CC BY
7
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
99
как атеросклероз и структурные заболевания сердца. Ингибитор активации плазминогена 1 типа (plasminogen activator inhibitor — 1, PAI-1), экспрессируемый преимущественно эндотелиоцитами, является одним из ключевых маркеров и медиаторов КС [1 ]. Влияние клеточной сенесценции на адаптацию нативного сосуда к имплатан-ции сосудистых протезов и стентов остаётся не до конца изученным. Целью исследования служила оценка уровня и экспрессии PAI-1 в первичной культуре эндотелиаль-ных клеток пупочной вены человека (human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) при воздействии основных материалов имплантатов, применяемых в сердечно-сосудистой хирургии (ССХ): политетрафторэтилена — ПТФЭ, по-лиэтилентерефталата — ПЭТ, никелид титана — нитинола.
Первичные культуры HUVEC, выделенные по протоколу Crampton S.P. (2007) [2], подвергались инкубации с ПТФЭ, ПЭТ и нитинолом в течение 24 часов, после чего проводилась оценка экспрессии PAI-1 в лизате культуры клеток при помощи метода Вестерн-блот с использованием первичных кроличьих поликлональных антител к PAI-1 PA598307 (Thermo Fisher) и уровня PAI-1 в кондиционной среде при помощи иммуно-ферментного анализа с использованием антител TC12075 (Technoclone).
Вестерн-блот показал пониженную экспрессию PAI-1 в первичной культуре HUVEC, инкубированной с нитинолом, по сравнению с контролем (р=0,04). Отмечалась повышенная экспрессия PAI-1 при инкубации культуры эндотелиоцитов с ПЭТ, однако межгрупповые различия не были статистически значимыми (p>0,05); статистически значимых межгрупповых различий при оценке экспрессии PAI-1 при инкубации культуры HUVEC с ПТФЭ выявлено не было (p>0,05).
Средние значения уровня PAI-1 в кондиционной среде составили 165,21 нг/мл (1,88, ДИ 95% 164,17166,25) в группе контроля, 159,83 нг/мл (3,25, ДИ 95% 157,77-161,90) в группе ПЭТ, 166,33 нг/мл (2,39, ДИ 95% 165,00-167,65) в группе ПТФЭ и 165,06 нг/ мл (2,23, ДИ 95% 163,82-166,30) в группе нитино-ла. Статистически значимые различия получены между группами контроля и ПЭТ (р<0,001).
Выводы: воздействие материалов сосудистых им-плантатов характеризовалось пониженной экспрессией PAI-1 в первичной культуре HUVEC при воздействии нитинола и повышенной — при воздействии ПЭТ, однако при воздействии последнего повышения уровня PAI-1 в кондиционной среде не наблюдалось, что следует учитывать при in vitro и in vivo оценке адаптации нативно-го сосуда к сосудистым имплантатам.
ВЛИЯНИЕ СТРЕССОРНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ
НА ТЕЧЕНИЕ АУТОФАГИИ
В МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ
КЛЕТКАХ ЖИРОВОЙ ТКАНИ
А.П. Калинин1, Е.С. Зубкова1,
М.Ю. Меньшиков1, Е.В. Парфёнова1, 2
1 ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия
2 ФФМ МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: alexanderpkalinin@gmail.com
Ключевые слова: мезенхимальные стволовые клетки, ауто-
фагия, воспаление.
Одним из подходов в лечении заболеваний является клеточная терапия, самым широко используемым инструментом которой служат мезенхимальные стволовые
клетки (МСК), обладающие способностью контактным и паракринным образом воздействовать на регенеративные процессы, благодаря наличию широкого спектра мембранных рецепторов и секретируемых факторов. Наряду с множественными рецепторными, сигнальными, экспрессионными механизмами, обеспечивающими жизнеспособность и функционирование МСК, весьма важную роль в их жизнедеятельности играет аутофа-гия — высококонсервативный процесс, направленный на поддержание внутриклеточного гомеостаза посредством лизосомальной деградации различных макромолекул и органелл. Аутофагия является важным адаптационным механизмом клетки, поскольку обеспечивает её мономерами и макроэргами, необходимыми для синтеза новых жизненно важных молекул. Процессы ауто-фагии вовлечены в приспособление МСК к меняющимся условиям среды путём тонкой регуляции их дифференцирующего потенциала, секреторной и иммуномодулирую-щей активности, обеспечивающей жизненный цикл этих клеток. В условиях микроокружения, меняющегося при различных воздействиях, а также в процессе коммуникации с другими типами клеток, МСК могут изменять свой экспрессионный профиль и выполняемую ими функцию. Самым распространённым патологическим процессом можно считать воспалительную реакцию, сопровождающуюся образованием и высвобождением факторов, действие которых является частью стрессорного ответа.
В нашем исследовании мы разделили МСК на группы, которые по отдельности обрабатывали провоспа-лительными факторами, — липополисахаридом (ЛПС), фактором некроза опухоли альфа (ФНО-а) и интерлей-кином-17 (ИЛ-17), а также условно противовоспалительными факторами — полирибоинозиновой-полирибоци-тидиловой кислотой (Р(1:С)) и интерлейкином 4 (ИЛ-4). В качестве группы сравнения использовали интактные МСК. С помощью проточной цитофлуориметрии, ве-стерн-блоттинга и ПЦР мы показали, что обработка МСК ФНО-а приводит к значимому увеличению экспрессии белка секвестосомы 1 (БОБТМЦ главного адаптерного белка аутофагии. В МСК, обработанных ЛПС, усиливается активация белка лёгкой цепи 3 (МАР11_С3А), ключевого участника аутофагии. С помощью проточной цитоме-трии с использованием флуоресцентных зондов СуШЮ и дансил-кадаверина мы обнаружили усиление процесса аутофагии в МСК, поляризованных воспалительными факторами, и отсутствие такого усиления при противовоспалительной стимуляции клеток. Полученные данные, наряду с выявленными нами изменениями экспрессии про- и противовоспалительных факторов и цитокинов, дают возможность модулировать функции МСК путем воздействия на их микроокружение. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ№ 19-15-00384-П.
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА СОСТОЯНИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Ю.А. Калинина, Н.Н. Павличенко
ООО «Транс-Технологии», Санкт-Петербург, Россия e-mail: npavlichenko@alkorbio.ru
Ключевые слова: гемопоэтические стволовые клетки, пупо-винная кровь, банк крови.
Сейчас все чаще как источник гематопоэтических стволовых клеток (ГСК) рассматривается пуповинная кровь (ПК). Эти клетки имеют больший пролиферативный
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
