CC BY
0
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
проводился на оборудовании Института молекулярной биологии и биофизики, центр «Протеомный анализ» (Новосибирск, Россия). Общая РНК, включая miRNA, была получена с использованием реагента TRIzol (Ambion, США) в соответствии с инструкциями производителя. РНК транслировали в комплементарную ДНК с помощью miRNA-специфических праймеров структуры шпильки и обратной транскриптазы M-MuLV — RH («Биолабмикс», Россия). Уровень экспрессии miR203a был изучен методом ПЦР в реальном времени с использованием принципа TaqMan на оборудовании iCycler CFX96. В качестве внутреннего стандарта применялась малая ядерная РНК U6. Все реакции проводились в триплете. Данные были проанализированы методом 2-ACt. Статистическая обработка данных проведена с помощью программы Statistica (StatSoft, Inc., США).
Результаты и обсуждение. Уровень экспрессии гена miR203a был значительно выше (р<0,05) в микровезикулах у больных
с БМО, чему больных с прогрессией ХЖЛ. При оценке результатов в группе с ПЦО были получены существенные различия между всеми изученными субстратами данной группы и группы с прогрессией ХЖЛ. Не было никаких существенных различий между группой, которая достигла БЖО, и больными, которые достигли ПЦО, что указывает на значительную роль в прогнозе достижения полного цитогенетического ответа. Также была получена обратная корреляция между уровнем экспрессии гена т1^203а в миелоцитах, лимфоцитах и плазме костного мозга (р<0,05) и тяжестью фазы ХЖЛ.
Заключение. Результаты демонстрируют, что экспрессия т1^203уменьшается в зависимости от прогрессирования тяжести ХЖЛ, что может привести к снижению апоптоза опухолевых клеток, увеличению миграции и устойчивости к противоопухолевой терапии.
Лямкина А. С.1, Орлов П. С.2, Максимов В. Н.2, Воропаева Е. Н.2, Поспелова Т. И.1
АНАЛИЗ ДЛИНЫ ТЕЛОМЕР ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОЛЕЙКОЗЕ
Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России, 2ФГБУ «НИИ терапии и профилактической медицины» СО РАМН — филиал Федерального исследовательского центра Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук; Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук; Новосибирский национальный исследовательский государственный университет
Введение. Прихроническоммиелоидномлейкозе (ХЖЛ) в опре -деленной точке и в определенное время ВСК-АВЬ-положительные гемопоэтические стволовые кроветворные клетки претерпевают около 10 избыточных клеточных делений по сравнению с их здоровыми аналогами, что может быть подтверждено исследованием длины теломерных фрагментов хромосом. Длина теломер может коррелировать с оставшимся временем от хронической фазы до фазы прогрессии опухоли, то естьускоренное сокращение тело-мер можно расценить как признак неблагоприятного прогноза.
Цель работы. Оценить длину теломерных фрагментов хромосом крови (ДТЛкр) в группе больных с ХЖЛ по сравнению с пациентами без гемобластоза.
Материалы и методы. Мы провели первичную оценку ДТЛкр хромосом у 27 больных ХЖЛ, получавших таргетную терапию (средний возраст пациентов 50,5 года, женщин — 55,6%, мужчин — 44,4%). Группа женщин была более однородной: преобладали пациенты в ремиссии — большой молекулярный ответ и цитогенетический ответ у 53,3% больных, у мужчин преобладали первичные больные с прогрессирующими фазами заболевания — 58,3%. Контрольная группа стратифицирована по полу и возрасту. ДТЛкр исследована на основе методики К.Т. Са^Ьоп и соавт. (2002 г.), применялась количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени ^РСК). Данные проверяли на соответствие нормальному распределению с помощью критерия Колмогорова — Смирнова. Критическое значениеуровня статистической значимости принимали =0,05.
Результаты и обсуждение. Средний уровень ДТЛкр в группе пациентов с ХЖЛ был короче на 17%, чем в контрольной
группе, а медиана — на 39,6%. Распределение не соответствовало нормальному, для сравнения использованы непараметрические критерии. ДТЛкр была корочеу женщин с ХЖЛ, чем в контроле (в среднем на46,5%, р<0,001; асимптотическая значимость (2-сто-ронняя) в тесте Жанна — Уитни). У мужчин достоверных различий не получено (в среднем при ХЖЛ длина больше на 7,2%, но тем не менее медиана при ХЖЛ также меньше на 22,9%, чем в контроле). Существует ряд работ, показывающий взаимосвязь между стажем курения и риском развития ХЖЛ. Мы провели анализ ДТЛкр у больных с ХЖЛ и контрольной группой в зависимости от опыта курения. У курящих женщин ДТЛкр была меньше на 75,7%, чем в контроле (р=0,018). У мужчин таких же данных не получилось: ДТЛкр больше на 22,1%, чем в контроле. В группе некурящих мужчин данные, представленные в зарубежной литературе, подтвердились: ДТЛкр на 51,3% короче, чем в контроле, у женщин — короче на 43,1%. Получены различия в ДТЛкру мужчин при оценке взаимодействия 2 переменных ку-рение*ХЖЛ (р=0,024), различийуженщин не выявлено.
Заключение. Результаты указывают на укорочение ДТЛкр в группе больных ХЖЛ по сравнению с пациентами без гемобластоза. Неоднородные результаты у мужчин с ХЖЛ, вероятно, связаны с малой группой и преобладанием резистентных форм заболевания. Коме того, в литературе есть данные, что при прогрессирующих и резистентных формах течения ХЖЛ сохраняются агрессивные клоны лейкозных клеток судлиняющимися тело-мерами в результате повышенной активности теломеразы. В то же время медиана ДТЛкр у мужчин с ХЖЛ меньше, чем в контрольной группе, что соответствует данным литературы.
Макарик Т. В.1, Сабиров К. Р.1, Киценко Е. А.2, Степанова Е. А.1, Треглазова С. А.1, Февралева И. С.1, Куликов С. М.1, Судариков А. Б.1
ОЦЕНКА ПРОГНОСТИЧЕСКОГО ЗНАЧЕНИЯ МАРКЕРОВ ТРОМБОФИЛИИ У ПАЦИЕНТОВ С МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ
ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
]ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, 2ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского»
Введение. Одной из основных проблем клинического течения миелопролиферативных заболеваний (ЖПЗ) являются тромботи-ческие осложнения, которые проявляются нарушением микроциркуляции, артериальными и венозными тромбозами. По данным литературы, мутации в гене ЛАК2, которые часто ассоциируются с ЖПЗ, способствуют развитию венозных тромбозов. Даже при отсутствии признаков явного ЖПЗ значительная часть пациентов с тромбозами воротной (портальной вены) и тромбозами сосудов головного мозга несет мутацию ЛАК2 "Уб^Р и имеет риск повторных тромбозов. Известно, что наследственные тромбофильные состояния, такие как врожденная недостаточность антикоагулянтов (антитромбин, протеин С и протеин 8) и генетические мутации
(фактор V Лейден, протромбин 020210А и др.), играют важную роль в патогенезе венозных тромбозов. Однако исследования, изучающие потенциальный вклад этих мутаций в тромботический риск, предоставили лишь ограниченную информацию.
Цель работы. Оценка прогностического значения маркеров тромбофилии у пациентов с миелопролиферативными заболеваниями, обусловленными мутацией в гене ЛАК2, для выбора тактики лечения.
Материалы и методы. Обследовано 50 пациентов с ЖПЗ (ВОЗ, 2016 г.), прооперированных по поводу осложнений тромбоза воротной вены (кровотечения из варикозных вен желудка и пищевода) в ФГБУ «НЖИЦ гематологии» Жинздрава России.
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
В качестве контрольной группы — 72 донора крови и ее компонентов. Выделение ДНК проводили из 5—10 мл крови и костного мозга с использованием стандартной солевой экстракции и с помощью набора реагентов «АтрЬЗепэ» (Россия) и в соответствии с инструкцией производителя. Концентрацию и чистоту ДНК оценивали спектрофотометрически. Мутацию ЛАК2 У617Р количественно определяли с помощью «Набора реагентов для обнаружения мутации У617¥ О/Т гена ЛАК2» («Синтол», Россия) в соответствии с инструкциями производителя. Полиморфизмы С1691А в гене ¥5 (мутация Лейдена), 020210А и Т165М в гене ¥2, С677Т и А1298С в гене МТОТК и (675)40/50 в гене РА1-1 с помощью разработанной нами мультиплексной аллель-специфической полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (АС-
ПЦР-РВ).
Результаты и обсуждение. У 86% пациентов с МПЗ (группа № 1) была обнаружена мутация в гене ЛАК2. В контрольной группе (№ 2) мутации в гене ЛАК2 не обнаружено. Распределение частот мутаций 01691А в гене Р5 (мутация Лейдена), 020210А и Т165М в гене ¥2, С677Т и А1298С в гене МТОТК и (675)40/50 в гене РА1-1 в группах № 1 и 2 представлено в таблице. В группе № 1 частота гетерозиготной мутации в гене Р5 составила 8,9%. Это более чем в 6 раз превышает аналогичное значение в группе № 2. В 1,74 раза частота гомозиготной мутации (675)40/50 в гене РА1-1 в группе № 1 оказалась больше, чем в группе № 2. Частоты гетерозиготной мутации Т165М в гене ¥2 у пациентов и доноров крови составили 28,9% и 4,4% соответственно. Таким образом, частоты
мутаций генов Р5, Р2 и РА11 статистически значимо различаются у пациентов с тромбозами, ассоциированными с МПЗ, и доноров крови и ее компонентов.
Заключение. Информация о наличии маркеров наследственной тромбофилии может иметь прогностическое значение для оценки риска тромботических осложнений у пациентов с МПЗ с мутацией ЛАК2 У617Р
Таблица. Встречаемость мутаций в генах тромбофилии у пациентов с МПЗ и тромбозами (группа № 1) и доноров крови и ее компонентов
группа № 2)
Мутация Вид мутации Частота мутации в группе №, % ODR/P
1 2
F 5 G1691A гетерозиготная 8,9% (4/45] 1,4(1/71) ODR=6,8 (0,7-63,2) PFisher= 0,07
гомозиготная 0 0
MTHFRC677T гетерозиготная 1^8% (8/45) 49,3% (35/71)
гомозиготная 6,7% (3/45] 8,5% (6/71) P,2=0,002
MTHFRA1298C гетерозиготная 60% (27/45) 46,5% (33/71)
гомозиготная 4,4% (2/45) 5,6% (4/71) P,2=0,4
PAI 1 (-675)4G/5G гетерозиготная 3^8% (17/45) 62% (44/71)
гомозиготная 44,4% (20/45) 25,4(18/71) P,2=0,04
F2G20210A гетерозиготная 4,4% (2/45) 2,8% (2/71)
гомозиготная 2,2% (1/45) 0 PP=0,4
F2T165M гетерозиготная 28,9% (13/45) 26,8% (19/71)
гомозиготная 4,4% (2/45) 7,0% (5/71) P/=0,8
Макаров М. С.
ВЛИЯНИЕ РАЗНЫХ ДОЗ ТИКАГРЕЛОРА НА АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO
ГБУЗ «НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения города Москвы»
Введение. Препараты-антиагреганты широко используются для предотвращения развития тромботических осложнений. Антитромботический эффект антиагрегантов достигается путем снижения способности тромбоцитов к активации на фоне сохранения их структурной целостности. Подбор эффективной дозы ан-тиагреганта имеет большое значение для клинической практики. В настоящее время все большее распространение получает препарат прямого действия тикагрелор, однако обоснование необходимых дозировок проводится без подробного исследования структурной целостности и функциональной активности тромбоцитов
Цель работы. Исследовать влияние разных доз тикагрелора на морфофункциональные характеристики тромбоцитов человека.
Материалы и методы. Исследовали тромбоциты венозной крови, взятойу 30 доноров компонентов крови. Анализ тромбоцитов проводили с помощью морфофункционального метода, включающего окрашивание тромбоцитов витальными флуорохромны-ми красителями с последующим их анализом во флуоресцентном микроскопе (Патент РФ № 2485502). В работе исследовали тромбоциты в присутствии 5—100 мг/л тикагрелора. Оценивали мор-фофункциональную активность тромбоцитов (МФАТ), в баллах (норма 35—60 баллов); долю тромбоцитов с гранулами, не адгези-рующих на стекле (%); долю тромбоцитов, способных в процессе адгезии формировать обширную ламеллу (%).
Результаты и обсуждение. Дозы 5 и 10 мг/л тикагрелора не оказывали видимого действия на адгезивную активность тромбоцитов — практически все биологически полноценные тромбоциты с гранулами активно адгезировали на стекле и формировали
ламеллу. При 15 мг/л доля адгезирующих клеток с ламеллой значительно снижалась и составила 27,5±1,9%, доля клеток, не способных адгезировать, — 34,6±2,3% соответственно. В опытах с 25 и 30 мг/л тикагрелора рост ламеллы полностью отсутствовал, одновременно с этим свыше 50% тромбоцитов с гранулами не контактировали со стеклом. Наиболее заметным этот эффект был в опытах с 30 мг/л, где доля тромбоцитов, не адгезирующих на стекле, составила 78,4±2,2%. В присутствии 35 мг/л тикагрелора доля тромбоцитов с гранулами, не способных адгезировать на стекле, значимо не отличалась от аналогичного показателя при 25 пг/мл (53,1±2,5%), при этом 10% тромбоцитов формировали ламеллу, т.е. эффект ингибирования роста ламеллы был уже меньше, чем при 25—30 мг/л тикагрелора. В условиях 5—35 мг/л тикагрелора уровень МФАТ тромбоцитов соответствовал норме. При дозах тикагрелора 50—100 мг/мл еще до контакта со стеклом в тромбоцитах с гранулами наблюдалось изменение морфологии, снижение МФАТ, т.е. 50—100 мг/л тикагрелора вызывали повреждение тромбоцитов с гранулами. При этом более 80% тромбоцитов с гранулами могли адгезировать на стекле, у 20—30% тромбоцитов с гранулами формировалась ламелла. Таким образом, избыточные дозы тикагрелора уже не оказывают желаемого блокирующего действия на тромбоциты и могут быть токсичными для тромбоцитов.
Заключение. Для блокировки адгезивной активности тромбоцитов без нарушения их структурной целостности наиболее эффективной является доза 30 мг/л тикагрелора. При концентрации тикагрелора 50 мг/л эффективность препарата резко снижается, одновременно с этим происходит повреждение структуры тромбоцитов.
Макунина Э. А., Соловьев М. В., Фирсова М. В., Шерстнев А. А., Абакумова А. В., Мамаева Е. А., Старцев А. А., Сурин В. Л.,
Ковригина А. М., Менделеева Л. П.
СОПОСТАВЛЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА MAGE-C1 И БЕЛКА MAGE-Cl У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
В ДЕБЮТЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. В настоящее время сохраняется необходимость течения множественной миеломы (ММ) и мониторинга отве-в поиске оптимизированных инструментов для прогнозирования та на терапию. Аберрантная экспрессия гена MAGE-C1 и белка
