CC BY
98
5. Костенко, Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, Е.И. Скрашевская, С.С. Ги-тельсон. - М.: Агропромиздат, 1989. - 272 с.
6.Gibert RO, Ship ST, Guard CL, Erb HN, Frajblat M: Prevalence of endometritis and
its effects on reproductive performance of dairy cows. Therigenology 2005, № 64: 1879-1888 p.
7. Cunningham, J., 2002. Physiology of reproductive system. In: textbook of veterinary physiology, 3rd ed., Webster B saunder Co., Philadelphia, pp: 402-403.
ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЯ ПЛАЦЕНТОЛИЗАТА НА ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ
Дарменова А.Г., Юсупов С.Р., Зухрабов М.Г.
Резюме
В результате двукратного введения плацентолизата лошадям опытной группы наблюдалось значительное увеличение титра антител в сыворотке крови, количества Т- и В-лимфоцитов, а также повышение бактерицидной, лизоцимной и фагоцитарной активности, что позволяет рекомендовать применение такой антиплацентарной крови (АПК) для ускорения регенерации карункулов и инволюции матки при лечении и профилактике послеродовых акушерско-гинекологических заболеваниях коров.
INFLUENCE OF INTRODUCTION OF PLATSENTOLIZAT ON IMMUNOLOGICAL INDICATORS
Darmenova A. G., Yusupov S. R., Zukhrabov M.G.
Summary
As a result of double introduction of the platsentolizat to horses of experienced group significant increase in an antiserum capacity in blood serum, the number of T - and V-lymphocytes and also rising of bactericidal, lizotsimny and fagotsitarny activity was observed that allows to recommend use of such anti-placental blood (agrarian and industrial complex) for acceleration of ontogenesis of caruncles and an involution of a uterus at treatment and prevention puerperal obstetric and gynecologic diseases of cows.
УДК 619:579.873.21:616.24-002.5:636.2
ДОТ-БЛОТ ИФА ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К МИКОБАКТЕРИЯМ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Джакаит Д.А - аспирант Казанская государственная академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана
Ключевые слова: Туберкулез крупного рогатого кота, ИФА, дот-блот ИФА, нитроцеллю-лозная мембрана, тест-система.
Key words: Bovine tuberculosis, ELISA, dot-blot ELISA, nitrocellulose membrane, test-system.
Одной из важнейших проблем в животноводстве являются инфекционные болезни, среди которых особое место занимает туберкулез крупного рогатого скота. В условиях современного сельскохозяйственного производства, особенно на крупных животноводческих комплексах, где концентрировано большое количество поголовья животных, проведение профилактических мероприятий по обеспечению надежного эпизоотического благополучия и разработка экспресс методов диагностики инфекционных болезней является практической необходимостью.
Наиболее значимыми в разработке экспресс-тестов для диагностики инфекционных болезней являются методы иммунохимиче-ского анализа [1]. При этом применяются различные технологии, среди которых немаловажную роль играют модифицированнные методы ИФА, среди которых наиболее перспективными являются методы ИФА в дот-блот варианте.
Целью нашей работы было разработать иммуноферментную тест-систему на основе дот- блот ИФА для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
Материалы и методы. Использовали антигенные фракции M.bovis, М.аушт и M.nonchromogenes (ДМСО-антигены) полученные на кафедре биологической и неорганической химии Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана [3]. Исследуемые сыворотки крови получены из разных районов РТ. В качестве твердой фазы для постановки имму-ноферментной реакции и дот-блот ИФА в непрямом варианте использовали планшеты полистироловые для иммуноферментного анализа производства «Медполимер» (г.Санкт-Петербург) и нитроцеллюлозные мембраны соответственно.
Дот-блот ИФА на нитроцеллюлозных мембранах проводили путем точечного нанесения разведенного антигена на полоски НЦМ и инкубирования их с положительными и отрицательными сыворотками крови .
Для постановки дот-блот иммунофер-ментного анализа полоски нитроцеллюлоз-ной мембраны длиной 6 см и шириной 0,5 см маркировали карандашом на квадратики 5*5 мм для удобства при проведении реакции. Раствор антигена в карбонатном буфере с рН 9,6, наносили на каждый квадратик в объеме 2 мкл.
Для блокировки свободных от антигена мест, НЦМ инкубировали 0,01% раствором альбумина при комнатной температуре в течение 2-х часов. Полоски НЦМ промывали в твинфосфотном буфере, известном, в методике классического ИФА, как промывочный раствор. Рабочий титр и объем исследуемых сывороток крови определяли опытным путем, инкубировали 40 минут при комнатной температуре.
Раствор конъюгата и субстратной смеси наносили в объеме 2 мкл и инкубировали при комнатной температуре 20 и 7 минут соответственно. Реакцию останавливали стоп-реагентом (2Н раствор серной кислоты).
Результаты исследования и обсуждение. Всего исследовано 197 проб сывороток крови из различных по эпизоотической ситуации хозяйств РТ на выявление антител против возбудителей туберкулеза методом ИФА. Микобактериальные антитела выявляли против антигенов M.bovis, М.а^ит и M.nonchromogenes.
37 проб (18,8%) при иммунофермент-ном анализе показали положительнные результаты на M.bovis. Из них 21 - одновременно реагировали и с антигеном M.nonchromogenes.
121 проба из общего количества были исследованы в сравнении с результатами ту-беркулинизации, в т.ч. 46 (38,0%) - от реагирующих, 75 (62,0%) -нереагирующих на туберкулин коров. Результаты представлены в таблице 1.
При иммуноферментном анализе проб сывороток крови реагирующих на туберкулин животных, в 21 пробах обнаружены противотуберкулезные антитела в высоких титрах, а в 25 пробах получены отрицательные результаты, что составляет - 45,7% и 54,3% соответственно.
При анализе методом ИФА проб сывороток крови не реагирующих на туберкулин животных (75 проб) были получены следующие результаты: 2 (2,7%) пробы с положительной, 73 (97,3%) пробы с отрицательной реакцией.
Районы Всего проб ППД ИФА ИФА
(+) (-) (+) (-) (+) (-)
Балтанский 23 13 10 2 11 - 10
Мензелинский 7 7 - 4 3 - -
Камскаутинс-кий 85 20 65 14 6 2 63
Петречинский 6 6 - 1 5 - -
ИТОГО: в % 121 46 75 21 25 2 73
38,0 62 17,4 20,7 1,7 60,3
Таблица 1 - ИФА проб сывороток крови в сравнении с результатами аллергической пробы коров
На следующем этапе исследований теста на основе дот-блот ИФА при туберку-
оценивали диагностическую эффективность лезе крупного рогатого скота. Исследовали
46 проб сывороток крови из предыдущего ны
опыта. Результаты исследования представле-
в
таблице
2
Таблица 2 - Результаты дот-блот ИФА сывороток крови в сравнении с результатами
ИФА в классическим варианте
Районы Всего ИФА Дот-блот ИФА
(+) (-) (+) (-)
Балтанский 13 2 11 2 11
Мензелинский 7 4 3 4 3
Камскаутинский 20 14 6 12 8
Петречинский 6 1 5 1 5
ИТОГО 46 21 25 19 27
Результаты исследования проб сывороток крови на туберкулез крупного рогатого скота методом ИФА и дот-блот ИФА в целом совпали, только в 2-х пробах положительных в ИФА не обнаружен противотуберкулезных антител в дот-блот варианте.
Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота во многих странах остается напряженной. Туберкулез крупного рогатого скота продолжает распространяться во многих странах, а также стал проявляться в тех регионах, которые долгое время считались благополучными по этому заболеванию [5, 6, 7].
Своевременная диагностика и изолирование больных животных являются главными элементами борьбы с этим заболеванием. Внутрикожная туберкулиновая проба играет ключевую роль в диагностике и контроле туберкулеза крупного рогатого скота. Однако на сегодняшний день этот метод малоэффективен, что обусловлено его недостаточной чувствительностью и специфичностью.
Проведенными ранее исследованиями на разных видах животных показана эффективность серологической диагностики туберкулеза. При этом особое внимание уделяют на выбор микобактериальных антигенов, динамика выработки антител к которым в организме инфицированных животных зависит от стадии развития инфекционного процесса при туберкулезе [2,4].
По результатам нашей работы, установлено, что диагностика туберкулеза крупного рогатого скота методом иммунофер-ментного анализа с использованием ДМСО-антигенов является достаточно эффективным и дает дополнительную информацию к аллергическим исследованиям. Повышается эффективность диагностических мероприятий, что выражается в увеличении достовер-
ности выявления больных туберкулезом животных, а также животных инфицированных другими видами микобактерий.
Технологии ИФА в дот-блот варианте, эффективность которой, при диагностике инфекционных болезней, доказана многими исследователями [1], вполне можем использоваться и при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота.
Заключение. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о равноценной диагностической эффективности дот-блот ИФА и классической иммунофермент-ной реакции. Предложенный вариант ИФА может быть использован для экспресс анализа эпизоотической ситуации по туберкулезу в хозяйствах. Несмотря на то, что чувствительность дот-блот ИФА несколько ниже, он обладает рядом преимуществ в сравнении с классическим ИФА к которым относятся простота в постановке, доступность и возможность проведения в полевых условиях.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Бреус, Ю.В. Разработка и конструирование экпресс-теста для диагностики лейкоза крупного рогатого скота / Ю.В. Бреус, О.Д. Небещук, Я.В. Хоменко и др. // Вестник науки Казахского агротехнического университета им. С.Сейуфуллина. - 2013. - №4 (79). - С.15-21.
2. Шуралев, Э.А. Мультиплексный ИФА с хемилюминесцентной меткой для диагностики туберкулеза у кабанов / Э.А. Шу-ралев, М.Н. Мукминов, А.Р. Валеева и др. // Ветеринария. - 2013. - №2. - С. 25-28.
3. Якупов, Т.Р. Способ получения антигена для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, К.С. Хаер-тдинов, Р.А. Хамзин, И.К. Фахртдинов // Патент №2416428 от 20.04.2011.
4. Якупов, Т.Р. Эффективность ИФА
сывороток крови в системе диагностических мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, К.В. Усольцев // Материалы международной научной конференции, посвященной 70-летию зооинженер-ного факультета Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана. Казань. - 2000, С.140-144.
5. Delaune, D. Update on Mycobacterium bovis infections in France: 4 cases reports / D.Delaune, F.Janvier, C.Rapp, P.Gerome, F.Mechai, M.Fabre, C.Soler, A.Merens // Ann. Biol. Clin. (Paris). - 2012. - Vol. 70(2). - P.231-
6. Di Marco V. Epidemiological Significance of the Domestic Black Pig (Sus scrofa) in Maintenance of Bovine Tuberculosis in Sicily. / V.Di Marco, P.Mazzone, M.T.Capucchio, M.B.Boniotti et al // J. Clin. Microbiol. - 2012. -Vol. 50(4). - P.1209-1218.
7. Goodchild, A.V. Geographical association between the genotype of bovine tuberculosis in found dead badgers and in cattle herds. / A.V.Goodchild, G.H.Watkins, A.R.Sayers, J.RJones, R.S.Clifton-Hadley // Vet. Rec. -2012. - Vol. 170(10). - P.259.
ДОТ-БЛОТ ИФА ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К МИКОБАКТЕРИЯМ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Джакаит Д.А.
Резюме
Разработана диагностическая тест-система на основе дот-блот иммуноферментного анализа для проведения скринговых исследований на туберкулез крупного рогатого скота на полевых условиях.
По результатам исследований, установлено, что диагностика туберкулеза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа с использованием ДМСО-антигенов является досто-тачно эффективным и дает дополнительную информацию к аллергическим исследованиям.
Сравнительный анализ диагностической эффективности иммуноферментного анализа (ИФА) в классическом варианте и дот-блот иммуноферментного анализа при туберкулезе крупного рогатого скота, показал возможность использования дот-блот иммуноферментного анализа при выяснении эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в хозяйстве.
DOT-BLOT IMMUNOANALYSIS TEST-SYSTEM FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO
MYCOBACTERIA OF BOVINE TUBERCULOSIS
Jakait J.A.
Summary
We developed a diagnostic test-system on the basis of dot-blot enzyme-linked immunosorbent assay for conducting screening analysis for bovine tuberculosis under field conditions.
According to the research results, it was established that diagnosing bovine tuberculosis using enzyme-linked immunosorbent assay gives additional information to the tuberculin skin test.
Comparative analysis of the diagnostic efficacy of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in a classic variant and dot-blot enzyme-linked immunosorbent assay during the diagnosis of bovine tuberculosis, showed the possibility of using dot-blot enzyme-linked immunosorbent assay in ascertainment of epizootic situation of bovine tuberculosis in the farms.
УДК 576.8:591.557.81
