CC BY
7
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 4, 2021
Рыболовлева Т.Н., Трегубова Е.В., Сухорукова Э.Е., Минаева Н.В., Стрига Е.Г.
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров
ПРОБЛЕМА ДИАГНОСТИКИ ГРИБОВ РОДА CANDIDA У ОНКОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ
БОЛЬНЫХ
Введение. В последние годы у онкогематологиче-ских больных существенно возросло количество инфекций, вызванных грибами. Причиной является наличие у них иммунной недостаточности вследствие основного заболевания, применения иммуносупрес-сивных и антибактериальных препаратов. Возбудители нозокомиальных грибковых инфекций в большинстве случаях представляют собой дрожжеподобные грибы рода Candida (C. albicans, C. glabrata, C. kruzei и др.). Источник инфекции - ротовая полость (оро-фарингеальный кандидоз), куда они попадают алиментарным путем. Начальные симптомы инфекций, вызванных Candida, смазаны, и только по мере про-грессирования заболевания они начинают проявляться клинически. Таким образом, для своевременной диагностики данного осложнения и назначения оптимального лечения необходима точная лабораторная диагностика.
Цель работы. Сравнить диагностическую значимость определения грибов рода Candida у онкогемато-логических больных с использованием бактериологического и молекулярно-генетического методов.
Материалы и методы. В качестве материала для исследований использовали мазок из ротоглотки, образцы мокроты, бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) и ликвора. Выявление молекулярно-генетических маркеров грибов Candida проводили методом по-лимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизацио-но-флуоресцентной детекцией, используя набор реагентов «АмплиСенс C. albicans / C. glabrata / C. krusei -МУЛЬТИПРАЙМ-FL» (ООО «ИнтерЛабСервис», Россия). Для культивирования грибов использовали среды «OXOID» (Thermo Fisher Scientific, США). При бактериологическом исследовании применяли световую микроскопию (микроскоп Leica Dm 500, Германия) с окраской по Граму и флуоресцентную микроскопию (микроскоп "Микромед-3 ЛЮМ" (ООО "Наблюдательные приборы", г. Санкт-Петербург) с окраской каль-кофлуором белым, предназначенную для выявления элементов грибов.
Результаты. Диагностика инфекций, вызванных Candida spp., проведена у 91 пациента с онкогематоло-гическими заболеваниями (53 мужчины, 38 женщин). ДНК Candida была найдена у 19 (20,9 %) больных. При бактериологическом исследовании указанная инфекция выявлена у 14 (15,4 %) обследованных. Преобладающей в спектре возбудителей у онкогематологиче-ских больных являлась C. albicans. Реже - C. glabrata и C. krusei. Одновременное выявление возбудителей обоими лабораторными методами было в 8 (8,8 %) случаях. Обнаруженные отличия могут быть связаны с разной чувствительностью методов. Также может иметь значение и принцип используемых методов. При молеку-лярно-генетическом тестировании определяется ДНК патогена, и поэтому большое влияние на конечный результат оказывает качество экстракции нуклеиновых кислот из клинического материала. Бактериологический посев выявляет живые микроорганизмы, поэтому этот метод будет мало информативен при попадании в исследуемый биологический материал поврежденных клеток. Кроме того, эффективность определения грибов рода Candida может зависеть от вида используемого биоматериала. Так, например, в нашем исследовании при оценке БАЛ Candida spp. более эффективно выявлялись методом бактериологического посева.
Выводы. У онкогематологических больных установлена довольно высокая частота распространения инфекций, вызванных грибами Candida spp. При их диагностике метод ПЦР выявляет патоген несколько чаще, что может быть связано с большей чувствительностью метода и возможностью обнаружения ДНК инфекционного агента на ранних этапах развития инфекции. Бактериологические посевы могут быть предпочтительнее при исследовании БАЛ. Таким образом, молекулярно-генетический и бактериологический методы являются взаимодополняющими и должны использоваться совместно при диагностике грибковых инфекций.
Сарпова М.В., Ванеева Е.В., Дьяконов Д.А., Росин В.А., Самарина С.В.
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров
ВЗАИМОСВЯЗЬ ЭКСПРЕССИИ БЕЛКА Р53 С ВЫЖИВАЕМОСТЬЮ БОЛЬНЫХ ДИФФУЗНОЙ В-КЛЕТОЧНОЙ КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМОЙ
Введение. Диффузная В-клеточная крупноклеточная лимфома (ДВККЛ) является одним из наиболее распространенных вариантов лимфопролифератив-ных неоплазий. Заболевание отличается вариабельностью клинических и биологических характеристик. По-
скольку эффективность стандартной терапии R-CHOP отмечена примерно у 60% пациентов, а в 20%-30% случаев регистрируются ранние рецидивы или реф-рактерность к лечению, поиск новых прогностических маркеров для стратификации больных с ДВККЛ оста-
II научно-практическая конференция молодых ученых «Актуальные проблемы гематологии и трансфузиологии»
ется актуальным на сегодняшний день. Установлено, что важную роль в патогенезе, развитии резистентности к терапии и прогрессии многих типов лимфом, включая ДВККЛ, играет ген ТР53. Его продукт, белок р53, является ключевым опухолевым супрессором. Он участвует в контроле клеточного цикла, осуществляет репарацию ДНК и апоптоз В-клеток в стрессовых условиях. К нарушению структуры и функций этого транскрипционного фактора приводят различные механизмы, в том числе аберрации в хромосомном регионе 17р13, аномальное метилирование промотора р53, инактивация некоторых проапоптотических генов или гиперактивация антиапоптотических факторов. Литературные данные о прогностическом значении экспрессии белка р53 при ДВККЛ неоднозначны, что указывает на необходимость дальнейшего исследования.
Цель. Определить взаимосвязь иммуногистохими-ческой экспрессии белка р53 с общей и беспрогрессивной выживаемостью больных ДВККЛ.
Материалы и методы. В исследование включены 75 пациентов (медиана возраста - 58 лет) с впервые установленным диагнозом ДВККЛ, проходивших лечение в клинике ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в период с 2012 по 2019 гг. Все больные получали первую линию терапии по схеме R-CHOP. Подсчет относительного количества опухолевых элементов, экспрессирующих р53, проводили с помощью иммуногистохимическо-го (ИГХ) и морфометрического методов на биопсий-ных образцах опухолевой ткани. Статистическую обработку данных выполняли, используя программное обеспечение STADIA. Пороговый уровень экспрессии
Санкт-Петербург 18-19 ноября 2021 г.
р53 в опухолевых клетках вычисляли с помощью ROC-анализа. Пятилетнюю общую (ОВ) и беспрогрессивную выживаемость (БПВ) рассчитывали по методу Капла-на-Мейера с графическим построением соответствующих кривых (log-rank test). Риск наступления события вычисляли с помощью регрессионного анализа Кокса. Различия между показателями считали статистически значимыми при p<0,05.
Результаты. По результатам ROC-анализа обнаружено, что пороговое значение ИГХ экспрессии р53-позитивных клеток соответствовало 43%. Согласно этому значению, всех обследуемых разделили на группы с высокой (>43%) и низкой (<43%) экспрессией белка. Высокая экспрессия р53 определена у 33 (44%) из 75 больных ДВККЛ. Пятилетняя ОВ пациентов с высоким содержанием р53-экспрессирующих клеток установлена значимо ниже, чем у обследуемых с подпоро-говым значением указанного маркера: 54,5% против 81,0% соответственно (р=0,014). Риск летального исхода в 2,8 раза выше у больных ДВККЛ с надпороговой экспрессией р53 по отношению к пациентам с низким показателем (р=0,019; HR=2,792; 95% ДИ=1,183-6,591). Пятилетняя БПВ больных при высокой экспрессии р53 значимо ниже, чем в группе с низким значением выраженности исследуемого маркера: 45,5% против 66,7% соответственно (р=0,022). Риск развития рецидива и/ или рефрактерности к терапии возрастал в 2,2 раза (р=0,027; HR=2,203; 95% ДИ=1,094-4,439).
Выводы. Увеличение относительного количества р53-экспрессирующих опухолевых клеток (>43%) ассоциировано со снижением пятилетней общей и беспрогрессивной выживаемости больных ДВККЛ.
Солдатенкова О.В., Комиссаров К.А., Солдатенков В.Е, Минеева Н.В, Капустин С.И.,
Папаян Л.П., Силина Н.Н, Чечеткин А.В
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург
ТРОМБОФИЛИИ У ПАЦИЕНТОВ СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО РЕГИОНА РОССИИ: КЛАССИЧЕСКИЕ И ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ РИСКА
Введение. Роль наиболее важных генетических факторов риска развития тромбоза, таких как мутация FV Leiden и мутация в гене протромбина G20210A, установлена. В настоящее время представляется необходимым продолжать поиск дополнительных факторов риска наследственной тромбофилии и соотношения их с классическими.
Цель. Изучить клинические и лабораторные особенности у пациентов с верифицированным тромбозом и наследственной тромбофилией и оценить дополнительные протромботические маркеры.
Материалы и методы. Была изучена 131 история болезни пациентов, проходивших лечение в Российском научно-исследовательском институте гематологии и трансфузиологии в период 2017-2021 годов. Критерий включения в исследование: верифицированный артериальный и/или венозный тромбоз и наличие подтвержденной наследственной тромбо-филии. Критерий исключения: наличие мутаций в генах JAK2, CALR, MPL. На основании молекулярно-генетического тестирования, коагулологических ис-
следований были сформированы следующие группы пациентов (использовалась классификация тромбо-филий по F.R. Rosendaal): I - изолированная мутация FV Leiden (n=20), II - изолированная мутация в гене протромбина G20210A (n=8), III - изолированный дефицит антитромбина (n=5), IV - изолированный дефицит протеина С (n=1), V - изолированная гиперактивность FVIII (n=19), VI - изолированная гипергомоцистеине-мия (мутации в генах MTHFR, MTRR, подтвержденные фенотипически) (n=10), VII - изолированный первичный антифосфолипидный синдром (n=3), VIII - комбинация трех и более маркеров тромбофилии (n=9), IX - комбинация двух сильных маркеров тромбофилии (n=6), X - комбинация маркеров сильной и умеренной тромбофилии (n=50). Анализировались клинические и лабораторные данные в этих группах.
Результаты. Всего было обнаружено 208 маркеров сильной или умеренной тромбофилии (по F.R. Rosendaal). Наиболее часто встречалась гипергомоци-стеинемия (27,88%).
Комбинированные тромбофилии были выявлены
