CC BY
14
УДК 619:615-017:612.017
ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЯ ПЛАЦЕНТОЛИЗАТА НА ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ
ПОКАЗАТЕЛИ
Дарменова А.Г.- аспирант; Юсупов С.Р.- к.в.н., доцент; Зухрабов М.Г - д.в.н., профессор, зав. кафедрой Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана
Ключевые слова: карункулы, плацентолизат, лошадь, иммунная система, антиплацентарная кровь (АПК).
Key words: caruncles, placentolizat, horses, immune system, anti-placental blood (APB).
Препараты из тканей плаценты в последние годы чаще применяют для профилактики и лечения послеродовой патологии у коров. Препараты из плаценты влияют на скорость инволюции матки, так как в плаценте содержится множество биологически активных веществ, которые ускоряют проли-феративные процессы в эндометрии и повышают тонус мускулатуры матки коровы [1,2,6,7].
Целью наших исследований явилось получение плацентолизата и определение иммунологических изменений в крови лошадей на его введение. Плацентолизат получали путем фильтрации частиц карункулов и котиледонов коров, которые предварительно растирали в фарфоровой чашке пестиком и растворяли в 20 мл физиологического раствора натрия хлорида (0,9%).
Антиплацентарную кровь (АПК) получали после двукратного введения плаценто-лизата лошадям с интервалом 14 суток. Пла-центолизат из частиц карункулов и котиледонов, попадая в организм лошадей, воспринимался их иммунной системой как иммуностимулятор, и вырабатывались антитела.
Материалы и методы исследования. Исследования проводились на кафедре хирургии, акушерства и патологии мелких животных ФГБОУ ВО Казанская Государственная академия ветеринарной медицины, в ООО АФ «Колос» Тетюшского района Республики Татарстан и ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности».
Полученный путем фильтрации пла-центолизат вводили лошадям опытной группы (п=3) подкожно в области шеи двукратно с интервалом 14 дней в дозе по 20 мл и сравнивали с состоянием животных контрольной группы (п=3), которым подкожно в области шеи двукратно с интервалом 14 дней вводили физиологический раствор в дозе по 20 мл.
У животных контрольной и опытной
групп до и после введения плацентолизата и физиологического раствора определяли динамику иммунологических показателей.
Для иммунологических исследований кровь (18 проб) брали рано утром до кормления в вакуумные пробирки с ЭДТА-К-3: 6 проб - перед первым введением плацентоли-зата (до введения), 6 проб - перед вторым его введением (14-й день) и 6 проб - через 14 дней после второго введения плацентолизата (28-й день).
Для определения титра антител в сыворотке крови брали 10 мл крови из яремной вены лошадей в стерильные пробирки с активатором и оставляли в теплом помещении. Для определения Т- и В-лимфоцитов брали 10 мл крови из яремной вены лошадей в стерильные пробирки с ЭДТА-К-3. Нумерованные пробирки отправляли в лабораторию для исследований.
Определение Т- и В-лимфоцитов проводили методом розеткообразования, лизо-цимную активность сыворотки крови - с использованием культуры M. Lysodeikticus; бактерицидную активность - нефелометри-ческим методом по О.В. Смирновой, Т.А. Кузминой; фагоцитарную активность - по Кост и Стенко [3].
Для определения титра антител исследуемые сыворотки разводили в чистых сухих пробирках. Для каждой сыворотки использовали отдельную пипетку. Согласно инструкции, готовили соответствующие степени разведения сывороток. Сыворотки разводили 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 1:640. В отдельной пробирке готовили основное разведение сыворотки - 1:20, смешивая 0,1 мл исследуемой сыворотки с 0,9 мл 0,9% физиологического раствора натрия хлорида. В опытные пробирки (2, 3, 4, 5, 6) наливали по 0,5 мл 0,9% физиологического раствора натрий хлорида. Затем из пробирки с основным разведением сыворотки 0,5 мл ее переносили в вторую пробирку, смешивали с физиологиче-
ским раствором (1:40) и 0,5 мл переносили в третью пробирку (1:80), из третьего - в четвертую 0,5 мл (1:160), из четвертой - в пятую пробирки 0,5 мл (1:320) и из пятой - в шестую 0,5 мл (1:640), из шестой пробирки 0,5 мл выливали в сливную чашку, чтобы в каждой пробирке осталось по 0,5 мл разведенной сыворотки. Во все пробирки добавляли по 0,5 мл контрольного антигена (плацентолизата), смешивали, встряхивали и выдерживали в
термостате 4-6 ч (37 ), затем при комнатной температуре 14-16 ч [4,5].
Результаты исследований.
Результаты иммунологических исследований у лошадей перед первым введением плацен-толизата (до введения), перед вторым его введением (14-й день) и через 14 дней после второго введения плацентолизата (28-й день) указаны в таблице 1.
Таблица 1- Иммунологические показатели лошадей опытной группы на введение плацентолизата _(п=3)_
Показатели Опытная группа (введение плацентолизата)
до введения 14-й день 28-й день
В-лимфоциты, (%) 11,00±0,71 12,33±1,47 12,67±1,08
Т-лимфоциты, (%) 51,00±1,41 52,00±3,74 53,00±2,55
Лизоцимная активность, (%, лизиса) 8,83±0,89 10,17±1,08 11,83±1,14
Бактерицидная активность (%, лизиса E. coli) 50,33±2,48 63,67±5,35* 70,67±4,97
Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови, (%)
Фагоцитарный индекс 0,91±0,11 1,29±0,24* 1,46±0,17
Фагоцитарная активность 43,33±3,56 43,33±3,49 52,33±4,71
Фагоцитарное число 1,73±0,25 1,77±0,29 2,13±0,40
Примечание: * - P<0,05
Из данных таблицы 1 видно, что у лошадей опытной группы после первого введения плацентолизата (14-й день) количество В-лимфоцитов повысилось на 12% (с 11,00±0,71 до 12,33±1,47), а на 28-й день увеличилось на 15,2% (с 11,00±0,71 до 12,67±1,08) по сравнению с начальным показателем (до введения). Количество Т-лимфоцитов на 14-й день увеличилось на 2% (с 51,00±1,41 до 52,00±3,74), а на 28-й день этот показатель повысился на 4% (с 51,00±1,41 до 53,00±2,55) по сравнению с начальным показателем (до введения). Показатель лизоцимной активности на 14-й день вырос на 15,2% (с 8,83±0,89 до 10,17±1,08), а
на 28-й день на 34% (с 8,83±0,89 до 11,83±1,14) по сравнению с начальным показателем (до введения).
На 14-й день у животных опытной группы наблюдалось достоверное увеличение бактерицидной активности сыворотки крови на 26,5% по сравнению с начальным показателем (до введения) (с 50,33±2,48 до 63,67±5,35, P<0,05), а на 28-й день - на 40,4% (с 50,33±2,48 до 70,67±4,97). Фагоцитарная активность сыворотки крови после первого введения плацентолизата оставалась без изменения (43,33±3,56 и 43,33±3,49), а после повторного введения плацентолизата повысилась на 21% (с 43,33±3,56 до 52,33±4,71).
Таблица 2- Иммунологические показатели контрольной группы на введение 0,9% физиологиче-_ского раствора (п=3)_
Показатели Контрольная группа (введение физраствора)
до введения 14-й день 28-й день
В-лимфоциты, (%) 10,00±0,71 10,33±0,41 9,33±0,41
Т-лимфоциты, (%) 49,33±1,08 50,00±12,73** 42,00±0,71
Лизоцимная активность, (% лизиса) 9,00±2,12 9,5±0,57 9,5±0,64
Бактерицидная активность (% лизиса E. coli) 51,00±9,90 60,00±8,49 68,00±10,61
Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови, (%)
Фагоцитарный индекс 0,85±0,17 1,20±0,17 1,30±0,28
Фагоцитарная активность 43,00±11,31 44,00±12,02 46,00±4,96
Фагоцитарное число 1,5±0,42 1,40±0,35 1,60±0,36
Примечание: ** - P<0,005
Из данных таблицы 2 видно, что у лошадей контрольной группы после первого введения (14-й день) физиологического раствора количество В-лимфоцитов повысилось на 3,3% (с 10,00±0,71 до 10,33±0,41), а на 28-й день снизилось на 7% (с 10,00±0,71 до 9,33±0,41) по сравнению с начальным показателем (до введения); Т- лимфоцитов на 14-й день увеличилось на 1,3% (с 49,33±1,08 до 50,00±12,73), а на 28-й день снизилось на 14,8% (с 49,33±1,08 до 42,00±0,71); показатель лизоцимной активности на 14-й день после введения физиологического раствора увеличился на 5,5% (с 9,00±2,12 до 9,5±0,57)
и оставался без изменений на 28-й день (с 9,00±2,12 до 9,5±0,64) по сравнению с начальным показателем (до введения). На 14-й день у животных контрольной группы наблюдалось увеличение бактерицидной активности сыворотки крови на 17,6% (с 51,00±9,90 до 60,00±8,49), а на 28-й день на 33,3% (с 51,00±9,90 до 68,00±10,61), фагоцитарная активность сыворотки крови на 14-й день повысилась на 2,3% (с 43,00± 11,31 до 44,00±12,02), а на 28-й день повысилась на 7% (с 43,00± 11,31 до 46,00±4,96) по сравнению с начальным показателем (до введения).
Рисунок 1 - Динамика титра антител лошадей в опытной и контрольной группах
Из данных рисунка 1 видно, что введение плацентолизата вызывает ответную реакцию иммунной системы организма лошади и вырабатывает защитные антитела, обеспечивая формирование гуморального иммунитета. А при повторном введении плацентоли-зата иммунная система реагирует еще сильнее, чем при первом введении. Таким образом, при обнаружении антигена плацентоли-зата лимфоциты лошади начинают вырабатывать специальные белки - антитела, способные обезвредить эти антигены.
Заключение. Двукратное введение плацентолизата лошадям опытной группы приводит к значительному увеличению титра антител в сыворотке крови, количества Т- и В-лимфоцитов, а также бактерицидной, ли-зоцимной и фагоцитарной активности, что позволяет рекомендовать применение такой антиплацентарной крови (АПК) для ускорения регенерации карункулов и инволюции матки при лечении и профилактике послеродовых акушерско-гинекологических заболе-
ваниях коров.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Студенцов, А.П. Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения / А.П. Студенцов, В.С. Шипилов, В.Я. Никитин и др.; Под ред. В.Я. Никитина и М.Г. Миролюбова. - 7-е изд., перераб. и доп. -М.: Колос, 2012, С. 288-302.
2. Титова, В. и др. Воздействие на инволюцию матки у коров квантовым методом // Титова В., Насибов Ф., Байтлесов Е., Катю-ков В., Власова Г./ Молочное и мясное скотоводство, №1, 2006, С24-25.
3. Кондрахин, И.П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание / И.П. Кондрахин, Н.В. Кури-лов, А.Г. Малахов и др. - М.: Агропромиздат, 1985 - 287 с.
4. Колячев, Н.М. Руководство по микробиологии и иммунологии / Н.М. Колычев, В.Н. Кисленко, Р.Г. Госманов, В.И. Плешакова, О.П. Колесникова, Л.Ф. Зыкин, Л.Г. Белов. Новосибирск.: Арта, 2010. -255 с.
5. Костенко, Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, Е.И. Скрашевская, С.С. Ги-тельсон. - М.: Агропромиздат, 1989. - 272 с.
6.Gibert RO, Ship ST, Guard CL, Erb HN, Frajblat M: Prevalence of endometritis and
its effects on reproductive performance of dairy cows. Therigenology 2005, № 64: 1879-1888 p.
7. Cunningham, J., 2002. Physiology of reproductive system. In: textbook of veterinary physiology, 3rd ed., Webster B saunder Co., Philadelphia, pp: 402-403.
ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЯ ПЛАЦЕНТОЛИЗАТА НА ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ
Дарменова А.Г., Юсупов С.Р., Зухрабов М.Г.
Резюме
В результате двукратного введения плацентолизата лошадям опытной группы наблюдалось значительное увеличение титра антител в сыворотке крови, количества Т- и В-лимфоцитов, а также повышение бактерицидной, лизоцимной и фагоцитарной активности, что позволяет рекомендовать применение такой антиплацентарной крови (АПК) для ускорения регенерации карункулов и инволюции матки при лечении и профилактике послеродовых акушерско-гинекологических заболеваниях коров.
INFLUENCE OF INTRODUCTION OF PLATSENTOLIZAT ON IMMUNOLOGICAL INDICATORS
Darmenova A. G., Yusupov S. R., Zukhrabov M.G.
Summary
As a result of double introduction of the platsentolizat to horses of experienced group significant increase in an antiserum capacity in blood serum, the number of T - and V-lymphocytes and also rising of bactericidal, lizotsimny and fagotsitarny activity was observed that allows to recommend use of such anti-placental blood (agrarian and industrial complex) for acceleration of ontogenesis of caruncles and an involution of a uterus at treatment and prevention puerperal obstetric and gynecologic diseases of cows.
УДК 619:579.873.21:616.24-002.5:636.2
ДОТ-БЛОТ ИФА ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К МИКОБАКТЕРИЯМ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Джакаит Д.А - аспирант Казанская государственная академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана
Ключевые слова: Туберкулез крупного рогатого кота, ИФА, дот-блот ИФА, нитроцеллю-лозная мембрана, тест-система.
Key words: Bovine tuberculosis, ELISA, dot-blot ELISA, nitrocellulose membrane, test-system.
Одной из важнейших проблем в животноводстве являются инфекционные болезни, среди которых особое место занимает туберкулез крупного рогатого скота. В условиях современного сельскохозяйственного производства, особенно на крупных животноводческих комплексах, где концентрировано большое количество поголовья животных, проведение профилактических мероприятий по обеспечению надежного эпизоотического благополучия и разработка экспресс методов диагностики инфекционных болезней является практической необходимостью.
Наиболее значимыми в разработке экспресс-тестов для диагностики инфекционных болезней являются методы иммунохимиче-ского анализа [1]. При этом применяются различные технологии, среди которых немаловажную роль играют модифицированнные методы ИФА, среди которых наиболее перспективными являются методы ИФА в дот-блот варианте.
Целью нашей работы было разработать иммуноферментную тест-систему на основе дот- блот ИФА для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
