CC BY
26
УДК 619:616.34:636.5
ВОЗБУДИТЕЛИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ И ИХ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ
Портянко А.В. - аспирант, *Лыско С.Б. — к.в.н.
Сибирский НИИ птицеводства — филиал ФГБНУ «Омский аграрный научный центр» *ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"
Ключевые слова: кишечные инфекции, цыплята-бройлеры, мониторинг, возбудители, антибиотики, резистентность
Key words: intestinal infections, chicken-broilers, monitoring, pathogens, antibiotics, resistance
Птицеводство является одной из наиболее интенсивных и динамичных отраслей сельского хозяйства. Успешному экономическому развитию птицеводческой отрасли препятствуют инфекционные болезни [1, 2]. Значительную долю в структуре гибели птиц занимают кишечные инфекции, в этиологии которых большую роль играют ассоциации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов [9, 11, 12]. К факторам, обуславливающим их возникновение, относится высокая концентрация поголовья птиц на ограниченной территории, содержание птицы в помещениях с неудовлетворительными параметрами микроклимата. Неблагоприятными факторами, способствующие заболеванию, также является пониженная естественная резистентность организма быстрорастущих цыплят-бройлеров, а также несоблюдение нормативов кормления птицы, использование недоброкачественных кормов и воды, напряженная схема вакцинаций. Значительные экономические потери от кишечных инфекций связаны с гибелью и выбраковкой птицы, снижением прироста живой массы [4, 10, 13]. Сельскохозяйственные птицы могут являться носителями эпидемиологически опасных микроорганизмов, ведущими представителями которых являются сальмонеллы [8].
Основным способом борьбы с бактериальными болезнями птиц являются
антибиотики, преимущественно широкого спектра действия. Вследствии развития множественной лекарственной устойчивости у большинства возбудителей эффективность их снижается. Это обусловлено применением антибиотиков без учета чувствительности возбудителей и нарушениями инструкции по их применению [11]. Для проведения эффективных противоэпизоотических мероприятий необходим микробиологический мониторинг [7].
Цель исследования — изучить видовой состав возбудителей кишечных инфекций цыплят-бройлеров и их резистентность к антибиотикам.
Материалы и методы исследований. Исследования проведены в отделе ветеринарии ФГБНУ СибНИИП и на базе пяти птицеводческих хозяйств Омской области. Объектами иследования служили больные и погибшие цыплята-бройлеры с клиническими (диарея) и па-тологоанатомическими (энтериты) признаками поражения кишечника. Для прижизненной диагностики исследовали содержимое кишечника, для посмертной — соскобы со слизистой кишечника, кровь из сердца, кусочки органов.
Бактериологические исследования содержимого кишечника цыплят-бройлеров проводили согласно методическими рекомендациями [3]. Исследуемый материал разводили физиологическим раствором в соотношении 1:10, готовили
ряд последовательных десятикратных разведений. Из диагностически значимых разведений проводили посевы на пластинчатые питательные среды. Количество лактобактерий определяли на лактоагаре, бифидобактерий — на среде Блаурокка, энтеробактерии — на среде Эндо, энтерококков — на энтерококкагаре, стафилококков — на стафилококкагаре, гемолитических форм микроорганизмов — на кровянном агаре. После культивирования проводили количественный учет колоний.
Исследования проб от погибших цыплят проводили на простых (мясо-пептонный бульон и агар) и дифференциальных диагностических средах (с тиалуритом калия, Олькеницкого, Симмонса, агар Эндо-ГРМ, висмут-сульфит-агар, стафилококкагар, энтеро-коккагар, ксилозо-лизиновый дезокси-холатный агар). Морфологию бактериальных клеток изучали в мазках, окрашенных по Граму и Романовскому-Гимза. Биохимические свойства кишечной палочки изучали при помощи сред Гисса. Патогенность выделенных культур изучали на белых мышах [5, 6].
Определение чувствительности выделенных микроорганизмов проводили методом серийных разведений к 25 антибиотикам, из 9 фармакологических групп [8]. Для приготовления суспензий тест-штаммов использовали чистые суточные культуры трех видов возбудителей, выросшие на плотных питательных средах. Отбирали несколько
однотипных, изолированных колоний и петлей переносили в пробирку со стерильным питательным бульоном. Для инокуляции применяли суспензию микробных клеток, эквивалентную 0,5 по стандарту Мак-Фарланда, разведенную в 100 раз питательным бульоном до 106 КОЕ/мл. Результаты учитывали визуально в проходящем свете по определению наличия роста культур тест-штаммов в опытных и контрольных пробирках. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) антибактериального препарата устанавливали по наименьшей концентрации, которая подавляла видимый рост микроорганизмов. Чувствительными
считали культуры, для которых МПК < 12,5 мкг/мл, слабо чувствительными — МПК 12,5-50 мкг/мл, нечувствительными — МПК > 50,0 мкг/мл. Полученные данные обрабатывали методом статистики с использованием критерия Стьюдента.
Результаты исследований. За период 2014-2017 годов проведены бактериологические исследования 534 проб биоматериала от цыплят-бройлеров с признаками поражения кишечника.
В микрофлоре кишечника цыплят с признаками диареи присутствовали гемолитические бактерии, количество энтеробактерий было выше нормы на 2,02,5 1§ КОЕ/г, стафилококков — на 4,7-5,3 1§ КОЕ/г, энтерококков — на 0,4-0,7 1§ КОЕ/г, лакто- и бифидобактерий — ниже нормы на 0,2-1,0 и 0,2-1,2 1§ КОЕ/г соответственно (табл.1).
Таблица 1 — М икрофлора кишечника цыплят-бройлеров, 1§ КОЕ/г
Показатель Норма При диарее
Энтеробактерии 7,0 9,0-9,5
Гемолитические — 7,6-7,9
Стафилококки 3,0-4,0 8,7-9,3
Энтерококки 6,0-7,0 7,4-7,7
Лактобактерии 6,0-7,0 5,0-5,8
Бифидобактерии 7,0-9,0 5,8-6,8
Таким бразом, при кишечных инфекциях в микрофлоре кишечника цыплят-бройлеров наблюдали увеличение количества патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и снижение полезной микрофлоры. Возбудители, выделенные от цыплят-бройлеров с патологоанатомичекими признаками
поражения кишечника представлены на рисунке 1. Всего выделено 9 видов
Все микроорганизмы от погибших цыплят-бройлеров при кишечных инфекциях выделялись ассоциациями в 100% случаев. Определена эффективность антибактериальных препаратов из различных фармакологических групп к эпизоотологически значимым возбудителям кишечных инфекций цыплят-бройлеров (табл. 2). Количество резистентных культур Esherichia coli к тетрациклинам составляло 28,6-66,7% и фторхинолонам — 26,3-66,7%, пеници-линам — 18,7-85,7%, полимиксинам — 38,5-100,0%, аминогликазидам — 59,060,0%, левомицитинам — 57,9%, нитрофуранам — 50,0%. Наиболее чувствительна Esherichia coli к комплексным антибиотикам: Витроцилу и Энрофлон К, которые полностью подавляли видимый рост микроорганизмов. К остальным четырем комплексным антибиотикам резистетность
возбудителей.
Наиболее часто встречались патогенные виды Esherichia coli (32,8%), Enterococcus faecalis (26,6%) и Staphylococcus aureus (21,2%).
Культуры Citrobacter diversus, Proteus mirabilis, Enterobacter agglomerans, Citrobacter amalonaticus, Pseudomona aeruginosa, Salmonella enteritidis выделяли в 0,3-10,5% случаев.
■ Esherichia coli
■ Staphylococcus aureus
■ Enterococcus faecalis
■ Citrobacter diversus
■ Proteus mirabilis
■ Enterobacter agglomerans
■ Citrobacter amalonaticus
■ Pseudomona aeruginosa
■ Salmonella enteritidis
инфекций, выделенных от
возбудителя составляла 20,0-75,0%.
К группе фторхинолонов культуры Staphylococcus aureus резистентны в 14,350,0% случаев, аминогликозидов — 6080%, левомицитинов — 42,9%, нитрофуранов — 33,3%, полимиксинов
— 85,7%, комплексных — 25,0-50,0%, кроме антибиотиков Колмик Е, Долинк, Квиноприм, Коливет, проявившие 100%-ную активность.
Культуры Staphylococcus aureus были чувствительны к большинству антибиотиков групп тетрациклинов и пенициллинов.
Культуры Enterococcus faecalis резистентны к антибиотикам из группы полимиксинов в 70,0-100,0%, фтор-хинолонов — 18,0-100,0%, тетра-циклинов 9,1-100,0%, аминогликозидов
— 75,0-100,0%, левомицитинов — 50,0%, пеницилинов — 9,0-1,0%, комплексных —29,0-100,0%.
0,3 0,62,32 8
32,8
10,5
26,6
21,2
Рисунок 1 - Видовой состав возбудителей кишечных погибших цыплят-бройлеров, %
Таблица 2 — Активность антибиотиков на возбудителей кишечных инфекций цыплят-бройлеров, %
Фармакологическая группа Препарат Возбудитель
Esherichia coli Staphylococcus aureus Enterococcus faecalis
Нитрофураны Фуразолидон 50,0 66,7 0,0
Левомицетины Левомицетин 42,1 57,1 50,0
Полимиксины Коливет 0,0 100,0 0,0
Колистина-сульфат 61,5 14,3 30,0
Пенициллины Ветримоксин 50,0 100,0 91,0
Каримокс 14,3 100,0 82,0
Амоксицилин 81,3 83,3 100,0
Квестигин 28,6 100,0 83,0
Тетрациклины Гидродокс 33,3 100,0 31,0
Доксициклин 71,4 100,0 0,0
Польодоксин 50,0 100,0 90,9
Тетрациклин 55,6 42,9 0,0
Фторхинолоны Байтрил 33,3 50,0 92,0
Колмик-Е 66,7 100,0 30,0
Норфлоксацин 65,0 85,7 42,9
Энрофлоксацин 73,7 57,1 0,0
Энроксил 60,0 66,7 50,0
Комплексные Витроцил 100,0 75,0 71,0
Долинк 25,0 100,0 100,0
Квиноприм 40,0 100,0 63,0
Колифлокс 80,0 50,0 0,0
Трифлон 61,9 71,4 57,0
Энрофлон-К 100,0 66,7 100,0
Исключение составили некоторые комлексные антибиотики: Долинк, Энрофлон К. Высокую антибактериальную активность к Enterococcus faeca1is проявили препараты из пенициллинового ряда: резистентных культур более 18,0% не регистрировали. Наиболее низкую активность в отношении всех выделенных микроорганизмов проявляли
препараты из группы нитрофуранов, левомицитинов, аминогликозидов и полимиксинов. Изученные антибиотики проявляли неодинаковую активность к различным видам микроорганизмов, наблюдалась резистентность возбудителей к нескольким антибиотикам одновременно, что необходимо учитывать при ассоциативном течении болезней и
проведении лечебно-профилактических мероприятий.
Анализ устойчивости выделенных культур показал, что большинство антибиотиков, применяемых в птицеводческих хозяйствах обладали низкой антибактериальной активностью в отношении возбудителей кишечных инфекций птиц.
Заключение. В микрофлоре кишечника при диарее наблюдали увеличение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и снижение полезной микрофлоры. Видовой состав возбудителей кишечных инфекций цыплят-бройлеров на территории Омской области представлен девятью видами микроорганизмов, при этом их выделяли в 10 различных ассоциациях. Возбудители полирезистентны к антибиотикам, что необходимо учитывать при ассоциативном течении и проведении лечебно-профилактических мероприятий.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Борисенкова, А.Н. Особенности бактериальных болезней птиц на современном этапе развития промышленного птицеводства / А.Н. Борисенкова, О.Б. Новикова // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц: сб. науч. тр. Екатеринбург. - 2010. - Вып. 3. - С. 85-92.
2. . Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ: рег. № 13-502/1043 от 11.05.2004.
3. Кононов, А.Н. Этиология ассоциативных острых кишечных инфекций. / А.Н. Кононов, В.И. Заерко, А.Н. Гюнтнер // Вестник ветеринарии. - 2012. - № 4(63). - С. 66-68.
4. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции: Справочник / сост. Б.И. Антонов и др. - М.: Агропромиздат, 1986. - 352 с.
5. Методические указания по бактериологической диагностике коли-бактериоза (эшерихиоза) животных ветеринарии № 13-7-2/2117: утв. Департаментом Минсельхоза России, 27.07.2000.
6. Микробиологический мониторинг бактериальных болезней птиц. / С.Б. Лыско [и др.] // Птица и птицепродукты. -2016. - № 1. - С. 51-53.
7. МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. М.: ФЦГиЭ Рос-потребнадзора, 2004. - с. 53.
8. Поотянко, А.В. Бактерицидная активность пектинов на возбудителей кишечных инфекций птиц. / А.В. Портянко [и др.] // Птица и птицепродукты. - 2015. - № 3. - С.50-52.
9. Портянко, А.В. Профилактическая эффективность препарата «Пепидол Пэг» при ассоциативной кишечной инфекции у цыплят-бройлеров. / А.В. Портянко [и др.] // Вестник ветеринарии. - 2015. - № 1. - С. 55-58.
10. Плитов, И.С. Индикация патогенных бактерий, циркулирующих в птицеводческих хозяйствах / И.С. Плитов // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2011. - № 1. - С. 155-163.
11. Способ профилактики кишечных инфекций цыплят-бройлеров: пат. № 2602303 РФ / А.Б. Дымков [и др.]; № 2015147974/15 заявл. 06.11.15., опубл. 21.10.2016. Бюл. № 32.
12. Счисленко, С.А. Этиологическая структура возбудителей острых кишечных инфекций (ОКИ) птиц в птицеводческих хозяйствах Красноярского края. / С.А .Счисленко, Н.М. Ковальчук // Вестник КрасГАУ - 2010. - № 8. - С. 94-97.
13 . Мониторинг заразных болезней птиц в Омской области. / А.В. Портянко [и др.] // Птицеводство. - 2017. - № 9. - С. 3438.
ВОЗБУДИТЕЛИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ И ИХ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ
Портянко А.В., Лыско С.Б.
Резюме
Одно из лидирующих мест в структуре гибели птиц занимают кишечные инфекции, в их этиологии значительную роль играют ассоциации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Для проведения эффективных противоэпизоотических мероприятий существует необходимость проведения микробиологического мониторинга. Цель исследования — изучить видовой состав возбудителей кишечных инфекций цыплят-бройлеров и их резистентность к антибиотикам. Объектами иследования служили больные и погибшие цыплята-бройлеры с признаками поражения кишечника. За период 2014-2017 годов проведены бактериологические исследования 534 проб биоматериала. В содержимом кишечника цыплят-бройлеров с признаками диареи наблюдали увеличение количества патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (присутствовали гемолитические бактерии, энтеробактерий превышали норму на 2,0-2,5 lg КОЕ/г, стафилококков — на 4,7-5,3 lg КОЕ/г, энтерококков — на 0,4-0,7 lg КОЕ/г) и снижение полезной микрофлоры (лактобактерий было ниже нормы на 0,2-1,0 lg КОЕ/г и бифидобактерий на 0,2-1,2 lg КОЕ/г). От погибших цыплят-бройлеров при кишечных инфекциях выделено 9 видов возбудителей, представленных различными ассоциациями. Наибольший процент занимала ассоциация Esherichia coli + Staphylococcus аигеш + Enterococcus faecalis (49,1%). Анализ резистентности выделенных возбудителей кишечных инфекций птиц показал, что большинство антибиотиков, применяемых в птицеводческих хозяйствах обладали низкой активностью.
DISEASES OF INTESTINAL INFECTIONS OF CHICKEN-BROILERS AND THEIR RESISTANCE TO ANTIBIOTICS
Portyanko A.V., Lysko SB.
Summary
One of the leading places in the structure of bird death is intestinal infections, in their etiology a significant role is played by associations of pathogenic and opportunistic microorganisms. To carry out effective antiepizootic measures, there is a need for microbiological monitoring. The aim of the study was to study the species composition of causative agents of intestinal infections of broiler chickens and their resistance to antibiotics. Objects of research were sick and dead broiler chickens with signs of intestinal lesions. During the period 2014-2017, bacteriological studies of 534 samples of biomaterial were carried out. In the contents of the intestines of broiler chickens with signs of diarrhea, an increase in the number of pathogenic and opportunistic microorganisms was observed (hemolytic bacteria, enterobacteria exceeded the norm by 2.0-2.5 lg CFU/g, staphylococci by 4.7-5.3 lg CFU/g, enterococcus - 0.4-0.7 lg CFU/g) and a decrease in useful microflora (lactobacilli was below the norm by 0.2-1.0 lg CFU/g and bifidobacteria by 0.2-1.2 lg CFU/g). From the dead broiler chickens in intestinal infections, nine species of pathogens, represented by various associations, have been identified. The highest percentage was occupied by the association Esherichia coli + Staphylococcus aureus + Enterococcus faecalis (49.1%). Analysis of the resistance of isolated pathogens of intestinal infections of birds showed that most antibiotics used in poultry farms had low activity.
