CC BY
39
ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
2017 БИОЛОГИЯ Вып. 1
УДК 557.175.6
С. А. Заморинаa,c, Л. С. Литвиноваb, К. А. Юроваb, Н. А. Дунецb,
О. Г. Хазиахматоваь, В. П. Тимгановаa, М. С. Бочковаa, П. В. Храмцовc,
М. Б. Раевa,c
a Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь, Россия b Балтийский федеральный университет им. И. Канта, Калининград, Россия c Пермский государственный национальный исследовательский университет, Пермь, Россия
РОЛЬ ФЕТОПЛАЦЕНТАРНЫХ БЕЛКОВ В РЕГУЛЯЦИИ ПРОДУКЦИИ ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 НАИВНЫМИ Т-КЛЕТКАМИ И Т-КЛЕТКАМИ ПАМЯТИ
Изучено влияние физиологических концентраций фетоплацентарных белков - трофобластического Р 1-гликопротеина (ТБГ), хорионического гонадотропина (ХГ) и альфа-фетопротеина (АФП)) на продукцию интерлейкина-2 (ИЛ-2) изолированными CD45RA+ и CD45RO+- клетками в системе in vitro. Установлено, что на уровне наивных Т-клеток (CD45RA+) стимулирующий эффект на продукцию ИЛ-2 оказывал ХГ (10 и 100 МЕ/мл) и АФП (100 Ед/мл), но не ТБГ. В отношении прими-рованных Т-клеток памяти (CD45RO+) показано, что стимулирующий эффект демонстрировали ХГ (10 и 100 МЕ/мл) и ТБГ (1 и 10 мкг/мл), но не АФП. Таким образом, фетоплацентарные белки оказывают преимущественно стимулирующее действие на продукцию ИЛ-2 Т-клетками памяти.
Ключевые слова: хорионический гонадотропин; трофобластический Р1 -гликопротеин; альфа-фетопротеин; беременность; иммунная толерантность; Т- клетки памяти; ИЛ-2.
S. A. Zamorinaa,c, L. S. Litvinovab, K. A. Yurovab, N. A. Dunetsb,
O. G. Khaziakhmatovab, V. P. Timganovaa, M. S. Bochkovaa, P. V. Khramtsovc,
M. B. Rayeva,c
a Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms of the Ural Branch RAS, Perm, Russian Federation b Immanuel Kant Baltic Federal University, Kaliningrad, Russian Federation c Perm State University, Perm, Russian Federation
THE ROLE OF PLACENTAL PROTEINS IN THE REGULATION OF INTERLEUKIN-2 PRODUCTION BY NAIVE T-CELLS AND MEMORY T-CELLS
The effect of physiological concentrations of placental proteins - trophoblastic beta1-glycoprotein (PSG), human chorionic gonadotropin (hCG) and alpha-fetoprotein (AFP) on the production of interleukin-2 (IL-2) by isolated CD45RA+ and CD45RO+ - cells in an in vitro model has been studied. It was found that at the level of naive T memory cells (CD45RA+) stimulating effect on the production of IL-2 was provided by hCG (10 and 100 IU/ml), and AFP (100 U ml), but not by PSG. Regarding primed memory T cells (CD45RO+), the stimulatory effect showed hCG (10 and 100 IU/ml), and PSG (1 and10 ug/ml), but not AFP. Thus, placental proteins have primarily a stimulating effect on the production of IL-2 memory T-cells.
Key words: human chorionic gonadotropin (hCG); trophoblastic beta-1-glycoprotein (TBG); alpha-fetoprotein; pregnancy; immune tolerance; memory T cells; IL-2.
Введение
Известно, что физиологически протекающая беременность сопровождается изменениями, направленными на формирование иммунной толерантности к полуалогенному эмбриону. Одним из наиболее значимых механизмов формирования иммунной толерантности является супрессия Т-клеточной памяти в условиях постоянного воздей-
ствия антигенов эмбрионального происхождения [Кудряшова, Гасанова, 2011; Кадырова, 2014].
В последние годы было показано, что уровень функциональной активности Т-клеток определяется стадией их дифференцировки, характеризующейся различной экспрессией ряда функциональных и адгезионных молекул et а1., 2004]. В литературе имеются единичные работы по диф-ференцировке Т-клеток памяти при неосложнен-
© Заморина С. А, Литвинова Л. С., Юрова К А, Дунец Н. А, Хазиахматова О. Г., Тимганова В. П., Бочкова М. С., Храмцов П. В., Раев М. Б., 2017
104
ной беременности [Кадырова, 2014], а данные о функциональной активности Т-клеток памяти под воздействием белков зоны беременности отсутствуют. В то же время, очевидно, что при неослож-ненной беременности в периферической крови действуют факторы, приводящие к снижению активности циркулирующего пула T-клеток памяти, способных к осуществлению антиген-специфических цитотоксических реакций адаптивного иммунитета в отношении антигенов эмбрионального происхождения.
В 2008 г. методами протеомики продемонстрировано, что лишь несколько молекул регулируют иммунную толерантность матери, среди них - трофоб-ластический р1-гликопротеин (ТБГ), наряду с хорио-ническим гонадотропином (ХГ) и альфа-фетопро-теином (АФП) [Dong et al., 2008]. Эти белки позиционируются как иммуносупрессоры, и ряд их эффектов в отношении актуальных клеточных субпопуляций, вовлеченных в формирование иммунной толерантности, активно изучается [Martinez et al, 2013; Заморина, Раев, 2015; Dauven et al., 2016].
Исследование дифференцировки клеток памяти - методически довольно сложный процесс. Экспрессия различных изоформ молекулы CD45 позволяет разделить Т-лимфоциты на наивные Т-клетки и Т-клетки памяти. Молекула CD45 является трансмембранной тирозиновой протеинфосфа-тазой, а ее экспрессия на иммунокомпетентных клетках признана критическим регулятором сигнализации, опосредованной Т-клеточным рецептором (TCR) [Mustelin et al., 2003; McNeill et al., 2007].
Дифференцировка Т-клеток затрагивает состав внеклеточного домена CD45: в наивных клетках это полная комплектация (CD45RA, 220 кДа), по мере антигензависимой дифференцировки ряд доменов теряется, а продукт конечной модификации обозначают как CD45RO (180 кДа). Т-лимфоциты, экспрессирующие CD45RA+, позиционируются как наивные Т-клетки, а экспрессирующие CD45RO+ -как «примированные» Т-клетки памяти.
Наивные Т-клетки, экспрессирующие высокомолекулярные изоформы CD45, имеют высокую фосфатазную активность и поддерживают Т-клеточный рецептор (TCR) в примированном состоянии для распознавания антигена [McNeill et al., 2007]. Процесс активации наивных клеток довольно сложен и требует вовлечения TCR и кости-мулирующих молекул (CD28 и др.). Переход к низкомолекулярным изоформам — CD45RO при активации Т-клеток снижает фосфатазную активность рецептора CD45 и, как полагают, способствует ослаблению Т-клеточной сигнализации [Holmes, 2006]. В свою очередь, быстрый и усиленный ответ CD45RO+ клеток памяти на специфический антиген является их важнейшим функциональным отличием от их «наивных» предшест-
венников [Elyaman et. al., 2008; Селедцов и др., 2010].
Известно, что активация Т-лимфоцитов тесно связана с аутокринной продукцией интерлейкина-2 (ИЛ-2), который, в свою очередь, является одним из ключевых цитокинов, запускающим пролиферацию Т-клеток и их дифференцировку.
В связи с вышесказанным, целью исследования является изучение роли ТБГ, ХГ и АФП в регуляции продукции ИЛ-2 изолированными CD45RA+ и CD45RO- клетками в системе in vitro.
Материалы и методы
Объекты исследования. В работе использовали фракционированные мононуклеары периферической крови (МПК) практически здоровых доноров, которыми являлись небеременные женщины репродуктивного возраста (n=8). МПК получали центрифугированием в градиенте плотности фи-колл-верографина (1.077 г/см3) («Pharmacia», Швеция), после чего клетки отмывали и подвергали воздействию фетоплацентарных белков. В качестве контроля применяли пробу, где вместо белков добавляли ППС.
Сепарирование CD45RA+ и CD45RO+-
клеток. Для получения монокультур наивных Т-клеток (CD45RA+) из суспензии МПК был использован метод иммуномагнитной сепарации, в основе которого лежит технология MACS® («Miltenyi Biotec» Германия), основанная на использовании суперпарамагнитных биодеградируемых частиц MACS MicroBeads, конъюгированных с монокло-нальными антителами. Добавленные к взвеси клеток MicroBeads/CD45RA-частицы связываются с соответствующими рецепторами на поверхности клеток. После связывания клетки пропускаются через колонки MACS, заполненные ферромагнитным матриксом и помещённые в сепаратор MACS, генерирующий сильное магнитное поле для фиксации клеток, нагруженных MicroBeads, сохраняя их жизнеспособность. Клетки, не связавшие MicroBeads, удаляются путем промывания колонки буфером и позиционируются как негативная фракция, из которой вторым этапом выделяли CD45RO+-клетки при помощи соответствующих MicroBeads/ CD45RA.
Выделенные клетки с фенотипом CD45RA+ или CD45RO+ отмывали в среде RPMI-1640 («Sigma-Aldrich», США), затем оценивали их количество с помощью автоматического счётчика клеток (CountessTM Automated Cell Counter, «InVitrogen», США) с использованием красителя Тrypan blue 0.4% («InVitrogen», США). Жизнеспособность составляла не менее 95-98% от общего числа клеток. Отсутствие моноцитов (CD14+) и В-лимфоцитов (CD19+) в культурах CD45RA+ и CD45RO+ Т-клеток до культивирования подтверждали c помощью анализа поверхностных маркеров на проточ-
ном цитофлуориметре MACS Quant ("Miltenyi Biotec", Германия), согласно протоколам производителей. В эксперименте использовали клеточные культуры, содержание CD3+CD45RA+CD14-CD19-и CD3+CD45RO+CD14-CD19- Т-клеток в которых составляло в среднем 98.5 ± 1.5%.
Культивирование CD45RA+ и CD45RO+-клеток. CD45RA+ или CD45RO+ клетки (1х106 кл/мл) культивировали в 48-луночных планшетах в среде RPMI-1640 («Sigma-Aldrich», США), с добавлением 10%-ной эмбриональной телячьей сыворотки - ЭТС («Sigma», США), 10 мМ Hepes («ICN Рh.», США), 2 мМ L-глутамина («ICN Рh.», США) в течение 48 ч. при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% С02.
В работе использовали физиологические концентрации фетоплацентарных белков, соответствующие нормальной беременности - для ТБГ (получен в ИЭГМ УрО РАН Патент РФ № 2367449) -1 и 10 мкг/мл [Посисеева, Назаров, Татаринов, 2004], для ХГ (Московский эндокринный завод) 10 и 100 МЕ/мл [Cole, 2012], для АФП («Б^ле^», Россия) 10, 50, 150 Ед/мл [Gagnon et al., 2008].
В качестве активатора Т-лимфоцитов использовали T-Cell Activation/Expansion Kit human (Ac/Exp) («MiltenyiBiotec», Германия) - антибио-тиновые частицы MACSiBead™ с биотинилиро-ванными антителами против CD2+, CD3+, CD28+ человека. Нагруженные антителами частицы MACSiBead™ имитируют присутствие антигенпре-зентирующих клеток и активируют Т-клетки. Реагент Ас/Exp добавляли в пробы в количестве 5
мкл, которые содержали - 0.5х106 нагруженных антителами MACSiBeadтм частиц. Соотношение клеток и активирующих частиц составляло 1:2.
Оценка концентрации ИЛ-2. Содержание ИЛ-2 в культуральных супернатантах оценивали иммуноферментным методом при помощи тест-систем «Вектор-Бест», Россия. Измерение оптической плотности производили на многоканальном спектрофотометре Biohit ВР 800 (Финляндия).
Статистическая обработка данных проводилась с помощью парного /-критерия Стьюдента. Данные на рисунках представлены в виде М±с.
Результаты и их обсуждение
Установлено, что через 48 ч. инкубации в ин-тактных пробах CD45RА+ Т-лимфоцитов содержание ИЛ-2 в супернатантах клеточных культур было в 5.9 раз больше, чем в популяции CD45RО+-клеток (17.2±16.8 пг/мл; 2.88± 2.55 пг/мл, соответственно).
Добавление Т-клеточного активатора способствовало значительному увеличению концентрации ИЛ-2 в среде культивирования: в популяции CD45RA+Т-лимфоцитов - в 21.17 раза (р0<0.05), а в культуре CD45RO+ - в 86 раз (р0<0.05) (364.33±31.16 пг/мл; 286.4±52.55 пг/ мл, соответственно).
В целом, субпопуляции CD45RА+ и CD45RО+ секретировали одинаковый уровень ИЛ-2, достоверных различий между субпопуляциями не было обнаружено (рисунок).
CD45RA+
SOO
550
500
450
адо
= 350
cf зоо
Z50
§ 203
150
100
контр.
*
ХГ 100 МЕ/мл
ХГ 10 МЕ/мл
ТБГ 10 мкг/мл
ТБГ 1
мкг/мл
АФП 100 Ед/мл
АФП 50 Ед/мл
АФП 10 Ед/мл
CD45RO+
J гп ~Н —ь =1-
"ТГ 1
контр. ХГ 100 ХГ 10 ТБГ 10 ТБГ 1 АФП 100 АФП 50 АФП 10 МЕ/мл МЕ/мл мкг/мл мкг/мл Ед/мл Ед/мл Ед/мл
Влияние фетоплацентарных белков на продукцию ИЛ-2 изолированными CD45RA+ и CD45R0+-
клетками (n=8)
Установлено, что на уровне наивных Т-клеток памяти (CD45RA+) стимулирующий эффект на продукцию ИЛ-2 оказывал ХГ (10 и 100 МЕ/мл) и АФП (100 Ед/мл), но не ТБГ. Известно, что ХГ, являясь плацентарным аналогом лютеотропного гормона, в физиологических условиях продуцируется после оплодотворения клетками трофобласта. Гормон отличается широким спектром биологического действия, регулируя стероидогенез плаценты и плода, а также оказывая эффекты на уровне иммунной системы [Schumacher et al., 2009]. Максимальная концентрация ХГ в период гестации (~100 МЕ/мл) совпадает с экспрессией антигенов MHC I класса на клеточной поверхности эмбриона (I триместр), распознавание которых, как правило, приводит к процессам иммунного отторжения. В силу этого факта, ХГ считается одним из основных факторов, формирующих иммунную толерантность во время беременности. Известно, что ХГ контролирует дифференцировку Т-регуляторных лимфоцитов и ИЛ-17-продуцирущих лимфоцитов, а также активность NK-, NKT-клеток и фагоцитов [Замо-рина, 2013]. Тем не менее, роль ХГ в процессах дифференцировки Т-клеток памяти остается не исследованной. Тот факт, что ХГ повышает продукцию ИЛ-2 как наивными Т-клетками, так и при-мированными Т-клетками памяти, свидетельствует о том, что гормон активно участвует в регуляции активности этих субпопуляций.
АФП - это гликопротеин, синтезируемый в фе-тальной печени. В норме АФП может обнаруживаться в сыворотке эмбриона, начиная с 4-й недели беременности. Его концентрация достигает пика между 12 и 16-й неделями и затем постепенно снижается вплоть до рождения. Так как АФП проникает через плаценту, он может обнаруживаться в довольно высокой концентрации в сыворотке крови матери, достигая максимума между 32- и 36-й неделями беременности. Уровень АФП служит важным показателем при мониторинге антенатального периода. Экспериментальные исследования свидетельствуют об иммуносупрессорной активности этого белка [Черешнев и др., 2004]. В нашем исследовании показано, что АФП в высокой концентрации, соответствующей III триместру (100 Ед/мл), повышал продукцию ИЛ-2 только наивными Т-клетками памяти.
В отношении примированных Т-клеток памяти (CD45RO) показано, что стимулирующий эффект демонстрировали ХГ (10 и 100 МЕ/мл) и ТБГ (1 и 10 мкг/мл), но не АФП (рисунок).
ТБГ - онкофетальный белок, продуцируемый клетками цито- и синцитиотрофобласта во время беременности. В динамике беременности уровень ТБГ постепенно растет и достигает значений 200-
400 мкг/мл к III триместру, и он становится доминантным белком в сыворотке беременных. В то же время в сыворотке крови плода его уровень не превышает 1-2 мг/л [Посисеева, Назаров, Татари-нов, 2004].
ТБГ вносит существенный вклад в иммунные реакции матери, участвуя в формировании иммунологической толерантности к плоду, однако этот аспект его действия в отношении Т-клеток иммунной памяти не изучен. В нашем исследовании продемонстрировано, что ТБГ в концентрациях, экстраполированных с I триместра беременности, повышает продукцию ИЛ-2 примированными Т-клетками памяти.
Ключевая функция ИЛ-2 на уровне исследуемых субпопуляций заключается в обеспечении перехода антиген-активированных CD4+ и СD8+-лимфоцитов из G1 в S-фазу клеточного цикла, что, в конечном итоге, приводит к их пролиферации [Suares et а1., 2002; Литвинова и др., 2014]. В целом, ИЛ-2 способствует переходу CD45RA+-клеток в CD45RO+-клетки, которые непосредственно реализуют иммунный ответ на специфический антиген, что и является их важнейшим функциональным отличием от их «наивных» предшественников. В то же время, очевидно, что активация клеток памяти в период беременности - явление неоднозначное, поскольку если эти клетки активируются на фетальные антигены, то это может привести к отторжению эмбриона. Можно предположить, что в сыворотке беременных женщин есть факторы, нивелирующие эту активацию. В частности, известно, что Р-эстрадиол в концентрациях, соответствующих III триместру беременности, снижает экспрессию генов 0/11 и hTERT, а также и уровень ИЛ-2 в супернатантах [Хазиахматова, 2016]. По-видимому, физиологический смысл этих изменений, индуцированных р-эстрадиолом, подразумевает ограничение агрессивной иммунной реакции при вынашивании.
Кроме этого, при интерпретации данных необходимо учитывать фенотипическое разделение Т-клеток памяти на CD4+ и CD8+. Активация наивных CD8 Т-лимфоцитов завершается их трансформацией в цитотоксические Т-лимфоциты. Одновременно фенотип CD4+CD45RO+ объединяет в себе активированные Т-клетки памяти, Т-регуляторные лимфоциты и ИЛ-17-продуцирующие лимфоциты. Важно отметить, что ИЛ-2 необходим для развития Т-регуляторных лимфоцитов, увеличение количества которых ассоциировано с успешной беременностью ^итаЛег et а1., 2009]. Таким образом, повышение уровня ИЛ-2, секретируемого таргетными суб-
популяциями Т-клеток, имеет неоднозначное им-мунорегуляторное значение.
В ситуации in vivo уровень ИЛ-2 с наступлением беременности не изменяется в сравнении с небеременными, но повышается в случае спонтанного аборта [Vassiliadis et al., 1998]. Как известно, основными продуцентами ИЛ-2 являются CD4+ лимфоциты, которым в этой ситуации он необходим для дифференцировки в Т-регуляторные лимфоциты. Вероятно, с самых ранних сроков беременности, на системном уровне происходит активация CD4+-клеток под действием фетальных антигенов, необходимая для формирования иммунной толерантности. В то же время, при патологии проницаемость плацентарного барьера усиливается и это приводит к увеличению количества феталь-ных антигенов в кровотоке матери и соответственно, ведет к повышению уровня ИЛ-2 у женщин с угрозой прерывания беременности.
Для понимания процессов формирования иммунной толерантности важно понять, какова роль фетоплацентарных белков в регуляции иммунной памяти? В данной работе продемонстрировано, что ХГ в концентрациях, соответствующих таковым при беременности, повышает продукцию ИЛ-2 как наивными Т-клетками, так и примированными Т-клетками памяти. АФП стимулирует продукцию ИЛ-2 только в концентрации, соответствующей III триместру беременности и только на уровне наивных Т-клеток, вероятно, способствуя их трансформации в активированные Т-клетки памяти. В то же время, ТБГ в концентрациях, соответствующих I триместру (1 и 10 мкг/мл), стимулировал продукцию ИЛ-2 активированными Т-клетками памяти. Вероятно, в данном случае, ТБГ преимущественно воздействует на CD4+-лимфоциты, которые под воздействием аутокринного ИЛ-2 дифференцируются в Т-регуляторные клетки. В целом, фетопла-центарные белки оказывают преимущественно стимулирующее действие на продукцию ИЛ-2 наивными Т-клетками и Т-клетками памяти.
Исследование поддержано грантом РФФИ р_а 16-44-590049 и субсидией «Организация проведения научных исследований» (№ 603, БФУ им. И. Канта).
Библиографический список
Заморина С.А. Механизмы иммуномодулирующей активности хорионического гонадотропина: дис. ... д-ра биол. наук. Челябинск, 2013. 237 с. Заморина С.А., Раев М.Б. Изучение иммуномоду-лирующих эффектов трофобластического ß1-гликопротеина человека // Физиология человека. 2015. Т. 41(1). С. 117-123.
Кадырова Л.В. Дифференцировка Т-лимфоцитов в динамике беременности: автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2014. 19 с.
Кадырова Л.В., Сотникова Н.Ю. Сывороточный уровень IL-2 и IL-15 в динамике беременности // Мать и Дитя в Кузбассе. 2014. № 2. С. 46-48.
Кудряшова А.В., Гасанова Д.Д. Дифференцировка клеток памяти в популяции Т-хелперов при вызванной беременностью гипертензии // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2011. № 2-1(35). С. 40-41.
Литвинова Л.С. и др. Основные поверхностные маркеры функциональной активности Т-лимфоцитов // Медицинская иммунология. 2014. Т. 6, № 1. С. 7-26.
Посисеева Л.В., Назаров С.Б., Татаринов Ю.С. Трофобласт-специфический бета-гликопротеин в акушерстве и гинекологии. Иваново: Изд-во Иваново, 2004. 240 с.
Раев М.Б. Способ выделения и очистки трофобластического p-1-гликопротеина: пат. Рос. Федерация № 2367449, заявл. 21.02.2008, опубл. 20.09.2009, Бюл. № 26.
Селедцов В.И. и др. Клеточные механизмы генерации иммунологической памяти // Цитокины и воспаление. 2010. Т. 4. С. 9-15.
Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н. Иммунохимиче-ская идентификация нового в 1-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Бюл. экспе-рим. биол. и мед. 1970. Т. 69, № 6. С. 66-68.
Хазиахматова О.Г. Роль стероидных гормонов в дифференцировке Т-лимфоцитов: молекулярно-генетический и иммуно-морфологический аспекты: дис. ... канд. биол. наук. Томск, 2016. 142 с.
Черешнев В.А. и др. Альфа-фетопротеин. Екатеринбург, 2004. 376 с.
Cole L.A. HCG, the wonder of today's science // Reproductive Biology and Endocrinology. 2012. Vol. 10, № 24. P. 1-18.
Dauven D. et al. Immune modulatory effects of human chorionic gonadotropin on dendritic cells // Frontiers in Endocrinology. 2016. Vol. 7. P. 1-11.
Dong M. et al. The effect of trophoblasts on T lymphocytes: possible regulatory effector molecules-- a proteomic analysis // Cell Physiol. Biochem. 2008. Vol. 21, № 5-6. P. 463-472.
Elyaman W. et al. Distinct functions of autoreactive memory and effector CD4+ T cells in experimental autoimmune encephalomyelitis // Am. J. Pathol. 2008. Vol. 173, № 2. P. 411-422.
Gagnon A. et al. Obstetrical complications associated with abnormal maternal serum markers analytes // J. Obstet. Gynaecol. Can. 2008. Vol. 30, № 10. P. 918-949.
Holmes N. CD45: all is not yet crystal clear // Immunology. 2006. Ш. 117, № 2. P. 145-155.
Martinez F. et al. The role of pregnancy-specific glycoprotein 1a (PSGla) in regulating the innate and adaptive immune response // Am. J. Reprod. Immunol. 2013. Vol. 69, № 4. P. 383-394.
McNeill L. et al. The differential regulation of Lck kinase phosphorylation sites by CD45 is critical for T cell receptor signaling responses // Immunity. 2007. Vol. 27, № 3. P. 425-437.
Mustelin T. et al. Positive and negative regulation of T-cell activation through kinases and phosphata-ses // Biochem. J. 2003. Vol. 371. P. 15-27.
Sallusto F. et al. Central memory and effector memory T cell subsets: function, generation, and maintenance // Annu. Rev. Immunol. 2004. Vol. 22. P. 745-763.
Schumacher A. et al. Human chorionic gonadotropin attracts regulatory T cells into the fetalmaternal interface during early human pregnancy // J. Immunol. 2009. Vol. 9. P. 5488-5497.
Suârez A. et al. Generation of CD4+CD45RA+ Effector T cells by stimulation in the presence of cyclic Adenosine 5'-Monophosphate- Elevating Agents // J. Immunol. 2002. Vol. 169. P. 1159-1167.
Vassiliadis S. et al. Serum levels of pro- and antiinflammatory cytokines in non-pregnant women, during pregnancy, labour and abortion // Mediators of Inflammation. 1998. Vol. 7, № 2. P. 6972.
References
Chereshnev V.A. et al. Al'fa-fetoprotein [Alphafetoprotein]. Ekaterinburg, 2004. 376 p. (In Russ.).
Cole L.A. HCG, the wonder of today's science. Reproductive Biology and Endocrinology. V. 10, N 24 (2012): pp. 1-18.
Dauven D. et al. Immune modulatory effects of human chorionic gonadotropin on dendritic cells. Frontiers in Endocrinology. V. 7 (2016): pp. 111.
Dong M. et al. The effect of trophoblasts on T lymphocytes: possible regulatory effector molecules-- a proteomic analysis. Cell Physiol. Biochem. V. 21, N 5-6 (2008): pp.463-472.
Elyaman W. et al. Distinct functions of autoreactive memory and effector CD4+ T cells in experimental autoimmune encephalomyelitis. Am. J. Pathol. V. 173, N 2 (2008): pp. 411-422.
Gagnon A1. et al. Obstetrical complications associated with abnormal maternal serum markers ana-lytes. J. Obstet. Gynaecol Can. V. 30, N 10 (2008): pp. 918-49.
Holmes N. CD45: all is not yet crystal clear. Immunology. V. 117, N 2 (2006): pp. 145-155.
Kady'rova, L.V. Differencirovka T-limfocitov v di-namike beremennosti. Avtoref. dis. kand. med. nauk [Differentiation of T-lymphocytes in the dy-
namics of pregnancy. Abstract PhD]. Moscow, 2014. 19 p. (In Russ.).
Kady'rova L.V., Sotnikova N.Yu. [Serum level of IL-2 and IL-15 in the dynamics of pregnancy]. Mat' i ditja v Kuzbasse, N 2 (2014): pp.46-48. (In Russ.).
Kudryashova A.V., Gasanova D.D. [The differentiation of memory cells in a population of T-helper cells in pregnancy-induced hypertension]. Vestnik Ural 'skoj medicinskoj akademiceskoj nauki, N 2-1(35) (2011): pp. 40-41. (In Russ.).
Litvinova L.S., Gucol A.A., Soxonevich N.A. et al. [The main surface markers of functional activity of T-lymphocytes]. Medicinskaja immunologija, V. 6, N 1 (2014): pp. 7-26. (In Russ.).
Martinez F. et al. The role of pregnancy-specific glycoprotein 1a (PSG1a) in regulating the innate and adaptive immune response. Am. J. Reprod. Immunol. V. 69, N 4 (2013): pp. 383-394.
McNeill L. et al. The differential regulation of Lck kinase phosphorylation sites by CD45 is critical for T cell receptor signaling responses. Immunity. V. 27, N 3 (2007): pp. 425-437.
Mustelin T., Tasken K. Positive and negative regulation of T-cell activation through kinases and phos-phatases. Biochem. J. V. 371 (2003): pp. 15-27.
Posiseeva L.V., Nazarov S.B., Tatarinov Yu.S. Tro-foblast-specificheskij beta-glikoprotein v akusher-stve i ginekologii [Trophoblast-specific beta-glycoprotein in obstetrics and gynecology]. Ivanovo, Ivanovo Publ., 2004: 240 p. (In Russ.).
Raev M.B. Sposob vy'deleniya i ochistki trofoblas-ticheskogo fi-1-glikoproteina [The method of isolation and purification triobla-TIC of p-1-glycoprotein]. The patent of the Russian Federation N 2367449 from 21.02.2008. (In Russ.).
Sallusto, F. et al. Central memory and effector memory T cell subsets: function, generation, and maintenance. Annu. Rev. Immunol. V. 22 (2004): pp. 745-763.
Seledcov V.I., Litvinova L.S., Goncharov A.G. et al. [Cellular mechanisms of generation of immu-nological memory]. Citokiny i vospalenie, V. 4 (2010): pp. 9-15. (In Russ.).
Schumacher A. et al. Human chorionic gonadotropin attracts regulatory T cells into the fetalmaternal interface during early human pregnancy. J. Immunol. V. 9 (2009): pp. 5488-5497.
Suarez A. et al. Generation of CD4+CD45RA+ Effector T cells by stimulation in the presence of cyclic Adenosine 5'-Monophosphate- Elevating Agents. J. Immunol. V. 169 (2002): pp. 1159-1167.
Tatarinov Yu.S., Masyukevich V.N. [Immunochemical identification of a new p 1-globulin in the blood serum of pregnant women]. Bjulleten' ëksperimtal'noj biologii i mediciny, V. 69, N 6 (1970): pp. 66-68. (In Russ.).
Vassiliadis S. et al. Serum levels of pro- and antiinflammatory cytokines in non-pregnant women, during pregnancy, labour and abortion. Mediators of Inflammation. V. 7, N 2 (1998): pp. 69-72.
Xaziaxmatova O.G. Rol' steroidnych gormonov v dif-ferencirovke T-limfocitov: molekuljarno-geneticeskij i immuno-morfologiceskij aspekty. Diss. kand. boil. nauk [The role of steroid hormones in the differentiation of T lymphocytes: molecular-genetic and immuno-morphological aspects of. Diss. PhD]. Tomsk, 2016. 142 p. (In Russ.).
Zamorina S.A. Mechanizmy immunomodulirujuscej aktivnosti chorioniceskogo gonadotropina. Diss. dokt boil. nauk [Mechanisms of immunomodula-tory activity of human chorionic gonadotropin. Dokt. Diss.]. Chelyabinsk, 2013 (In Russ.).
Zamorina S.A., Raev M.B. [The study of immunomodulatory effects trophoblastic beta1-glycopro-tein of human]. Fiziologija celoveka, V. 41(1) (2015): pp. 117-123. (In Russ.).
Поступила в редакцию 12.12.2016
Об авторах
Заморина Светлана Анатольевна, доктор биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории экологической иммунологии
ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН ORCID: 0000-0002-6474-1487 614081, Пермь, ул. Голева, 13; mantissa7@mai1.ru; (342)2807794 доцент кафедры микробиологии и иммунологии ФГБОУВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» 614990, Пермь, ул. Букирева, 15
Литвинова Лариса Сергеевна, доктор медицинских наук, заведующая лабораторией иммунологии и клеточных биотехнологий ФГБОУВО «Балтийский федеральный университет им. И. Канта» ORCID: 0000-0001-5231-6910 236035, Калининград, ул. Боткина, 3; 1arisa1itvinova@yandex.ru; 8-9114820489
Юрова Кристина Алексеевна, кандидат биологических наук, мл. научный сотрудник лаборатории иммунологии и клеточных биотехнологий
ФГБОУВО «Балтийский федеральный университет им. И. Канта» ORCID: 0000-0001-6146-3330 236035, Калининград, ул. Боткина, 3; kristina_kofanova@mai1.ru; 8 9211038847
Дунец (Сохоневич) Наталия Александровна, кандидат биологических наук, мл. научный сотрудник лаборатории иммунологии и клеточных биотехнологий
ФГБОУВО «Балтийский федеральный университет им. И. Канта» ORCID: 0000-0001-9833-249Х 236035, Калининград, ул. Боткина, 3; nata1ia.sokhonevich@gmai1.com; 8 9062118823
Хазиахматова Ольга Геннадьевна, кандидат биологических наук, мл. научный сотрудник лаборатории иммунологии и клеточных биотехнологий
ФГБОУВО «Балтийский федеральный университет им. И. Канта» ORCID: 0000-0002-5525-3529 236035, Калининград, ул. Боткина, 3; hazik36@mai1.ru; 8 9062157372
About the authors
Zamorina Svetlana Anatol'evna, doctor of biology,
professor, senior researcher of laboratory of
ecological immunology
Institute of Ecology and Genetics of
Microorganism UB RAS
ORCID: 0000-0002-6474-1487
13, Golev str., Perm, Russia, 614081;
mantissa7@mail.ru; (342)2807794
associate professor of the Department of
microbiology and immunology
Perm State University. 5, Bukirev str., Perm,
Russia, 614990
Litvinova Larisa Sergeevna, doctor of medicine, Head of laboratory of immunology and cellular biotechnology
Immanuel Kant Baltic Federal University ORCID: 0000-0001-5231-6910 Kaliningrad, 3, Botkin str., Russia, 236035; larisalitvinova@yandex. ru; 8(4012)595595
Yurova Kristina Alekseevna, candidate of biology, Junior researcher of the laboratory of immunology and cellular biotechnology Immanuel Kant Baltic Federal University ORCID: 0000-0001-6146-3330 Kaliningrad, 3, Botkin str., Russia, 236035; kristina_kofanova@mail.ru; 8(4012)595595
Dunets Natalia Aleksandrovna, candidate of biology, Junior researcher of the laboratory of immunology and cellular biotechnology Immanuel Kant Baltic Federal University ORCID: 0000-0001-9833-249X Kaliningrad, 3, Botkin str., Russia, 236035; natalia.sokhonevich@gmail.com; 8(4012)595595
Khaziakhmatova Ol'ga Gennad'evna, candidate of biology, Junior researcher of the laboratory of immunology and cellular biotechnology Immanuel Kant Baltic Federal University ORCID: 0000-0002-5525-3529 Kaliningrad, 3, Botkin str., Russia, 236035; hazik36@mail.ru; 8(4012)595595
Тимганова Валерия Павловна, кандидат биологических наук, мл. научный сотрудник лаборатории экологической иммунологии ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН ORCID: 0000-0003-4581-1969 614081, Пермь, ул. Голева, 13; timganovavp@gmai1.com; (342)2807794
Бочкова Мария Станиславовна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории экологической иммунологии ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН ORCID: 0000-0001-5784-6224 614081, Пермь, ул. Голева, 13; krasnykh-m@mai1.ru; (342)2807794
Храмцов Павел Викторович, кандидат биологических наук, ассистент кафедры микробиологии и иммунологии ФГБОУВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» ORCID: 0000-0002-1707-4423 614990, Пермь, ул. Букирева, 15; khramtsovpave1@yandex. т
Раев Михаил Борисович, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории экологической иммунологии ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН ORCID: 0000-0001-6882-4928 614081, Пермь, ул. Голева, 13; mraev@iegm.ru; (342)2807794
профессор кафедры микробиологии и иммунологии
ФГБОУВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» 614990, Пермь, ул. Букирева, 15
Timganova Valeriya Pavlovna, candidate of biology, Junior researcher of the laboratory of ecological immunology Institute of Ecology and Genetics of Microorganism UB RAS ORCID: 0000-0003-4581-1969 13, Golev str., Perm, Russia, 614081; timganovavp@gmail.com; (342)2807794
Bochkova Maria Stanislavovna, candidate of biology, researcher of the laboratory of ecological immunology
Institute of Ecology and Genetics of Microorganism UB RAS ORCID: 0000-0001-5784-6224 13, Goleva str., Perm, Russia, 614081; krasnykh-m@mail.ru; (342)2807794
Khramtsov Pavel Viktorovich, candidate of
biology, assistant of the Department of
microbiology and immunology
Perm State University
ORCID: 0000-0002-1707-4423
15, Bukirev str., Perm, Russia, 614990;
khramtsovpavel@yandex. ru
Rayev Mikhail Borisovich, doctor of biology, leading researcher of the laboratory of ecological immunology
Institute of Ecology and Genetics of
Microorganism UB RAS
ORCID: 0000-0001-6882-4928
13, Golev str., Perm, Russia, 614081;
mraev@iegm.ru; (342)2807794
professor of the Department of microbiology and
immunology
Perm State University. 15, Bukirev str., Perm, Russia, 614990
