CC BY
5
голубики обыкновенной) на уровень свободных радикалов in vitro и процессы антиоксидантной защиты in vivo.
Водно-спиртовые экстракты были получены из плодов черники, клюквы, брусники, голубики, собранных в Сургутском районе Ханты-Мансийского округа Тюменской области Российской Федерации.
Изменение концентрации свободных радикалов in vitro после введения экстрактов было определено в тестах: DPPH [2,2-diphenyi-l -picryihydrazyl) и ABTS (2,2-а2тоЫз (3-ethylbenzthiаzоline)-6-sulfоnic аcid) [1]. Определено статистически значимое преимущество экстракта черники в ингибировании ABTS+ радикала.
PAT test использовали для оценки антиоксидантного потенциала плазмы крови на фоне введения экстрактов плодов рода Vaccinium. В наибольшей степени повышение антиоксидантной системы вызывают экстракты плодов голубики и черники.
Выраженность оксидативного гемолиза эритроцитов оценивали по реакции эритроцитов крыс на внесение в среду их инкубации HClO [2]. Факт снижения уровня гемолиза при воздействии HOCl на мембраны эритроцитов крыс, предварительно получивших полифенолы плодов экстрактов, коррелирует с ранее описанным защитным эффектом эпигаллокатехин галлата (EGCG) на эритроциты человека (RBC) и молекулярные модели его мембраны [3,4]. Следует указать, что и EGCG и ресвератрол, в качестве компонентов, входят в состав всех исследуемых полифенольных экстрактов северных плодов. Это обстоятельство позволяет предполагать, что именно механизм стабилизации мембран, выявленный в экспериментах с EGCG и ресвератролом, лежит в основе цитопротектор-ного действия экстрактов плодов рода Vaccinium, обнаруженного в условиях нашего эксперимента.
Предполагается, что полифенольные экстракты плодов исследуемых растений имеют потенциал влияния на оксидативный статус крови ввиду наличия антирадикальных свойств и способности повышать уровень анти-оксидантной защиты.
Литература:
1. R. Re, N. Pellegrini, A. Proteggente [et al.]. Free Radical Biology
and Medicine. - 1999. - Vol. 26. - P. 1231-1237.
2. Hawkins CL, Brown BE, Davies MJ Arch Biochem Biophys.
2001 Nov 15; 395(2). P.137-145.
3. Colina JR, Suwalsky M, Manrique-Moreno M, Petit K, Aguilar LF,
Jemiola-Rzeminska M, Strzalka K. Colloids Surf B Biointerfaces.
2019 Jan 1;173. P.742-750.
4. Ungarala, Ramakrishna et al. Antioxidants (Basel, Switzerland).
Vol. 11, 2, 294. 2022.
РОЛЬ СИГНАЛЬНОГО КАСКАДА
YAP1 В СТВОЛОВЫХ НИШАХ КЛЕТОК КОЖИ
ЧЕЛОВЕКА
Е.П. Калабушева, О.Л. Черкашина, Д.С. Аболин, О.С. Роговая, Е.А. Воротеляк
Институт биологии развития им. НК. Кольцова РАН, Москва, Россия
e-mail: Kalabusheva.e@gmail.com
Ключевые слова: эпидермальные кератиноциты, дермаль-ные фибробласты, YAP1, вертепорфин, дифференцировка.
Поддержание гомеостаза и стимуляция процессов регенерации кожи достигается путем реципрокных взаимодействий эпидермиса и дермы, реализуемых посредством активации сигнальных каскадов факторов
роста, цитокинов и молекул внеклеточного матрикса. Центральным звеном одного из таких сигнальных каскадов является белок УДР1. Активная форма УАР1 способна связываться с транскрипционными факторами и инициировать программы дифференцировки, пролиферации, фибротического или даже онкологического перерождения ткани. Мы исследовали экспрессию и активацию белка УДР1 в эпидермальных кератиноци-тах и дермальных фибробластах и сделали предположение о вкладе этого сигнального пути в эпителио-мезен-химные взаимодействия кожи человека.
Иммуногистохимическое окрашивание выявило единичные клетки с активной ядерной формой белка УДР1 в базальном слое эпидермиса и папиллярной дерме. Эпидермальные кератиноциты исследовали на моделях 20 и 30 культивирования. В монослойной культуре выявили ингибирование сигнального пути УДР1 при формировании конфлуэнтного монослоя. На модели живого эквивалента кожи показали взаимосвязь между гиперактивацией УДР1 и гипертрофией базального слоя эпидермиса. Аналогичный паттерн наблюдали в процессе регенерации ксенотрансплантированного лоскута кожи человека.
Тотальная фракция фибробластов дермы кожи человека в монослойной культуре была гомогенна по экспрессии УДР1, однако при помещении в трехмерные условия — кожные органоиды- разделялась на две субпопуляции. РОЭРПа-положительные клетки формировали центральное ядро органоида и не экспрессиро-вали УДР1, в то же время СЮ26 и РДР-положительные клетки являлись центром активного сигналинга УДР1, стимулируя его экспрессию даже в прилегающих РОЭ^а-клетках. В другой трехмерной модели культивирования при помещении в коллагеновый гель мы не наблюдали разделения фибробластов на субпопуляции. Ингибирование сигнального пути УДР1 посредством добавления вертепрофина также не приводило к клеточной сегрегации, однако препятствовало экспрессии сократительных белков и контракции коллагенового геля.
Наши результаты позволяют предположить существование специализированной субпопуляции фибробластов дермы, способной в некоторых условиях активировать сигнальный путь УДР1 в окружающих клетках. Подобная локальная активация может вносить вклад в поддержание пула стволовых клеток эпидермиса, а также стимулировать запуск посттравматической регенерации. Работа поддержана грантом РНФ № 21-74-30015.
ИЗУЧЕНИЕ МАРКЕРА И МЕДИАТОРА КЛЕТОЧНОЙ СЕНЕСЦЕНЦИИ В ПЕРВИЧНОЙ КУЛЬТУРЕ ЭНДОТЕЛИОЦИТОВ В ОТВЕТ НА ВОЗДЕЙСТВИЕ СОСУДИСТЫХ ИМПЛАНТАТОВ
Р.Е. Калинин, И.А. Сучков, Н.Д. Мжаванадзе, Н.В. Короткова, А.А. Крылов, А.В. Щулькин, Ю.В. Абаленихина, Е.А. Стрельникова, И.Ю. Суров, А.Д. Боженова, А.С. Захаров, Н.Д. Нозадзе
ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, Рязань, Москва
e-mail: nina_mzhavanadze@mail.ru
Ключевые слова: клеточная сенесценция, PAI-1, культура HUVEC, ПТФЭ, ПЭТ, нитинол, сосудистые имплантаты.
Клеточная сенесценция (КС) играет важную роль в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний, таких
как атеросклероз и структурные заболевания сердца. Ингибитор активации плазминогена 1 типа (plasminogen activator inhibitor — 1, PAI-1), экспрессируемый преимущественно эндотелиоцитами, является одним из ключевых маркеров и медиаторов КС [1 ]. Влияние клеточной сенесценции на адаптацию нативного сосуда к имплатан-ции сосудистых протезов и стентов остаётся не до конца изученным. Целью исследования служила оценка уровня и экспрессии PAI-1 в первичной культуре эндотелиаль-ных клеток пупочной вены человека (human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) при воздействии основных материалов имплантатов, применяемых в сердечно-сосудистой хирургии (ССХ): политетрафторэтилена — ПТФЭ, по-лиэтилентерефталата — ПЭТ, никелид титана — нитинола.
Первичные культуры HUVEC, выделенные по протоколу Crampton S.P. (2007) [2], подвергались инкубации с ПТФЭ, ПЭТ и нитинолом в течение 24 часов, после чего проводилась оценка экспрессии PAI-1 в лизате культуры клеток при помощи метода Вестерн-блот с использованием первичных кроличьих поликлональных антител к PAI-1 PA598307 (Thermo Fisher) и уровня PAI-1 в кондиционной среде при помощи иммуно-ферментного анализа с использованием антител TC12075 (Technoclone).
Вестерн-блот показал пониженную экспрессию PAI-1 в первичной культуре HUVEC, инкубированной с нитинолом, по сравнению с контролем (р=0,04). Отмечалась повышенная экспрессия PAI-1 при инкубации культуры эндотелиоцитов с ПЭТ, однако межгрупповые различия не были статистически значимыми (p>0,05); статистически значимых межгрупповых различий при оценке экспрессии PAI-1 при инкубации культуры HUVEC с ПТФЭ выявлено не было (p>0,05).
Средние значения уровня PAI-1 в кондиционной среде составили 165,21 нг/мл (1,88, ДИ 95% 164,17166,25) в группе контроля, 159,83 нг/мл (3,25, ДИ 95% 157,77-161,90) в группе ПЭТ, 166,33 нг/мл (2,39, ДИ 95% 165,00-167,65) в группе ПТФЭ и 165,06 нг/ мл (2,23, ДИ 95% 163,82-166,30) в группе нитино-ла. Статистически значимые различия получены между группами контроля и ПЭТ (р<0,001).
Выводы: воздействие материалов сосудистых им-плантатов характеризовалось пониженной экспрессией PAI-1 в первичной культуре HUVEC при воздействии нитинола и повышенной — при воздействии ПЭТ, однако при воздействии последнего повышения уровня PAI-1 в кондиционной среде не наблюдалось, что следует учитывать при in vitro и in vivo оценке адаптации нативно-го сосуда к сосудистым имплантатам.
ВЛИЯНИЕ СТРЕССОРНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ
НА ТЕЧЕНИЕ АУТОФАГИИ
В МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ
КЛЕТКАХ ЖИРОВОЙ ТКАНИ
А.П. Калинин1, Е.С. Зубкова1,
М.Ю. Меньшиков1, Е.В. Парфёнова1, 2
1 ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия
2 ФФМ МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: alexanderpkalinin@gmail.com
Ключевые слова: мезенхимальные стволовые клетки, ауто-
фагия, воспаление.
Одним из подходов в лечении заболеваний является клеточная терапия, самым широко используемым инструментом которой служат мезенхимальные стволовые
клетки (МСК), обладающие способностью контактным и паракринным образом воздействовать на регенеративные процессы, благодаря наличию широкого спектра мембранных рецепторов и секретируемых факторов. Наряду с множественными рецепторными, сигнальными, экспрессионными механизмами, обеспечивающими жизнеспособность и функционирование МСК, весьма важную роль в их жизнедеятельности играет аутофа-гия — высококонсервативный процесс, направленный на поддержание внутриклеточного гомеостаза посредством лизосомальной деградации различных макромолекул и органелл. Аутофагия является важным адаптационным механизмом клетки, поскольку обеспечивает её мономерами и макроэргами, необходимыми для синтеза новых жизненно важных молекул. Процессы ауто-фагии вовлечены в приспособление МСК к меняющимся условиям среды путём тонкой регуляции их дифференцирующего потенциала, секреторной и иммуномодулирую-щей активности, обеспечивающей жизненный цикл этих клеток. В условиях микроокружения, меняющегося при различных воздействиях, а также в процессе коммуникации с другими типами клеток, МСК могут изменять свой экспрессионный профиль и выполняемую ими функцию. Самым распространённым патологическим процессом можно считать воспалительную реакцию, сопровождающуюся образованием и высвобождением факторов, действие которых является частью стрессорного ответа.
В нашем исследовании мы разделили МСК на группы, которые по отдельности обрабатывали провоспа-лительными факторами, — липополисахаридом (ЛПС), фактором некроза опухоли альфа (ФНО-а) и интерлей-кином-17 (ИЛ-17), а также условно противовоспалительными факторами — полирибоинозиновой-полирибоци-тидиловой кислотой (Р(1:С)) и интерлейкином 4 (ИЛ-4). В качестве группы сравнения использовали интактные МСК. С помощью проточной цитофлуориметрии, ве-стерн-блоттинга и ПЦР мы показали, что обработка МСК ФНО-а приводит к значимому увеличению экспрессии белка секвестосомы 1 (БОБТМЦ главного адаптерного белка аутофагии. В МСК, обработанных ЛПС, усиливается активация белка лёгкой цепи 3 (МАР11_С3А), ключевого участника аутофагии. С помощью проточной цитоме-трии с использованием флуоресцентных зондов СуШЮ и дансил-кадаверина мы обнаружили усиление процесса аутофагии в МСК, поляризованных воспалительными факторами, и отсутствие такого усиления при противовоспалительной стимуляции клеток. Полученные данные, наряду с выявленными нами изменениями экспрессии про- и противовоспалительных факторов и цитокинов, дают возможность модулировать функции МСК путем воздействия на их микроокружение. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ№ 19-15-00384-П.
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА СОСТОЯНИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Ю.А. Калинина, Н.Н. Павличенко
ООО «Транс-Технологии», Санкт-Петербург, Россия e-mail: npavlichenko@alkorbio.ru
Ключевые слова: гемопоэтические стволовые клетки, пупо-винная кровь, банк крови.
Сейчас все чаще как источник гематопоэтических стволовых клеток (ГСК) рассматривается пуповинная кровь (ПК). Эти клетки имеют больший пролиферативный
