ВЛИЯНИЕ РАЗНЫХ ДОЗ ТИКАГРЕЛОРА НА АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

В качестве контрольной группы — 72 донора крови и ее компонентов. Выделение ДНК проводили из 5—10 мл крови и костного мозга с использованием стандартной солевой экстракции и с помощью набора реагентов «АтрЬЗепэ» (Россия) и в соответствии с инструкцией производителя. Концентрацию и чистоту ДНК оценивали спектрофотометрически. Мутацию ЛАК2 У617Р количественно определяли с помощью «Набора реагентов для обнаружения мутации У617¥ О/Т гена ЛАК2» («Синтол», Россия) в соответствии с инструкциями производителя. Полиморфизмы С1691А в гене ¥5 (мутация Лейдена), 020210А и Т165М в гене ¥2, С677Т и А1298С в гене МТОТК и (675)40/50 в гене РА1-1 с помощью разработанной нами мультиплексной аллель-специфической полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (АС-

ПЦР-РВ).

Результаты и обсуждение. У 86% пациентов с МПЗ (группа № 1) была обнаружена мутация в гене ЛАК2. В контрольной группе (№ 2) мутации в гене ЛАК2 не обнаружено. Распределение частот мутаций 01691А в гене Р5 (мутация Лейдена), 020210А и Т165М в гене ¥2, С677Т и А1298С в гене МТОТК и (675)40/50 в гене РА1-1 в группах № 1 и 2 представлено в таблице. В группе № 1 частота гетерозиготной мутации в гене Р5 составила 8,9%. Это более чем в 6 раз превышает аналогичное значение в группе № 2. В 1,74 раза частота гомозиготной мутации (675)40/50 в гене РА1-1 в группе № 1 оказалась больше, чем в группе № 2. Частоты гетерозиготной мутации Т165М в гене ¥2 у пациентов и доноров крови составили 28,9% и 4,4% соответственно. Таким образом, частоты

мутаций генов Р5, Р2 и РА11 статистически значимо различаются у пациентов с тромбозами, ассоциированными с МПЗ, и доноров крови и ее компонентов.

Заключение. Информация о наличии маркеров наследственной тромбофилии может иметь прогностическое значение для оценки риска тромботических осложнений у пациентов с МПЗ с мутацией ЛАК2 У617Р

Таблица. Встречаемость мутаций в генах тромбофилии у пациентов с МПЗ и тромбозами (группа № 1) и доноров крови и ее компонентов

группа № 2)

Мутация Вид мутации Частота мутации в группе №, % ODR/P

1 2

F 5 G1691A гетерозиготная 8,9% (4/45] 1,4(1/71) ODR=6,8 (0,7-63,2) PFisher= 0,07

гомозиготная 0 0

MTHFRC677T гетерозиготная 1^8% (8/45) 49,3% (35/71)

гомозиготная 6,7% (3/45] 8,5% (6/71) P,2=0,002

MTHFRA1298C гетерозиготная 60% (27/45) 46,5% (33/71)

гомозиготная 4,4% (2/45) 5,6% (4/71) P,2=0,4

PAI 1 (-675)4G/5G гетерозиготная 3^8% (17/45) 62% (44/71)

гомозиготная 44,4% (20/45) 25,4(18/71) P,2=0,04

F2G20210A гетерозиготная 4,4% (2/45) 2,8% (2/71)

гомозиготная 2,2% (1/45) 0 PP=0,4

F2T165M гетерозиготная 28,9% (13/45) 26,8% (19/71)

гомозиготная 4,4% (2/45) 7,0% (5/71) P/=0,8

Макаров М. С.

ВЛИЯНИЕ РАЗНЫХ ДОЗ ТИКАГРЕЛОРА НА АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO

ГБУЗ «НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения города Москвы»

Введение. Препараты-антиагреганты широко используются для предотвращения развития тромботических осложнений. Антитромботический эффект антиагрегантов достигается путем снижения способности тромбоцитов к активации на фоне сохранения их структурной целостности. Подбор эффективной дозы ан-тиагреганта имеет большое значение для клинической практики. В настоящее время все большее распространение получает препарат прямого действия тикагрелор, однако обоснование необходимых дозировок проводится без подробного исследования структурной целостности и функциональной активности тромбоцитов

Цель работы. Исследовать влияние разных доз тикагрелора на морфофункциональные характеристики тромбоцитов человека.

Материалы и методы. Исследовали тромбоциты венозной крови, взятойу 30 доноров компонентов крови. Анализ тромбоцитов проводили с помощью морфофункционального метода, включающего окрашивание тромбоцитов витальными флуорохромны-ми красителями с последующим их анализом во флуоресцентном микроскопе (Патент РФ № 2485502). В работе исследовали тромбоциты в присутствии 5—100 мг/л тикагрелора. Оценивали мор-фофункциональную активность тромбоцитов (МФАТ), в баллах (норма 35—60 баллов); долю тромбоцитов с гранулами, не адгези-рующих на стекле (%); долю тромбоцитов, способных в процессе адгезии формировать обширную ламеллу (%).

Результаты и обсуждение. Дозы 5 и 10 мг/л тикагрелора не оказывали видимого действия на адгезивную активность тромбоцитов — практически все биологически полноценные тромбоциты с гранулами активно адгезировали на стекле и формировали

ламеллу. При 15 мг/л доля адгезирующих клеток с ламеллой значительно снижалась и составила 27,5±1,9%, доля клеток, не способных адгезировать, — 34,6±2,3% соответственно. В опытах с 25 и 30 мг/л тикагрелора рост ламеллы полностью отсутствовал, одновременно с этим свыше 50% тромбоцитов с гранулами не контактировали со стеклом. Наиболее заметным этот эффект был в опытах с 30 мг/л, где доля тромбоцитов, не адгезирующих на стекле, составила 78,4±2,2%. В присутствии 35 мг/л тикагрелора доля тромбоцитов с гранулами, не способных адгезировать на стекле, значимо не отличалась от аналогичного показателя при 25 пг/мл (53,1±2,5%), при этом 10% тромбоцитов формировали ламеллу, т.е. эффект ингибирования роста ламеллы был уже меньше, чем при 25—30 мг/л тикагрелора. В условиях 5—35 мг/л тикагрелора уровень МФАТ тромбоцитов соответствовал норме. При дозах тикагрелора 50—100 мг/мл еще до контакта со стеклом в тромбоцитах с гранулами наблюдалось изменение морфологии, снижение МФАТ, т.е. 50—100 мг/л тикагрелора вызывали повреждение тромбоцитов с гранулами. При этом более 80% тромбоцитов с гранулами могли адгезировать на стекле, у 20—30% тромбоцитов с гранулами формировалась ламелла. Таким образом, избыточные дозы тикагрелора уже не оказывают желаемого блокирующего действия на тромбоциты и могут быть токсичными для тромбоцитов.

Заключение. Для блокировки адгезивной активности тромбоцитов без нарушения их структурной целостности наиболее эффективной является доза 30 мг/л тикагрелора. При концентрации тикагрелора 50 мг/л эффективность препарата резко снижается, одновременно с этим происходит повреждение структуры тромбоцитов.

Макунина Э. А., Соловьев М. В., Фирсова М. В., Шерстнев А. А., Абакумова А. В., Мамаева Е. А., Старцев А. А., Сурин В. Л.,

Ковригина А. М., Менделеева Л. П.

СОПОСТАВЛЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА MAGE-C1 И БЕЛКА MAGE-Cl У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ

В ДЕБЮТЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России

Введение. В настоящее время сохраняется необходимость течения множественной миеломы (ММ) и мониторинга отве-в поиске оптимизированных инструментов для прогнозирования та на терапию. Аберрантная экспрессия гена MAGE-C1 и белка