CC BY
24
УДК 619:616-085:616.15:636.4-053.31
Ключевые слова: агрегация тромбоцитов, новорожденные телята, железодефицитная анемия, ферроглюкин, гликопин
Key words: platelet aggregation, newborn calves, iron deficiency anemia, ferroglucinum, glicopin
Завалишина С. Ю.
АГРЕГАЦИОННАЯ АКТИВНОСТь ТРОМБОЦИТОВ у новорожденных ТЕЛЯТ С ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОй АНЕМИЕй, получающих ферроглюкин и гликопин
aggregatory ability of platelet in newborn calves with iron deficiency anemia being on ferroglucinum and glicopin
Курский институт социального образования, филиал РГСУ Адрес: 305029, г. Курск, ул. Карла Маркса, 53
Kursk Institute of social Education, Branch of Russian state social university Address: 305029, Kursk, Karla Marksa street, 53
Завалишина Светлана Юрьевна, к. б. н., доцент каф. адаптивной физ. культуры и медико-биологических наук
Zavalishina svetlana Yu., ph.D., Associate prof. at the Dept. of Adaptive physical Training andMedical&Biological sciences
Аннотация. В условиях дефицита железа у новорожденных телят усиливается тромбоцитарная активность. Установлена возможность полной коррекции нарушений агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных телят с железодефицитной анемией с помощью сочетания ферроглюкина с гликопином.
Summary. Platelet activity increases in newborn calves with iron deficiency. It is established that absolute correction of disturbance of platelet aggregation activity in newborn calves with iron deficiency anemia is possible by using a combination of ferroglucinum and glicopin.
Введение
Наиболее ранний период онтогенеза -фаза новорожденное™ - является одним из важнейших этапов становления активности тромбоцитарного гемостаза, оптимальное состояние которого легко может быть нарушено отрицательными влияниями на организм животного [6, 7]. К числу таких факторов относится дефицит железа и развивающаяся на его фоне анемия, которая у новорожденных телят до сих пор нередко встречается в российских животноводческих хозяйствах различных форм собственности. Ее наличие у новорожденных телят обуславливает возникновение нарушений роста и развития животных, понижение их резистентности, что повышает их восприимчивость к различным инфекциям и увеличивает падеж [1]. Возникновение же-лезодефицитной анемии у телят оказывает негативное влияние на все их системы и органы, неизбежно усиливая агрегацию форменных элементов крови [5].
Вызывает интерес проблема поиска способов эффективной коррекции тромбоци-топатии при железодефицитном состоянии.
Современным мощным стимулятором жизнедеятельности и резистентности растущего организма в ветеринарии является гликопин - глюкозаминилмурамилдипептид, обладающий выраженным позитивным воздействием на обмен веществ при различных негативных состояниях [2]. Вместе с тем остается не выяснено его влияние в сочетании с препаратом железа на возникающие у новорожденных телят с железодефицитной анемией тромбоцитарные дисфункции.
Цель работы - оценить возможности коррекции нарушений агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных телят с железодефицитной анемией сочетанием ферроглюкина и гликопина.
Материалы и методы
В исследование включено 45 новорожденных телят с железодефицитной анемией (сывороточное железо 12,6±0,12 мкмоль/л, сидероциты 1,7±0,08 % при количестве гемоглобина у них в среднем 96,1±0,24 г/л, эритроцитов - 4,3±0,24*1012/л). Группу контроля составляли 29 здоровых новорожденных телят.
Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) плазмы оценивали по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов с помощью набора «Агат-Мед» и ацилгидроперекисей (АГП) [4] с учетом величины антиокислительного потенциала плазмы (АПП) [3]. Количество тромбоцитов в капиллярной крови определялось в камере Горяева. Агрегация тромбоцитов (АТ) определялась визуальным микрометодом [8] по Шитиковой А. С. (1999) с использованием в качестве индукторов АДФ (0,5х10-4 М), коллагена (разведение 1 : 2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл), адреналина (5х10_6 М) и перекиси водорода (7,3*10~3 М), а также сочетания АДФ и адреналина, АДФ и коллагена, адреналина и коллагена. Внутрисосудистая активность тромбоцитов (ВАТ) сосуда регистрировалась при помощи фазового контраста [9]. Коррекция железодефицитной анемии производилась у всех 45 новорожденных телят ферроглюки-ном по 75 мг (1 мл) внутримышечно, однократно, из расчета 15 мг железа на 1 кг массы тела в сочетании с выпаиванием гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглю-кина. Оценка клинических и лабораторных показателей проводилась перед началом коррекции и на следующий день после ее завершения. Статистическая обработка полученных результатов осуществлена при помощи ^критерия Стьюдента.
Результаты исследования
В результате одновременного применения у телят с железодефицитной анемией фер-роглюкина и гликопина удалось полностью нормализовать характеристики красной крови, учитываемые биохимические и гематологические показатели.
У наблюдаемых новорожденных телят с анемией перед началом коррекции отмечена активация процессов ПОЛ в плазме (АГП 3,38±0,17 Д233/1 мл, ТБК-активные продукты 5,16±0,31 мкмоль/л) и депрессия АПП - 22,4±0,19 %. На фоне ферроглюкина и гликопина удалось стабилизировать АГП на уровне 1,45±0,18 Д233/1 мл, ТБК-активные
продукты - 3,43±0,21 мкмоль/л при достижении величины АПП 33,5±0,11 % (в контроле 1,44±0,09 Д233/1 мл, 3,46±0,14 мкмоль/л и 33,7±0,14 %, соответственно).
Содержание тромбоцитов в крови новорожденных телят с анемией соответствовало уровню контроля. Агрегация тромбоцитов в исходном состоянии у них была ускоренной во всех случаях. Активнее всего АТ развивалась у этих животных под влиянием коллагена (19,6±0,17 с.), позднее АТ наступала с ристомицином, Н2О2 и АДФ, еще позднее с тромбином (37,0±0,09 с.). Наиболее поздняя АТ у телят с дефицитом железа отмечена под действием адреналина (69,7±0,10 с.). Комбинации индукторов способствовали их взаимопотенциированию и ускорению АТ особенно у животных с железодефицитной анемией, обеспечивая возникновение АТ почти вдвое быстрее, чем у здоровых телят (табл. 1).
При применении ферроглюкина и глико-пина у животных с анемией отмечено торможение АТ до уровня, соответствующего контролю. При этом наиболее активно тромбоциты животных реагировали на коллаген, АДФ, Н2О2 и ристомицин, менее активно -на тромбин и адреналин. Длительность АТ в ответ на сочетания индукторов также полностью нормализовалась после завершения коррекции (табл. 1).
Уровень тромбоцитов-дискоцитов в крови телят с анемией значительно уступал контролю при повышении количества дис-ко-эхиноцитов почти в 2 раза (28,1±0,15 %). Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов в их крови также достоверно превышало контрольный уровень, обеспечивая почти двукратное повышение суммы активных форм тромбоцитов по сравнению с контролем 41,4±0,25 %, (в контроле - 22,3±0,11 %). Малых и больших агрегатов в крови телят с анемией содержалось 14,5±0,09 и 3,18±0,23 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, в контроле -3,5±0,06 и 0,14±0,07 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно. Число включенных в агрегаты тромбоцитов у животных с дефицитом железа превышало контроль в 2 раза.
Таблица 1.
Агрегационная и внутрисосудистая активность тромбоцитов у новорожденных телят с дефицитом железа на фоне ферроглюкина и гликопина
Показатели Опытная группа, M±m, n = 45 Контроль, M±m, n = 29
исход после коррекции
Агрегация с АДФ, с. 25,2±0,12 40,0±0,06 р, < 0,01 40,2±0,08 р < 0,01
Агрегация с коллагеном, с. 19,6±0,17 31,2±0,05 р, < 0,01 31,4±0,08 р < 0,01
Агрегация с тромбином, с. 37,0±0,09 54,0±0,14 р, < 0,01 53,8±0,07 р < 0,01
Агрегация с ристомицином, с. 22,6±0,18 47,9±0,08 р, < 0,01 48,0±0,12 р < 0,01
Агрегация с Н2О2, с. 24,3±0,06 41,2±0,09 р, < 0,01 41,1±0,06 р < 0,01
Агрегация с адреналином, с. 69,7±0,10 97,8±0,05 р, < 0,01 97,6±0,06 р < 0,01
Агрегация с АДФ и адреналином, с. 23,8±0,11 38,3±0,08 р, < 0,01 38,0±0,09 р < 0,01
Агрегация с АДФ и коллагеном, с. 17,2±0,19 28,1±0,07 р, < 0,01 27,9±0,06 р < 0,01
Агрегация с адреналином и коллагеном, с. 16,0±0,12 31,0±0,06 р, < 0,01 30,8±0,07 р < 0,01
Дискоциты, % 58,6±0,26 78,3±0,10 р, < 0,01 77,7±0,11 р < 0,01
Диско-эхиноциты, % 28,1±0,12 13,5±0,12 р, < 0,01 13,9±0,13 р < 0,01
Сфероциты, % 7,6±0,13 4,6±0,06 р, < 0,01 4,7±0,06 р < 0,01
Сферо-эхиноциты, % 4,5±0,07 2,7±0,07 р, < 0,01 2,7±0,05 р < 0,01
Биполярные формы, % 1,2±0,05 0,9±0,05 1,0±0,03
Сумма активных форм, % 41,4±0,25 21,7±0,09 р, < 0,01 22,3±0,11 р < 0,01
Число тромбоцитов в агрегатах, % 10,2±0,11 5,2±0,11 р, < 0,01 4,9±0,07 р < 0,01
Число малых агрегатов на 2-3 тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов 14,5±0,09 3,7±0,12 р, < 0,01 3,5±0,06 р < 0,01
Число средних и больших агрегатов, 4 и более тромбоцита, на 100 свободно лежащих тромбоцитов 3,18±0,23 0,12±0,003 р, < 0,01 0,14±0,007 р < 0,01
Условные обозначения: р - достоверность различий показателей в исходном состоянии у анемизированных телят и контроля, р1 - достоверность динамики показателей на фоне коррекции.
Примененная коррекция вызвала полную нормализацию ВАТ у наблюдаемых новорожденных телят с дефицитом железа (табл.). Количество дискоцитов в кровяном русле этих животных возросло до 78,3±0,10 % при уменьшении суммарной величины активных форм кровяных пла-
стинок до 21,7±0,09 % в результате нормализации всех их разновидностей. Это привело к тому, что в крови животных отмечено сокращение до уровня контроля числа свободно циркулирующих агрегатов различного размера при понижении вовлеченности в них тромбоцитов.
Обсуждение
Формирование железодефицитной анемии у новорожденных телят сочетается с возникновением нарушений в системе первичного гемостаза [5, 6]. Характерная для анемии гипоксия усугубляется возникающими нарушениями микроциркуляции, способствует дополнительной активизации тромбоцитов. Это было подтверждено выявленным у новорожденных телят с железодефицитной анемией ускорением агрегации тромбоцитов под действием всех испытанных индукторов и их сочетаний. Это во многом обуславливалось усилением интенсивности обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах с повышением образования мощного агреганта -тромбоксана. Кроме того, судя по ускорению АТ с ристомицином, в крови у телят с анемией нарастает количество кофактора агрегации - фактора Виллебранда.
Выявленное ускорение АТ с двумя индукторами агрегации указывало на ее усиление у новорожденных телят с железодефицитной анемией в условиях, близких к внутрисосу-дистым, что было подтверждено исследованиями у них ВАТ.
Сочетанное применение ферроглюкина и гликопина значимо понижало у телят с дефицитом железа интенсивность процесса ПОЛ в жидкой части крови, ослабляя стимулирующее его влияние на поверхностные структуры тромбоцитов. Торможение АТ и снижение ВАТ у телят с железоде-фицитной анемией в результате применения ферроглюкина и гликопина во многом является следствием позитивного влияния проведенной коррекции на интенсивность ПОЛ и рецепторные и пострецепторные механизмы функционирования тромбоцитов. Удлинение времени возникновения АТ под действием ристомицина указывало на понижение в крови телят, получавших ферро-глюкин и гликопин, фактора Виллебранда. Нарастающая при этом резистентность тромбоцитов к перекиси водорода, отмеченная по удлинению АТ в тесте с Н2О2, указывала на усиление активности системы антиокисления тромбоцитов, что дополнительно понижало их агрегирующие способности.
Таким образом, одновременное применение ферроглюкина и гликопина способно в полной мере нормализовать у телят с железодефицитной анемией агрегационную функцию тромбоцитов, регистрируемую in vitro и in vivo.
Заключение
Применение ферроглюкина и гликопина у новорожденных телят с железодефицит-ной анемией нормализует агрегационную способность тромбоцитов in vivo и in vitro. Выявленная высокая эффективность испытанного сочетания позволяет широко рекомендовать его у новорожденных телят с же-лезодефицитной анемией для обеспечения массовой эффективной профилактики у них внутрисосудистой активации тромбоцитов.
Список литературы
1. Абрамов, С. С. Латентная железодефицитная анемия у телят / С. С. Абрамов, С. В. Засинец // Ветеринария. - 2004. - № 6. - С. 43-45.
2. Андронова, Т. М. Применение иммуномодуля-тора гликопина для профилактики и лечения заболеваний животных / Т. М. Андронова, Б. В. Пинягин, Г. И. Устинова. - Москва. 2009.- 12 с.
3. Волчегорский, И. А. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма / И. А. Волчегорский, И. И. Долгушин, О. Л. Колесников, В. Э. Цейликман. - Челябинск, 2000. - 167 с.
4. Гаврилов, В. Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В. Б. Гаврилов, М. И. Мишкорудная // Лабораторное дело. - 1983. - № 3. - С. 33-36.
5. Завалишина, С. Ю. Тромбоцитарная активность у новорожденных телят при железодефицитной анемии / С. Ю. Завалишина // Ветеринария. - 2012. -№ 2. - С. 51-52.
6. Завалишина, С. Ю. Гемостатическая активность сосудистой стенки у новорожденных телят / С. Ю. Завалишина // Доклады РАСХН. - 2012. - № 1. - С. 37-39.
7. Медведев, И. Н. Активность тромбоцитар-ного гемостаза у здоровых новорожденных телят / И. Н. Медведев, С. Ю. Завалишина // Доклады РАСХН. - 2011. - № 5. - С. 32-34.
8. Шитикова, А. С. Визуальный микрометод исследования агрегации тромбоцитов в кн. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний ; под ред. Н. Н. Петрищева, Л. П. Папаян / А. С. Шитикова. -СПб., 1999. - 117 с.
9. Шитикова, А. С. Метод определения внутрисосу-дистой активации и его значение в клинической практике / А. С. Шитикова, Л. Р. Тарковский, В. Д. Каргин // Клин. и лабор. диагностика. - 1997. - № 2. - С. 23-35.
