CC BY
19
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
Повышение содержания лейкоцитов в молочной железе, после стимуляции окситоцином, происходило за счет увеличения числа лимфоцитов. Проникновение их из крови в молочную железу и изменение гемато-молоч-ного барьера связано с действием окситоцина.
Во время лактации механизмы иммунной системы самки максимально направлены на защиту потомства и поддержание его иммунного статуса в первые дни жизни. Происходит этот процесс под непосредственным контролем нейрогуморальной регуляции. С молозивом и молоком новорожденный получает все питательные вещества и иммуноглобулины, необходимые для роста и развития организма. Но данные защитные факторы быстро элиминируют.
На основе наших исследований можно предположить, что клеточные факторы защиты являются составляющими колострального иммунитета, в результате которого у новорожденного обеспечивается стойкий и длительный иммунитет.
ОЦЕНКА ХРОНОСОПРЯЖЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ ПЛОТНОСТИ ПРОСТРАНСТВЕННОГО РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ТКАНЕВЫХ БАЗОФИЛОВ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ПОСЛЕРОДОВОМ ПЕРИОДЕ
Параскун А.А., Виноградов С.Ю., Штойко М.А., Чериков В.С.
ФГБОУ ВО «Ивановская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения РФ, Иваново, Россия
По данным популяционных исследований, в последние годы увеличивается распространенность заболеваний щитовидной железы у женщин во время беременности и лактации. В поддержании внутриорганного гомеостаза щитовидной железы принимают участие тканевые базо-филы, которые накапливают и выделяют широкий спектр биологически активных веществ, тем самым регулируя пролиферацию клеток, их дифференцировку, функциональную активность и межклеточные взаимодействия. Цель исследований — оценка хроносопряженности динамики плотности пространственного распределения тканевых базофилов (ТБ) и морфофункциональных параметров щитовидной железы (ЩЖ) в послеродовом периоде. Работа выполнена на 40 беспородных крысах-самках. Сроки эксперимента составили — 0, 1, 3, 5, 7, сутки после родов и лактации. Исследования с животными проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». После забоя у крыс отделяли обе доли ЩЖ. Одна доля подвергалась криостатному микротомированию, а другая — парафиновой проводке. Для оценки плотности пространственного распределения ТБ срезы окрашивали альциа-новым синим-сафранином в прописи J. Desaga и изучали с помощью микроскопа Биолам (об. 90, ок.10). Подсчитывали количество тканевых базофилов в поле зрения (10 полей зрения — 1 варианта статистического массива). При анализе результатов тучные клетки были разделены на основе сродства гранул к красителям на 3 группы: альцианофильные, миксные, сафранинофильные. Мор-фометрические исследования препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином, проводили с помощью анализатора изображений, используя программу ВИДЕО ТЕСТ
МАСТЕР. Содержание тироксина (Т4), трийодтиронина (Т3), тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке крови животных определяли методом ИФА. Статистическая обработка материала проводилась с использованием программ Microsoft Excel 2010, Statistica 6.0. Для выявления и анализа внутри- и межрегиональных сопряжений изменения оценочных параметров применялся непараметрический метод рангового корреляционного анализа Спирмена. В результате исследований изучена 361 ранговая корреляционная зависимость, из них 152 отражают колебания показателей с ТБ (28% достоверных). Динамику хроносопряжений ТБ между собой оценивают 37%, а с морфофункциональными параметрами ЩЖ 63%. Блок наиболее тесных зависимостей выявлен между общим количеством ТБ и показателями ЩЖ (32%): отрицательные («-») — с высотой тироцитов, площадью фолликулов; положительные («+») — с индексом накопления коллоида, содержанием ТТГ в сыворотке крови. В центральных зонах ЩЖ большим количеством значимых связей обладает изменение сафранинофильных ТБ («-» с высотой тироцитов, площадью фолликулов; «+» с уровнем Т3), в периферических участках железы — миксных ТБ («+» с индексом накопления коллоида и его оптической плотностью, содержанием Т4). Таким образом, корреляционный анализ демонстрирует хроносопряженность динамики плотности распределения ТБ и показателей функциональной активности ЩЖ.
ВЛИЯНИЕ ПСИХОЭМОЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ НА МЕТАСТАЗИРОВАНИЕ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЛЬЮИС У МЫШЕЙ
Попова Н.А.1, 2, Каледин В.И.2, Николин В.П.2, Амикишиева А.В.2, Ильницкая С.И.2
1 Новосибирский национальный исследовательский государственный университет, Новосибирск, Россия
2 ФИЦ«Институт цитологии и генетики» СО РАН, Новосибирск, Россия
Исследование условий и особенностей метастазиро-вания злокачественных опухолей представляется весьма актуальным, поскольку именно метастазы опухолей являются непосредственной причиной смертельных исходов онкологических заболеваний.
Не вызывает сомнений, что хронический стресс и сопровождающая его общая напряженность, которая перерастает в чувство повышенной тревожности и далее в депрессию, оказывает влияние на рост и ме-тастазирование злокачественных опухолей. Механизм этого феномена может реализоваться путем индукции психоэмоционального иммунодефицита. Ранее нами показано, что хронический стресс в виде 20-дневных ежедневных социальных конфронтаций в одинаковой степени усиливает рост аденокарциномы Льюис как у победителей в межсамцовых столкновениях, так и у побежденных. Однако число метастазов в легких при этом увеличивается только у побежденных. В использованной нами модели социальных конфликтов побежденные самцы имеют последствия ежедневных драк в виде повреждений кожи, что очевидно вызывает воспаление, которое в свою очередь может стать причиной иммунодефицита. Чтобы исключить эту возможность, мы изучали зависимость метастазирования от психоэмоционального статуса на поведенческой модели, в которой формирование соответствующего статуса про-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
исходит без физических повреждений. Использовали непредсказуемый мягкий стресс (НМС) включающий наклон клетки, лишение пищи или воды до 12 часов, ограничение подвижности на 1 час, тряска в вибрирующей установке 1 час, изъятие подстилки или мокрая подстилка. Ранее показано, что такой стресс провоцирует развитие депресивноподобного статуса у мышей и крыс. В результате было показано, что у мышей подвергшихся НМС, число метастазов опухоли Льюис в легких увеличено в 2 раза, по сравнению с контролем. Таким образом, сдвиг психоэмоционального состояния в негативную сторону оказывает влияние на процесс метастазирования. Это надо учитывать при ведении онкологических больных в клинике.
РОЛЬ ТРОФОБЛАСТИЧЕСКОГО р-ГЛИКОПРОТЕИНА В РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ Т-КЛЕТОК ИММУННОЙ ПАМЯТИ
Раев М.Б.1, 3, Литвинова Л.С.2, Юрова К.А.2, Дунец Н.А.2, Хазиахматова О.Г.2, Тимганова В.П.1, Бочкова М.С.1, Храмцов П.В.1, 3, Заморина С.А.1, 3
1ФГБУН«Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН, Пермь, Россия
2 ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет им. И. Канта, Калининград, Россия
3 ФГБОУВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет», Пермь, Россия
Трофобластический pi-гликопротеин (ТБГ) является одним из наиболее информативных маркеров формирования и функционирования фетоплацентарной системы. Невзирая на очевидный иммунорегуляторный потенциал ТБГ, его роль в регуляции Т-клеток иммунной памяти остается неизвестной. В то же время, присутствие фетоплацентарных антигенов в период беременности, модулирует Т-клеточную память, что имеет значение для формирования иммунной толерантности, а также для последующей беременности (Keiffer T.E. et al., 2016). Можно предположить, что ТБГ регулирует функциональную активность циркулирующего пула T-клеток памяти, потенциально способных к осуществлению антиген-специфических цитотоксических реакций в отношении антигенов эмбрионального происхождения.
Цель. Оценка роли ТБГ в регуляции экспрессии маркеров активации (CD25, CD28, CD71) и продукции IL-2 изолированной субпопуляцией Т-клеток памяти в системе in vitro.
Материалы и методы. Аутентичный нативный ТБГ человека получали авторским методом (Патент РФ № 2367449, Раев М.Б.). Монокультуры Т-клеток памяти (CD45RO+) получали методом иммуномагнитной сепарации с использованием технологии MACS® ("Miltenyi Biotec", Германия) из суспензии МПК здоровых доноров (n = 8). Выделенные клетки с фенотипом CD45RO+ (1 х 106кл/мл) культивировали в 48-луночных планшетах в полной питательной среде в течение 48 ч при 37 °С, 5% С02. В качестве активатора Т-лимфоцитов использовали T-Cell Activation/Expansion Kit human (анти-CD2/CD3/CD28 комплекс) (Miltenyi Biotec, Германия). Определение поверхностных молекул костимуляции и активации (CD71 FITC, CD8 PE, CD25 PE-Cy 5.5, CD28PE Cy7, CD4 APC, Miltenyi Biotec, Германия) на CD45RO+Т-клетках проводили на проточном цитофлуо-
риметре MACS Quant (Miltenyi Biotec, Германия). Содержание IL-2 в культуральных супернатантах оценивали иммуноферментным методом при помощи тест-систем «Вектор-Бест» (Россия). Статистическая обработка данных проводилась с помощью парного ¿-критерия Стью-дента.
Результаты. Первым этапом анализа данных стала оценка дифференцировки Т-клеток памяти (CD45RO+) по субпопуляциям CD4+ и CD8+. Установлено, что изолированные СD45RA-клетки в контрольных пробах имели следующее соотношение: CD4+ 68,12±4,11; CD8+ 25,95±5,32; CD4+CD8+ 0,549±0,161. Установлено, что ТБГ (10, 100 мкг/мл) снижал экспрессию CD25 в гейте CD45RO+CD4+ лимфоцитов, активированных анти-CD2/CD3/CD28 комплексом, но не влиял на экспрессию CD28 и CD71 этими клетками. Как известно, CD25 (а-цепь рецептора для IL-2) представляет собой маркер активации и тесно связан с продукцией IL-2. Одновременно ТБГ стимулировал аутокринную продукцию IL-2 CD45RO+ клетками, но это не приводило к усилению экспрессии CD25. IL-2 необходим для развития Т-регуляторных лимфоцитов, увеличение количества которых ассоциировано с успешной беременностью (Shumacher A et.al., 2009) и, возможно, именно они являются «мишенью» для IL-2, продуцируемого CD45RO-клетками под воздействием ТБГ. Важно отметить, что депрессивные эффекты ТБГ реализовались только на уровне CD4+ лимфоцитов, не затрагивая субпопуляцию CD8+, что согласуется с данными Keiffer T.E. (2016).
Таким образом, впервые установлена роль ТБГ в регуляции активности Т-клеток иммунной памяти, ассоциированная с подавлением экспрессии активационного маркера CD25 и стимуляцией продукции этими клетками IL-2. Полученные данные расширяют представления о роли ТБГ в формировании иммунной толерантности в период беременности.
Исследование поддержано грантом РФФИ 16-44-0049 и программой повышения конкурентноспособности («дорожной карты») и субсидии «Организация проведения научных исследований 20.4986.2017/ВУ» БФУ им. И. Канта.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ГЛИКАН-СВЯЗЫВАЮЩЕГО ПАТТЕРНА ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК МЫШИ И ЧЕЛОВЕКА
Рапопорт Е.М., Моисеева Е.В., Хайдуков С.В., Аронов Д.А., Пазынина Г.В., Цыганкова С.В., Бовин Н.В.
ФГБУН «Институт биоорганической химии
им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова»
РАН, Москва, Россия
Введение. В последнее время все большее значение приобретают исследования по созданию универсальных вакцин, направленных на активацию дендритных клеток (ДК). Особенно привлекательно использовать ДК в качестве мишени в вакцинах для терапии инфекционных заболеваний, вызванных бактериями и вирусами, которые характеризуются высокой генетической изменчивостью. У вирусов и бактерий ДК распознают патоген-ассоции-рованные молекулярные структуры (ПАМС). Дополнительная нагрузка вакцин лигандами лектинов, связывание последних с соответствующими ПАМС может при-
