CC BY
28
ИзвестияТСХА. выпуск 4. 2006 год
УДК 591.85:636.2:619:616.33-008.3
АГРЕГАЦИОННАЯ АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ С ДИСПЕПСИЕЙ
И.Н. МЕДВЕДЕВ, И.А. ГОРЯЙНОВА, М.М. НАУМОВ, М.Н. ПАВЛОВ*
У новорожденных телят с диспепсией выявлено повышение агрегационной функций тромбоцитов. В основе этих нарушений лежат глубокие сдвиги липид-ного состава мембран тромбоцитов, повышение содержания в плазме и кровяных пластинках уровня средних молекул, активация перекисного окисления липидов в них, усиление синтеза в стенке сосудов фактора Виллебранда и интенсификация тромбоксанообразования в кровяных пластинках. Активация тромбопласти-нообразования является ведущей причиной повышения свертывания крови у новорожденных телят с диспепсией. Коррекция нарушений тромбоцитарного звена гемостаза должна включать в себя патогенетически обусловленный комплекс, способный снижать уровень средних молекул в организме и лечить диспепсию.
Исследование нарушений агрегации тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией имеет важное практическое значение, так как именно активация первичного звена гемостаза играет ведущую роль в активизации гемостаза в целом, повышении вязкости и ухудшении реологии крови с наклонностью к внутрисосудистому тромбообразо-
ванию. Вместе с тем до сих пор очень слабо изучены нарушения агрега-ционной способности тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией. Не определена степень нарушенное™ при дисфункции тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией липидного состава их мембран, уровня пероксидации и антиоксидантной защиты тромбоцитов, а также уровня обмена в них арахидоновой кислоты. В литературе имеются отрывочные сведения о том, что диспепсия сопровождается у новорожденных телят повышением уровня в плазме средних молекул (СМ) [6], способных нару-
шать многие функции организма. Не выяснена степень увеличения СМ в тромбоцитах, способствующих во многом формированию тромбоцито-патии.
Цель работы — исследовать особенности нарушения агрегации тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией.
Материалы и методы
В основу статьи положены материалы 3-летних исследований в хозяйствах Курской обл. Под наблюдением находились 153 новорожденных теленка с диспепсией сроком 1-3 дня от здоровых коров 1-2-го отела. Кормление и содержание осуществлялось в стандартных условиях телятника. Группу контроля составили 267 здоровых новорожденных телет. Взятие крови проводилось в утренние часы. Обследование включало определение следующих показателей. Уровень средних молекул (СМ) в плазме и отмытых и ресуспендированных тромбо-
* Курский институт социального образования (филиал) Российского государ-
ственного социального университета
** Курская государственная сельскохозяйственная академия им. И.И. Иванова.
цитах определяли по [1]. Активность перекисного окисления липи-дов (ПОЛ) плазмы определяли по содержанию ТБК-активных продуктов набором фирмы ООО «Агат-Мед», ацилгидроперекисей (АГП) [2], а внутритромбоцитарное ПОЛ — по концентрации базального уровня малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарби-туровой кислотой [11], в модификации [8] и АГП [2]. Внутритромбо-цитарную антиоксидантную систему характеризовала активность ка-талазы и супероксиддисмутазы (СОД) по [9].
В отмытых и ресуспендирован-ных тромбоцитах определяли содержание холестерина энзимати-ческим колориметрическим методом набором фирмы «Витал Диагности-кум» и фосфолипидов по фосфору [7]. Исследовали также активность и время образования эндогенного тромбопластина [10]. Для косвенной оценки обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, а также активности в них циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы использованы 3 пробы переноса по методу [4] с регистрацией агрегации тромбоцитов (АТ) на ФЭКе [5]. Производили подсчет количества тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горя-ева. Агрегационную способность
тромбоцитов исследовали визуальным микрометодом [3] с использованием в качестве индукторов АДФ (0,5х10"4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл) (НПО «Ренам»), адреналина (5х10_6 М, завод Гедеон Рихтер А.О.). Для моделирования реальных условий кровотока применены сочетания индукторов АДФ+адреналин, АДФ+кол-лаген и адреналин+коллаген. Статистическая обработка полученных результатов проведена с использо-
ванием ^критерия Стьюдента. Результаты представлены в виде М±т.
Результаты и их обсуждение
У телят с диспепсией отмечалось повышение ПОЛ плазмы. Так, концентрация ТБК-активных продуктов в плазме составила 5,10± ±0,02 мкмоль/л, в контроле — 3,92± ±0,06 мкмоль/л. Уровень МДА в тромбоцитах больных животных также был повышен, что свидетельствовало об активации в них свободнорадикального окисления
(СРО) в связи с ослаблением внут-ритромбоцитарной антиокислитель-
ной активности. Содержание АГП в плазме больных телят составляло 3,50±0,01 Д2зз /1 мл (в контроле 1,92±0,02 Д23з /1 мл). В тромбоцитах больных АГП (3,49±0,01 Д2зз / 109 тр.) также существенно превышали контрольные значения.
Активация СРО в тромбоцитах у больных телят стала возможной в результате существенного ослабления антиокислительных ферментов кровяных пластинок — СОД и каталазы. Уровень СМ в плазме при 280 нм. составлял 0,49±0,01 уел. ед., при 254 нм. — 0,32±0,02 против контроля 0,32 ±0,002 и 0,24±0,03 уел. ед. соответственно. В тромбоцитах телят с диспепсией уров ни СМ при 280 и 254 нм были достоверно выше контроля (табл. 1).
Исследование липидного состава мембран тромбоцитов у больных телят выявило снижение содержания в них ОФЛ до 0,38±0,001 мкмоль/109 тр. и увеличение уровня ОХС до 0,82± ±0,001 мкмоль/109 тр. В контроле аналогичные показатели составили 0,49±0,002 мкмоль/109 тр. и 0,73± ±0,001 мкмоль/109 тр. соответственно. У больных животных отмечалось усиление тромбопластинообразова-
ния. Время образования активного тромбопластина у них составляло
Таблица 1
Биохимические показатели тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией
Показатель Больные диспепсией телята, n=153, М±т Контроль, п=267, М±т
ХС тромбоцитов, мкмодь/109 тр. 0,82±0,001 0,73±0,001 Р<0,01
ОФЛ тромбоцитов, мкмоль/109 тр. 0,38±0,001 0,49±0,002 Р<0,01
ХС/ОФЛ тромбоцитов 2,15±0,02 1,48+0,01 Р<0,01
АГП тромбоцитов, Д2зз/Ю9тр. 3,49±0,01 2,87±0,04 Р<0,01
Базальный МДА тромбоцитов, нмоль/10э тр. 1,54±0,004 0,89±0,02 Р<0,01
Средние молекулы 2во тромбоцитов, усл. ед./109 тр. 0,061+0,02 0,050±0,04 Р<0,01
Средние молекулы 254 тромбоцитов, усл. ед./109 тр. 0,069±0,03 0,055±0,04 Р<0,01
Каталаза тромбоцитов, МЕ/109 тр. 5690,0+21,00 10500,0+11,05 Р<0,01
СОД тромбоцитов, МЕ/109 тр. 1250,0±4,36 1780,0+2,06 Р<0,01
2,95±0,01 мин, активность — 9,6± ±0,02 с. В группе контроля тром-бопластин образовался за 2,40±0,01 мин, а активность его составляла 14,0±0,05 с.
Весь комплекс биохимических изменений в тромбоцитах характеризовал усиление обмена в них ара-хидоновой кислоты и повышение тромбоксанообразования. В простой пробе переноса косвенно оценен уровень тромбоксана в кровяных пластинках телят — 74,3±0,03% (в контроле — 39,2±0,02%). Эти показатели говорят об активации цик-лооксигеназы, выявленной по восстановлению АТ в коллаген-аспи-риновой пробе — 96,8±0,05% и тромбоксансинтетазы, определен-
ной по восстановлению АТ в кол-лаген-имидазольной пробе — 54,6± ±0,02%. У здоровых животных аналогичные показатели составили 78,4± 0,19 и 30,3±0,01% соответственно.
Количество тромбоцитов в ви больных было в пределах 174
кро-нор-
мы. Было отмечено ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена. Несколько медленнее АТ развивалась у телят под влиянием АДФ и ристомицина, но раньше, чем в контроле. Тромбиновая и адреналиновая АТ также возникали быстрее, чем в контроле и были равны 42,4±0,11 с и 75,6±0,16 соответственно (Р<0,01). Время развития АТ под влиянием сочетанного применения индукторов также было ускоренным для всех испытанных их комбинаций — ДДФ+адреналин, АДФ+коллаген,
адреналин+коллаген (табл. 2).
Течение диспепсии у телят носит сложный характер и сопровождается развитием тромбоцитопатии и активацией процесса свертывания крови. Патогенез диспепсии обуславливает сдвиги в соотношении ХС/ФЛ в мембранах тромбоцитов, что в совокупности с нарушениями пищеварения и всасывания способствует увеличению в кровотоке, а затем и в тромбоци-
Таблица 2 Агрегационная активность тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией, с
Показатель
Больные диспепсией
телята, n=153, М±т
Контроль, п=267, М±т
АДФ
Коллаген
Тромбин
Ристомицин
Адреналин
АДФ+адреналин
АДФ+коллаген
Адреналин+коллаген
33,0±0,12 25,3±0,21 42,4±0,11 26,2±0,13 75,6±0,16 20,0±0,12 18,4±0,09 20,3±0,07
39,0±0,28
Р<0,01 30,0±0,12 Р<0,01 54,0±0,2 Р<0,01 41,0±0,26
Р<0,01 97,0±0,45 Р<0,01 36,0±0,5 Р<0,01 27,0±0,09
Р<0,01 30,1 ±0,12 Р<0,01
тах содержания СМ, обуславливающих ослабление антиоксидантной защиты кровяных пластинок и повышение концентрации в них первичных и вторичных продуктов ПОЛ. В этих условиях у телят происходит активация тромбоцитов и тромбопластинообразования. Повы-
шение тромбогенного потенциала плазмы крови при диспепсии связано в первую очередь с активацией тромбоцитарных функций, а не с повышением уровней различных факторов свертывания, в т.ч. фибриногена. Активация фибринообра-зования, без сомнения, имеющая место при диспепсии, происходит в первую очередь на поверхности активированных тромбоцитов и носит всегда вторичный характер по отношению к их адгезии и агрегации.
Совокупность метаболических нарушений, изменения состава мембран тромбоцитов, повышение содержания в них СМ и усиление внут-
ритромбоцитарного ПОЛ приводит к повышению агрегации тромбоцитов в кровотоке под влиянием различных индукторов. Возможными механизмами этого усиления можно считать активизацию обмена ара-хидоновой кислоты с повышением в ней тромбоксанообразования, зарегистрированного в пробах переноса, и увеличение концентрации участвующего в процессе агрегации фактора Виллебранда, косвенно
оцененной по ускорению АТ с рис-томицином.
Исследование сочетания влияния индукторов на процесс АТ у больных телят показало их взаимопо-тенцирующее действие. Регистрация АТ под влиянием сочетания двух индукторов позволяет приблизиться к пониманию реальных условий кровотока у животных с диспепсией и свидетельствует о целесообразности назначения соответствующей терапии, способной нормализовать реологию крови.
Выявленные нарушения тромбо-цитарного гемостаза у телят с диспепсией нуждаются в адекватной коррекции, направленной на разрыв «порочных кругов», развивающихся при диспепсии.
Заключение
У новорожденных телят с диспепсией выявлено повышение агрегацион-ной функций тромбоцитов. В основе этих нарушений лежат сдвиги липидного спектра мембран тромбоцитов, повышение уровня в них средних молекул, активация перекисного окисления липи-дов плазмы и тромбоцитов, усиление синтеза в стенке сосудов фактора Вил-лебранда и интенсификация тромбокса-нообразования в кровяных пластинках. Активация тромбопластинообразования является ведущей причиной повышения свертывания крови у новорожденных телят с диспепсией. Коррекция нарушений тромбоцитарного звена гемостаза
должна включать в себя патогенетически обусловленный комплекс, способный лечить диспепсию и оптимизировать реологию крови одновременно.
ЛИТЕРАТУРА
1. Габриэлян Н.И., Липатова В.И. и
др. Скрининговый метод определения средних молекул в биологических жидкостях / Методические рекомендации. М, 1985. — 2. Гаврилов В.Б., Мишкоруд-ная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / / Лабор. дело, 1983. № 3. С. 33—36. — 3. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний / Под ред. Н.Н. Петрищева, Л.П. Папаян. СПб., 1999. — 4. Ермолаева Т.А., Головина О.Г., Морозова Т.В. и др. Программа клинико-лабо-раторного исследования больных тром-
боцитопатиями. СПб., 1992. — 5. Заха-рия Е.А., Кипах М.В. Упрощенный способ определения агрегации и дезагрегации тромбоцитов / / Лабор. дело, 1989. № 1. С. 36-38. — 6. Киселева Р.Е., Борчен-ко Р.В., Кузьмичева Л.В. Эндогенная интоксикация у телят при диарее // Ветеринария, 2005. № 12. С. 39-41. — 7. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии. Минск: Беларусь, 1982. — 8. Кубатиев А.А., Андреев С.В. Перекиси липидов и тромбоз / / Бюлл. эксперим. биол. и медицины, 1979. № 5. С. 414-417. — 9. Чевари С., Андял Т., Штренгер Я. Определение антиоксидан-тных параметров крови и их диагностическое значение в пожилом возрасте / / Лабор. дело, 1991. № 10. С. 9-13. — 10. Biggs R.,Doyglas A.S,,Macfarlane R.G. // J. Physiol, 1953. Vol. 119. № 1. P. 89-104. — 11.Schmith J.B., Jngerman C.M., Silver M.J. // J.Lab. Clin. Med, 1976. Vol. 88. № 1. P. 167-172.
SUMMARY
The increase in aggregate functioning of trombocytes in new-born calves having dyspepsia (scour) has been revealed. And the basis of these faults lies in deep displacement of lipidic composition of trombocytes membranes, middle molecules level increase in plasma and in blood plates, activation of peroxide lipidic oxidation in them strengthening of Villebrand's factor in vessels' sides and intensification of trombo-oxano formation in blood plates. Activation of trombo-plates formation is a principal reason of blood coagulation increase in new-born calves having scours. Correction of these faults should include pathogenetic complex allowing to decrease medium molecules level in organism and cure dyspepsia (scours) in calves.
