CC BY
23
Медведев И.Н., Горяйнова И.А., Белова Т.А.
Курский институт социального образования (филиал) Российского государственного
социального университета
ВОЗМОЖНОСТИ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ТРОМБОЦИТАРНЫХ ДИСФУНКЦИЙ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ С ДИСПЕПСИЕЙ
У новорожденных телят с диспепсией выявлено повышение агрегационной функций тромбоцитов in vitro и in vivo. В основе этих нарушений лежат нарушения соотношений холестерина и фосфолипидов в мембранах тромбоцитов, повышение содержания в плазме и кровяных пластинках Уровня средних молекул, активация перекисного окисления липидов в них, усиление синтеза в стенке сосудов фактора Виллебранда и повышение уровня тромбоксанообразования в кровяных пластинках. Активация тромбоцитов является ведущей причиной повышения свертывания крови у новорожденных телят с диспепсией. Коррекция нарушений тромбоцитарного звена гемостаза возможна с помощью патогенетически обоснованного комплекса из фосфопага, экоса и глюконата кальция, способного снижать уровень средних молекул в организме и корректировать перекисное окисление липидов.
Сдвиги в тромбоцитарном гемостазе у новорожденных телят с диспепсией способствуют развитию у них внутрисосудистого тромбообразования. Активация первичного гемостаза при диспепсии зависит во многом от усиления перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме животных, приводящего к запуску внутритромбоцитарных механизмов усиления их агрегации. До сих пор не разработаны подходы к быстрой эффективной коррекции функционального состояния тромбоцитов у телят с диспепсией с полным исключением риска тромбозов.
В настоящее время на практике используют препарат - фосфопаг (полигексамети-ленгуанидин фосфат), который способен эффективно купировать диспепсию у новорожденных телят [4]. Было выдвинуто предположение о возможном повышении эффективности данного вещества по коррекции нарушений функций тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией с помощью сочетания фосфопага с сорбентом экос (гидроалюмосиликат) и глюконатом кальция.
Материалы и методы
Группа исследования представлена 26 новорожденными телятами с диспепсией. У больных телят отмечались все признаки диспепсии с ярко выраженной интоксикацией. Группу контроля составили 267 здоровых
новорожденных телят. Определялась активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) плазмы по содержанию ТБК-актив-ных продуктов набором фирмы ООО «Агат-Мед». Оценивали антиокислительный потенциал жидкой части крови [1], отражающий уровень в крови витаминов антиоксидантного действия. Внутритромбоцитарное ПОЛ находили по концентрации базального уровня (без прооксидантной стимуляции) малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуровой кислотой [7], в модификации [3]. Определяли уровень средних молекул (СМ) в плазме и отмытых, ресуспендированных тромбоцитах [2]. Производился подсчет количества тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева. Агрегация тромбоцитов (АТ) исследовалась визуальным микрометодом [6] с использованием в качестве индукторов: АДФ (0,5х10-4 М), коллагена (в стандартной концентрации разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл) (НПО «Ренам»), адреналина гидрохлорид (5х10-6 М., pH -7,4, производства Гедеон Рихтер), а также сочетания АДФ и адреналина, АДФ и коллагена, адреналина и коллагена для моделирования реальных условий кровотока. Все растворы индукторов готовились каждый раз перед употреблением. Внутрисосу-дистая активность тромбоцитов (ВАТ) оп-
ределялась визуально с использованием фазовоконтрастного микроскопа [5] по Шити-ковой А.С. и соавт. (1997). Всем 2б телятам назначался 0,01% фосфопаг (полигексамети-ленгуанидин фосфат) по 100,0 мл утром, 10% глюконат кальция по 10,0 мл в обед и экос (гидроалюмосиликат) по 150 мг/кг живой массы вечером в течение 10 дней. Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты исследования
У новорожденных телят с диспепсией имелось повышение ПОЛ, при этом концентрация ТБК-активных продуктов в плазме составила 5,1б±0,12 мкмоль/л, в контроле -3,92±0,06 мкмоль/л. Антиоксидантная активность плазмы больных животных была снижена (21,2±0,0б%), в контроле - 28,6±0,04%. Уровень МДА в тромбоцитах был повышен до 1,6б±0,001 нмоль/109, в контроле -0,89±0,02 нмоль/109, что свидетельствовало об активации в них свободно-радикального окисления (СРО) в связи с ослаблением внут-ритромбоцитарной антиокислительной активности. Уровни средних молекул в плазме составляли СМ280 - 0,52±0,04 усл ед, СМ254 -0,35±0,02 усл ед, содержание средних молекул в тромбоцитах - СМ280 - 0,0б5±0,02 усл ед/109, СМ254 - 0,072±0,01 усл ед/109, достоверно превышая контрольные значения.
Применение сочетания фосфопага, эко-са и глюконата кальция позитивно влияло на ПОЛ плазмы и тромбоцитов крови телят. Уменьшалось содержание ТБК-активных продуктов плазмы (Р<0,01). На 10 день лечения их концентрация составила 3,97±0,05 мкмоль/л. С уменьшением продуктов ПОЛ в плазме отмечена нормализация СМ280 до
0,32±0,09 усл. ед, СМ254 - 0,23±0,0б усл. ед. Снижение выраженности ПОЛ плазмы шло параллельно с уменьшением базального уровня МДА в тромбоцитах после 10-го дня лечения (0,90±0,03 нмоль/109). При сочетанном назначении телятам фосфопага, экоса и
глюконата кальция нормализовался в тромбоцитах уровень СМ280 - 0,050±0,06 усл. ед/109, СМ254 - 0,054±0,01 усл. ед/109.
Содержание тромбоцитов в крови больных телят до и после лечения было в пределах нормы. У телят с диспепсией, до терапии, найдено ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена (20,3±0,05 с). Несколько медленнее АТ развивалась у больных телят под влиянием АДФ (36,0±0,10 с) и рис-томицина (31,6±0,02 с). Тромбиновая (43,6±0,22 с) и адреналиновая (82,0±0,03 с) АТ наступали позднее, но развивалась быстрее контроля (54,0±0,02 с и 97,0±0,45 с, соответственно) (Р<0,01). Время развития АТ под влиянием сочетанного применения индукторов также было ускоренным (АДФ+адрена-лин - 22,0±0,05 с, АДФ+коллаген - 20,0±0,01 с, адреналин+коллаген - 19,0±0,02 с).
При назначении сочетания фосфопага, экоса и глюконата кальция увеличивалось время АТ под влиянием всех индукторов. На 10 день лечения самым активным индуктором АТ сохранялся коллаген (31,0±0,05 с). Менее активны были - АДФ (39,0±0,05 с), ри-стомицин (41,0±0,12 с). Еще позднее развивалась АТ под влиянием тромбина и адреналина. Удлинилось время АТ при сочетании индукторов (АДФ + адреналин -36,0±0,03 с, АДФ+коллаген - 27,0±0,05 с, адреналин+коллаген - 30,0±0,05 с).
У телят с диспепсией наблюдалось повышение внутрисосудистой активности тромбоцитов. Уровень дискоцитов, определяемый визуально с фазовым контрастом по Шитиковой А.С. (1997), в крови больных телят составил 62,3±0,06% (в контроле -82,0±0,16%). Содержание диско-эхиноцитов было увеличено в 1,6 раз. Количество сфе-роцитов и сферо-эхиноцитов также значительно превышало контрольные значения (13,2±0,04% и 6,8±0,05%, соответственно). Сумма активных форм (сумма содержащих в кровотоке дискоэхиноцитов, сфероэхино-цитов, сфероцитов и биполярных форм) тромбоцитов (37,7±0,02%) больных телят
была повышена в 2,09 раз, против контроля (18,0±0,02%). Малых и больших агрегатов в их крови содержалось 16,2±0,05 на 100 сво-боднолежащих тромбоцитов и 45,5±0,02 на 100 свободнолежащих тромбоцитов, превышая в 4,5 и 45,8 раз контрольные значения (3,6±0,04 и 0,12±0,01 на 100 свободнолежа-щих тромбоцитов, соответственно), причем количество тромбоцитов в агрегатах у больных животных (14,0±0,02%) превышало контроль в 2,8 раза (5,0±0,2%).
Назначение сочетания фосфопага, эко-са и глюконата кальция больным диспепсией телятам позволило снизить внутрисосу-дистую активность тромбоцитов. К концу 10-дневного лечения выявлено достоверное увеличение неактивных форм тромбоцитов. Так, дискоидных тромбоцитов в крови больных на фоне применения фосфопага, экоса и глюконата кальция увеличилось до 82,3±0,б%. В конце лечения уровни диско-эхиноцитов, сфероцитов и сферо-эхиноцитов в крови животных достоверно уменьшились (9,4±0,01%, 4,б±0,05% и 2,7±0,3%, соответственно). Сумма активных форм тромбоцитов на фоне терапии фосфопагом, экосом и глюконатом кальция (17,7±0,04%) соответствовала контролю (18,0±0,2%). Число малых и больших агрегатов к 10 дню лечения достоверно снизилось в 4,37 и 3б,б раза, соответственно. Количество тромбоцитов в агрегатах достоверно снизилось до 5,0±0,09%, сравнявшись с контрольным уровнем (5,0±0,2%).
Обсуждение
Усиленное ПОЛ в плазме и тромбоцитах телят при диспепсии говорит о снижении антиокислительной активности их жидкой части крови [1] и увеличении в плазме и тромбоцитах уровня СМ. Нормализация перок-сидации и увеличение антиокислительного потенциала плазмы при снижении СМ на фоне лечения свидетельствуют о значимом нормализующем действии применения фос-фопага, экоса и глюконата кальция на гоме-
остаз у новорожденных телят с диспепсией. Эфективность опосредована антимикробными свойствами (фосфопаг), сорбцией токсинов (экос) и повышением антиоксидантного потенциала жидкой части крови, увеличивая функциональные возможности клеток организма, в т. ч. желудочно-кишечного тракта теленка (фосфопаг и глюконат кальция) [4].
Нормализация оцениваемых показателей гемостаза у телят на фоне сочетанного применения фосфопага, экоса и глюкона-та кальция говорит о его положительном влиянии на механизмы реализации тром-боцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией. Несомненно, это обусловлено коррекцией клинических проявлений диспепсии, снижением уровней ПОЛ и СМ в плазме и тромбоцитах с уменьшением чувствительности тромбоцитов к индукторам агрегации, о котором можно судить по увеличению времени агрегации. Активность агрегации тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией при назначении на 10-дневный срок фосфопага, экоса и глюконата кальция соответствовала группе контроля.
Достижение нормальной длительности АТ под влиянием ристомицина у новорожденных телят, находившихся на терапии фосфопагом, экосом и глюконатом кальция, говорит об оптимизации концентрации в крови адгезивной молекулы - фактора Вил-лебранда.
Полная нормализация ВАТ при лечении фосфопагом, экосом и глюконатом кальция у новорожденных телят с диспепсией позволяет нормализовать микроциркуляцию, т.к. содержание активных форм тромбоцитов и их агрегатов уже не способно при достигнутом их уровне блокировать капилляры [6]. Учитывая эффективность коррекции тром-боцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией проведенным лечением можно рекомендовать исследуемое сочетание препаратов для широкого применения в животноводческих хозяйствах.
Выводы
1. Применение комплекса из фосфопага, экоса и глюконата кальция у телят с диспепсией снижает активность перекисного окисления липидов и содержание СМ в их крови и тромбоцитах.
2. Использование в течение 10 дней фос-фопага, экоса и глюконата кальция у новорожденных телят с диспепсией нормализует состояние оцениваемых показателей тромбо-цитарных функций, оптимизируя агрегаци-онную способность тромбоцитов и внутри-сосудистую активность кровяных пластинок.
Список использованной литературы:
1. Волчегорский И.А., Долгушин И.И., Колесников О.Л., Цейликман В.Э. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма. Челябинск, 2000.
2. Габриелян Н.И., Липатова В.И. и др. Скрининговый метод определения средних молекул в биологических жидкостях. Методические рекомендации. М. 1985.
3. Кубатиев А. А., Андреев С.В. Перекиси липидов и тромбоз. // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1979. - №5. - С. 414-417.
4. Наумов М.М., Медведев И.Н., Ефимов К.М. и др. Практические рекомендации по применению «Биопага-Д» и «Фосфопага» в ветеринарии. Москва, 2006.
5. Шитикова А.С., Тарковская Л.Р., Каргин В.Д. Метод определения внутрисосудистой активации тромбоцитов и его значение в клинической практике. //Клинич. и лабор. диагностика. 1997. - №2. - С. 23-35.
6. Шитикова А.С. Визуальный микрометод исследования агрегации тромбоцитов. В кн. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Под ред. Н.Н. Петрищева, Л.П. Папаян. СПб, 1999. - С. 49-53.
7. Schmith J.B., Ingerman C.M., Silver M.J. Malondialdehyde formation as an indicator of prostaglandin production by human platelet // J.Lab. Clin. Med. 1976.-Vol. 88 (1). - p. 167-172.
