Выявление серологических маркеров целиакии при разных генотипах Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases

моноцитах периферической крови проводилось методом двухцветной проточной цитофлуориметрии с использованием диагностических наборов HyCultbiotechnology (Нидерланды). Для удаления эритроцитов пробоподго-товку проводили с использованием лизирующего раствора OptiLiseC фирмы Immunotex (Франция). Результаты учитывали на проточном цитофлюориметре BECKMAN COULTER EPICS XL-II (США), используя стандартные протоколы. Определение аллельных вариантов генов проводили методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом тест-системами ГосНИИгенетика (Москва). Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.

Было установлено, что у пациентов I и II групп по сравнению с контрольной группой отмечались выраженные изменения показателей врожденного иммунитета в виде статистически значимого повышения экспрессии CD14+CD282+ на моноцитах (72,4±8,1% и 60,8±4,4% против 30,7±10,8% соответственно, р < 0,05). При анализе частоты полиморфизма генов TLR-2 обнаружено, что в I группе по сравнению с контрольной и II группой частота генотипа Arg/Arg встречалась достоверно чаще (68,7% против 25,6 и 24,5% соответственно, р < 0,05), следовательно, у носителей аллеля Arg гена TLR-2 риск развития микроангиопатии при сахарном диабете выше, а генотип Arg753Gly, вероятно, имеет протективный эффект.

Таким образом, увеличение экспрессии TLR-2, наличие полиморфизма кодирующих генов, могут приводить к каскаду внутриклеточных сигнальных событий, с последующей стимуляцией транскрипции многих провос-палительных регуляторных субстанций, которые, в свою очередь, способствуют развитию диабетической микро-ангиопатии.

ВЫЯВЛЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ЦЕЛИАКИИ ПРИ РАЗНЫХ ГЕНОТИПАХ

Малкова А.М., Будкова А.И.

ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Целиакия — хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся поражением эпителия тонкой кишки в результате иммунного ответа организма на дезаминированный глиадин. Согласно рекомендациям ESPGHAN 2012 диагноз целиакия подтверждается с помощью серологической диагностики специфичных антител, гистологического исследования тонкой кишки, выявления HLA DQ2/ DQ8 генотипов.

Цель. Определить достоверность встречаемости серологических маркеров целиакии при разных генотипах.

Материалы и методы. В качестве материала для исследования использовались образцы венозной крови 105 обследуемых лиц. Антитела к человеческой тканевой трансглутаминазе 2 типа и дезаминированному пептиду глиадину IgG определялись методом ИФА, антитела к эн-домизию IgA методом нРИФ.

Для определения генотипа HLA DQ2/DQ8 обследуемых применялся метод ПЦР real time.

Результаты. Из 105 обследуемых у 56 % (59/105) были выявлены специфичные для целиакии HLA- DQ генотипы. Среди них преобладают аллельные формы HLA-DQ2.5; HLA-DQ2.2 - 25% (13/59). Частота генотипа HLA-DQ2.5, как и HLA-DQ8 составила 23,1% (12/59), HLA-DQ8;HLA-DQ2.2 9,6% (5/59). Повышенные титры специфичных антител чаще всего наблюдаются при генотипе HLA-DQ2.5 - 25% (3/12).

Достоверно встречаемость повышенных титров специфичных антител выше у лиц с положительным генотипом.

Заключение. Исследование показало, что наиболее часто встречаемыми генотипами среди обследуемых являются аллельные формы HLA-DQ2.5; HLA-DQ2.2 , HLA-DQ8 и HLA-DQ2.5. При этом у лиц с генотипом HLA-DQ2.5 серологические маркеры целиакии выявляются чаще всего.

Поскольку была выявлена статистически значимая разница при анализе результатов серологической диагностики на антитела к тканевой трансглютаминазе, эндомизию и генотипирования, можно говорить об оправданности использования тестов на выявление повышенных титров именно этих антител для диагностики целиакии.

ЭКСПРЕССИЯ АКТИВАЦИОННЫХ МАРКЕРОВ Т-ХЕЛПЕРАМИ И ЦИТОТОКСИЧЕСКИМИ Т-КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ДЕТЕЙ С АУТОИММУННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ПРИ СТИМУЛЯЦИИ МИТОГЕНОМ IN VITRO

Пашнина И.А.

Областная детская клиническая больница № 1, Екатеринбург, Россия

Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург, Россия

Исследование экспрессии маркеров активации лимфоцитов широко используется для оценки функционального состояния этих клеток. При этом стимуляция митогенами in vitro позволяет исследовать общую реактивность той или иной клеточной популяции. Наиболее удобными объектами исследования при стимуляции являются рецепторы лимфоцитов, экспрессия которых увеличивается за короткий промежуток времени, в частности CD25, CD38, CD69. Увеличение экспрессии этих молекул можно зафиксировать с помощью проточной цитометрии уже через 4-24 часа после индукции. Целью настоящей работы явилось исследование спонтанной и стимулированной экспрессии CD25, CD38, CD69 у детей с аутоиммунными (ревматическими) заболеваниями соединительной ткани.

Обследованы дети 6-17 лет с ревматическими заболеваниями в стадии активности: ювенильным идиопа-тическим артритом (ЮИА, n = 75), ювенильной склеродермией (ЮСД, n = 16), системной красной волчанкой (СКВ, n = 15), а также условно здоровые дети (контроль, n = 32). Образцы цельной периферической крови разводили глутаминсодержащей средой RPMI-1640 (Пан-Эко, Россия) в соотношении 1:9 и инкубировали при 37 °С, 5% СО2 в течение 4-х часов (оценка экспрессии CD69) или 4-х часов (оценка экспрессии CD25, CD38) без стимулятора