CC BY
36
и N-фенилацетамидным остатком с последующим элиминированием фенэтильного остатка. В спектрах глюкуро-нидированных метаболитов, как правило, присутствуют интенсивные ионы, образующиеся при элиминировании остатка глюкуроновой кислоты.
ВЫВОДЫ
Проведенные исследования позволяют сделать вывод о преимуществах обнаружения метаболитов глюкурони-дированных метаболитов в образцах мочи, пробоподго-товка которых не содержала стадии деконъюгирования. Для образцов крови удобно обнаружение как самого фен-танила, так и его метаболитов, что повышает вероятность получения верных результатов. Представленные методики подготовки проб позволяют производить исследования образцов малой размерности (0,1-1 мл).
■ ПРИМЕНЕНИЕ ДВУХКОЛОНОЧНОЙ СХЕМЫ В ГАЗОВОМ ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВИИХМЕТАБОЛИТОВ
А. В. Кинд, к.х.н. И. Л. Гринштейн
• ООО «Аналит Продактс», Санкт-Петербург
• Аннотация: для повышения производительности анализа наркотических средств была разработана схема обеспечивающая анализ проб с разными видами дериватизации на двух колонках, установленных в одном термостате газового хромато-масс-спектрометра.
• Ключевые слова: газовая хромато-масс-спектрометрия, дериватизация, силилирование, синтетические каннабимиметики, двухколоноч-ная схема.
Газовая хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС) является одним из широко применяемых методов в скри-нинговом анализе наркотических средств и их метаболитов. Для повышения чувствительности, получения достоверных и воспроизводимых результатов при анализе полярных и труднолетучих соединений методом ГХ-МС их необходимо подвергать дериватизации. Поскольку большинство веществ, представляющих интерес для токсикологического скрининга, соответствуют этим характеристикам, то стадия дериватизации, как правило, является необходимым элементом пробоподготовки. Способ дериватизации определяется полярными группами, входящими в структуру аналитов. Например, для определения соединений, структуры которых включают гидроксильные и/или карбоксильные группы (в том числе, синтетических каннабимиметиков, основного метаболита тетрагидроканнабинола и опиатов) нередко применяется триметилсилилирование, причем методология его использования обычно связана с введением избытка силилирующих агентов в хроматограф. Силилирование материалов хроматографических путей приводит к частичному силилированию недериватизированных (или дериватизированных иным способом) проб, вводимых в хроматограф впоследствии - эффект, известный как де-риватизация «on-line». Дополнительным следствием этого эффекта является некоторая модификация колонки. Как правило, проявления дериватизации «on-line» нежелательны, и хроматографисты стремятся проводить анализ силилированных образцов на отдельном хроматографе или с помощью колонки, специально выделяемой для этих целей. Однако подобный способ решения данных затруднений нельзя назвать оптимальным как из-за высокой стоимости хроматографического оборудования, так из-за трудоемкости смены колонки в ГХ-МС системах.
Предлагаемая нами схема обеспечивает разделение проб с разными видами дериватизации на двух колонках, установленных в одном термостате. Для ее реализации к стандартной комплектации газового хромато-масс-спектрометра дополнительно необходим инжектор, вторая хроматографическая колонка и система позволяющая вводить две колонки параллельно в интерфейс хрома-то-масс-спектрометра. Важнейшим компонентом схемы является применение феррулы, позволяющей соединять обе колонки с интерфейсом масс-спектрометра при отсутствии объединенного газового пути, характерного для сплиттеров, и - следовательно - полностью разделять потоки газа из этих колонок. Для автоматизации процесса применяли автодозатор, позволяющий вводить пробы в обе хроматографические линии в рамках одной последовательности анализов. Данная схема была реализована и отработана на хромато-масс-спектрометрическом комплексе Shimadzu GCMS -QP2010 Ultra c двумя колонками HP-5MS, системой twinline и автодозатором AOC Dual Tower.
ВЫВОДЫ
Реализация предлагаемой схемы обеспечивает высокую производительность при использовании одного хромато-масс-спектрометра для определения различных дериватов и свободных форм наркотических средств и их метаболитов.
ВОЗМОЖНОСТИ ИПС «АИПСИН АНТИНАРКОТИКИ» аЛЯ_РУТИННЫХ_ХТИ_(ПОСТЕР)
В. А. Бычков, к.фарм.н. Т. В. Горбачева • СПб. ГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. - д.м.н. И. Е. Лобан)
• Аннотация: Материал посвящен вопросу применения ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» для идентификации токсикологически значимых веществ и их метаболитов в биологических объектах при судебно-химических и химико-токсикологических исследованиях. Показана возможность использования ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» для обработки большого объема скрининговых хроматограмм (метод ГХ-МС), а также возможность идентификации метаболитов токсикологически значимых веществ на примере идентификации а^Р и его метаболита. ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» является постоянно обновляемой системой, позволяющей не только идентифицировать широкий спектр ксенобиотиков и их метаболитов по масс-спектрам, но и получить сведения по токсикокинетике, токсикодинамике, внешнему виду и способах употребления идентифицированных веществ, а также другим методам идентификации.
• Ключевые слова: ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики», ГХ-МС, идентификация, а^Р
ВВЕДЕНИЕ
В последние годы метод хромато-масс-спектроме-трии стал основным методом идентификации токсикологически значимых веществ в биологическом материале. Возможности метода хромато-масс-спектрометрии для судебно-химических и химико-токсикологических исследований во многом определяются программным обеспечением и в первую очередь библиотеками масс-спектров, используемых для обработки хроматогра-
фической информации. Постоянно расширяющейся спектр новых синтетических наркотиков предъявляет к библиотекам масс-спектров ряд специальных требований:
1. Постоянное обновление баз данных с внесением масс-спектров новых веществ;
2. Совместимость с программным обеспечением масс-спектрометрических систем разных производителей;
3. Наглядность предоставления результатов идентификации для иллюстрации выводов по исследованиям;
4. Быстрота обработки хроматографической информации.
Одним из таких продуктов, заслуживающих внимания специалистов судебно-химических и химико-токсикологических лабораторий, является ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики».
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» (ЗАО «БелХард-Групп», Беларусь) состоит из 28 информационных модулей, содержащих информацию по целому спектру областей знаний, которые связаны с идентификацией наркотических веществ, их использованием и вызываемыми ими последствиями. Хромато-масс-спектрометры Agilent различных моделей.
Основным приложением ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» является «Хромато-масс-спектральный идентификатор», позволяющий в режиме «Обработать все» получать предварительную идентификационную информацию за максимально короткое время. Далее применяя режим «Продолжить с выбранной», используя другие модули системы, провести идентификацию вещества по времени удерживания и Mach-фактора, получить картину сравнения спектров (сопоставление, различие, наложение, спектр исследуемого пика, библиотечный спектр), информацию о веществе (физико-химические свойства, структурная формула, основные направления фрагментации, синонимы) и его токсикологическом и фармакологическом действии.
В практике работы нашего отделения ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» используется прежде всего для обработки скрининговых хроматограмм. В начале рабочего дня проводится пакетный анализ хроматограмм, полученных на каждом приборе в ночное время, который занимает не более 5 минут для 25 хроматограмм. Затем для более аргументированной идентификации используются другие возможности ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» или другие библиотеки масс-спектров.
За шесть месяцев применения ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» по данной схеме в нашем отделении было проанализировано более 10 000 хроматограмм.
Наглядным примером возможностей ИПС «АИПСИН АнтиНаркотики» для идентификации ксенобиотиков в биологических объектах являются случаи определения a-PVP (a-пирролидиновалерофенон) и его метаболита -2-оксо-РУР.
ВЫВОДЫ
Практический опыт применения ИПС «АИПСИН Антинаркотики» в практике работы нашего отделения свидетельствует о том, что данный программный продукт позволяет проводить быструю предварительную оценку хроматограмм, ориентировать экспертов на последующую целевую идентификацию ксенобиотиков и получать всестороннюю информацию для максимальной аргументации заключений. ИПС «АИПСИН Антинаркотики» по объему информации, необходимой для решения задач
судебно-химических и химико-токсикологических исследований, в настоящее время не имеет аналогов в нашей стране.
ЖХ-МСМ ПИСУЛЬФИРАМА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (ПОСТЕР)
А. П. Солошенко, А. М. Григорьев
• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно)
• Аннотация: Тетурам (дисульфирам) - соединение, применяемое в фармации для лечения алкоголизма путем формирования гиперчувствительности и по механизму действия являющееся блокатором ацетальдегидроге-назы. Превышение количества дисульфирама при его приеме в условиях значительного содержания этанола в крови может приводить к тяжелым токсическим реакциям и к смерти. Ввиду малой термической стабильности самого дисульфирама и значительной полярности его метаболитов метод жидкостной хромато-масс-спектрометрии представляются наиболее приемлемым инструментом для их обнаружения. В данной работе сообщается
о результатах оптимизирования метода ЖХ-МС для снижения степени деградации дисульфирама в ионном источнике масс-спектрометров при электрораспылительной ионизации. Было найдено, что предпочтительным органическим модификатором является метанол, а использование устройств, повышающих эффективность ионизации и транспорта вещества в масс-спектрометр (IonBuster, Вгикег Dаltonics), приводит к снижению чувствительности. Кроме того, приведены характеристики двух идентифицированных метаболитов дисульфирама, образованных в результате его восстановления и последующего глюкуро-нидирования.
• Ключевые слова: дисульфирам, ЖХ-МС, метаболиты, глюкурониды
ВВЕДЕНИЕ
Дисульфирам (тетурам, антабус, бис(диэтилтио-карбамоил) дисульфид) - соединение, ингибирующее окисление ацетальдегида, образующегося при биотрансформации алкоголя посредством блокирования ацеталь-дегидрогеназы. Предназначен для лечения хронического алкоголизма через вырабатывание гиперчувствительности и отрицательного условного рефлекса. Разовый прием значительных количеств дисульфирама (более 1 г) может приводить к смерти при высоком содержании алкоголя в крови.
Дисульфирам характеризуется малой термической стабильностью, что приводит к существенным затруднениям при его элюировании в условиях газовой хро-мато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) на капиллярных колонках; для обнаружения его метаболитов методом ГХ-МС необходимо проведение деконъюгирования и дериватизации. Этих недостатков лишен метод жидкостной хромато-масс-спектрометрии (ЖХ-МСп). Цель нашей работы - оптимизация условий ЖХ-МСп определения дисульфирама и идентификация его метаболитов в моче.
