК оценивали методом сравнения пороговых циклов (AACt). Больные по степени тяжести заболевания (PASI) были разделены на две группы: «от 10 до 30» и «от 30 и до 72». Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерной программы Statis-tica 10.0. Различия считали значимыми при p < 0.05.
Результаты. Полученные результаты показали статистически значимое увеличение уровня мРНК молекул IL-2ra в периферической крови больных псориазом как у первой группы (PASI от 10 до 30), так и у второй (PASI от 30 и до 72) в 9 и 12 раз, соответственно, по сравнению с донорами. Уровень мРНК молекул Fas в крови больных псориазом также был статистически значимо выше, чем в норме. У больных первой группы (PASI от 10 до 30) он повышался в 1,8 раза, а у больных второй группы — в 1,6 раза (PASI от 30 и до 72). В то же время уровень мРНК молекул адгезии CD38 и ICAM-1 у больных псориазом в обеих группах оставался в пределах нормы. Обращала на себя внимание лишь тенденция к увеличению уровня мРНК CD38 молекул у больных первой группы (PASI от 10 до 30).
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о повышении экспрессии генов, кодирующих a-цепь рецептора интерлейкина-2 и молекулы Fas (CD95) в суммарной фракции клеток крови. Обе молекулы являются маркерами активации клеток иммунной системы, при этом последняя участвует в инициации апоптоза по Fas-зависимому пути. Наиболее выраженное повышение уровня экспрессии обнаруживалось для гена IL-2ra.
ЗНАЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ TLRs И ПОЛИМОРФИЗМА ИХ ГЕНОВ В РАЗВИТИИ СОСУДИСТЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ
Левкович М.А., Галкина Г.А., Крукиер И.И., Воропай А.А., Григорянц А.А.
ФГБУ«Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Министерства здравоохранения РФ, Ростов-на-Дону, Россия
Сахарный диабет является важной медико-социальной проблемой современной медицины, что обусловлено увеличением его распространенности и тяжестью течения. В последние годы активно обсуждается роль иммунных механизмов, в частности, хронического воспаления, в развитии, как сахарного диабета, так и его сосудистых осложнений. Медиаторами воспалительного ответа, играющего важную роль в формировании микроангио-патии являются молекулы врожденного иммунитета — TLRs. Триггером активации TLRs при гипергликемии могут являться насыщенные жирные кислоты.
В этой связи целью исследования явилось определение роли экспрессии TLR-2, TLR-4 и полиморфизма их генов в формировании микроангиопатии при сахарном диабете (СД1) у подростков.
В исследование был включены 66 подростков в возрасте от 14 до 18 лет, с декомпенсацией СД1 и дислипидемией, которые были подразделены на 2 группы в зависимости от наличия или отсутствия микроангиопатий. В I группу вошли 38 пациентов с различными микроангиопатиями, во II группу — 28 пациентов без признаков микроциркулятор-ных нарушений. Группу контроля сформировали 18 «условно здоровых» подростков. Определение экспрессии TLR-2 (CD14+CD282+) и TLR-4 (CD14+CD284+) рецепторов на
