CC BY
9
УДК 615.28.015.4:612.112.IS
ВЛИЯНИЕ ПЕСТИЦИДОВ НА СПЕЦИФИЧЕСКИЙ ЦИТОЛЕЙКОЛИЗ И ЛЕЙКЕРГИЮ КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТУБЕРКУЛИНОВОЙ АЛЛЕРГИИ
Канд. мед. наук Д. М. Недопрядко, Г. И. Фридман
Кафедра общей гигиены и кафедра микробиологии с гистологией медицинского факультета Ужгородского университета и экспериментальный отдел Ужгородского филиала Одесского научно-исследовательского института курортологии
Влияние пестицидов на аллергическую реактивность и, в частности, на аллергические реакции замедленного типа изучено недостаточно. Между тем аллергические реакции лежат в основе многих патологических процессов (А. Д. Адо, и др.), все более возрастает удельный вес аллергических синдромов и заболеваний, в механизме развития которых определенную роль играют химические и другие факторы внешней среды (Б. Г. Стоянов, и др.). В наших предыдущих исследованиях (Г. И. Фридман; Г. И. Фридман и Д. М. Недопрядко) установлено, что пестициды с различным меха-** низмом действия (севин, хлорофос и ДДТ) не влияют на специфичность процесса сенсибилизации, однако при их энтеральном введении изменяются интенсивность и динамика аллергических реакций кожи, фагоцитарная реакция лейкоцитов и активность ферментативных реакций клеточных элементов белой крови.
В настоящем сообщении представлены материалы об участии клеточных элементов белой крови в аллергических реакциях, влиянии пестицидов на процессы формирования аллергического воспаления, возникновение специфической алигерации лейкоцитов и клеточную реактивность сенсибилизированного организма.
Исследования проводились на 78 морских свинках, сенсибилизированных вакциной БЦЖ (1 мг) и получавших энтерально хлорофос и ДДТ однократно в дозах 175 и 100 мг/кг соответственно. В указанных дозировках пестициды не вызывали каких-либо видимых проявлений интоксикации. Эксперименты осуществлялись в 3 вариантах с различным сочетанием во времени сенсибилизации и введения пестицидов. Пестициды вводили: 1) за 1 & сутки до сенсибилизации (1-я группа животных), изменяя тем самым иммунобиологический
фон, на котором развивался процесс сенсибилизации; 2) в период формирования аллергии — на 7-й день сенсибилизации (2-я группа); 3) на 7-й неделе сенсибилизации после аллергической перестройки, т. е. когда ответные реакции на ядохимикаты развивались у животных на фоне сформировавшейся гиперчувствительности замедленного типа (3-я группа). Туберкулиноцитолейколиз (показатель повреждаемости нейтрофилов крови — ППН) определяли по В. А. Фрадкину, агломерацию лейкоцитов — по Fleck в модификации А. Н. Маца, В. Е. Тугановой и соавт. Аллергическое состояние организма in vitro и интенсивность аллергической инфильтрации кожи при введении туберкулина 1:10 изучали у всех животных до сенсибилизации, на 7, 15, 30 и 45-й день после сенсибилизации, а также до энтерального введения пестицидов и на следующий день после него.
Всех животных обследовали до их сенсибилизации; таким сбразом, на основании цитолейкоза и лейкергии крови определены средние показатели. Животные контрольной группы были сенсибилизированы вакциной БИЖ, но не получали пестицидов. Результаты каждой серии исследований обрабатывали вариационно-статистическим методом по Фишеру — Стьюденту, достоверность различий устанавливали методом частотного анализа, степень корреляции оценивали и ее достоверность выявляли методом ранговой корреляции щ по Спирмену.
При сенсибилизации морских свинок вакциной БЦЖ наблюдалось нарастание интенсивности кожно-аллергических реакций в ответ на внутри-кожное введение туберкулина параллельно с увеличением специфического цитолейколиза и агломерации клеточных элементов белой крови (табл. 1). Динамика увеличения инфильтрата положительных кожно-аллергических реакций коррелировала с интенсивностью специфической деформации и склеиваемости нейтрофилов. Деформация и склеиваемость нейтрофилов крови имеют выраженный характер специфичности и являются чувстви-
2*
35
Таблица 1
Динамика специфического цитолейколиза и лейкергии крови при экспериментальной туберкулиновой аллергии
Показатель аллергии Средние показатели х ± Б-
до сенсибилизации после сенсибилизации
7-й день 15-й день 30-й день 45-й день 60-й день
Кожно-аллергическая реакция (в мм)........... Цитолейколиз нейтрофилов крови (ППН)......... Агломерация лейкоцитов крови (в %)........... Отрицательная 0,032+0,003 4,6±0,58 2,8+0,77 0,13± 0,001 10,1±3,1 10,3+0,6 0,27+0,08 32,5±3,3 12,8+0,7 0,37±0,08 35,5± 1,8 14,5+0,83 0,41 + 0,01 41,6± 1,6 15,4+0,8 0,46+0,24 49,8± 2,81
Примечание. Во всех сериях Я<0,01— 0,001.
Таблица 2
Динамика специфического цитолейколиза и агломерации лейкоцитов крови морских свинок при введении пестицидов до сенсибилизации вакциной БЦЖ
и в период формирования экспериментальной туберкулиновой аллергии
Показатель аллергии Пестицид Средние показатели (х ± 5-)
до сенсибилизации после сенсибилизации
и после введения пестицидов 7-й день 15-й день 30-й день 45-й день
Кожно-аллергическая реакция (в мм) Цитолейколиз нейтрофилов крови (ППН) Агломерация лейкоцитов крови (в %) Кожно-аллергическая реакция (в мм) Цитолейколиз нейтрофилов крови (ППН) Агломерация лейкоцитов крови (в °/о) ддт Хлорофос ддт Хлорофос ДДТ Хлорофос ДДТ Хлорофос ДДТ Хлорофос ДДТ Хлорофос Отрицательная » 0,04 + 0,008 0,06+0,002 Отсутствует » Отрицательная » 0,03± 0,008 0,04+0,01 5,5+0,9 6,1+1,4 9,8±0,74 8,8+1,3 0,46±0,05 0,36± 0,014 3,8+1,3 4,1+1,3 8,0± 1,7 7,0+1,6 0,24±0,03 0,19+0,028 3,1 + 0,8 4,6+1,2 13,8+0,6 10,1 + 2,0 0,54 + 0,020 0,42+0,022 18,6±4,1 23,6± 2,3 16,3+2,1 16,6± 1,9 0,49+0,01 0,39± 0,04 12,6+2,5 25,3+4,1 19,0±0,8 20,0±0,9 0,56+ 0,040 0,45+0,015 30,0+3,1 37,6+2,0 20,5±3,6 20,0±3,3 0,52+0,03 0,50±0,12 30,0+3,0 35,3+2,8 16,3± 0,88 19,5± 1,30 0,43±0,01 0,46± 0,003 40,8± 1,5 44,0±0,9 16,5± 1,03 16,8+1,60 0,45+0,02 0,43+0,02 38,3+0,8 41,6+1,5
тельными тестами сенсибилизации. Представленные данные показывали, что в процессе формирования туберкулиновой аллергии кожно-аллерги-ческим реакциям предшествует возникновение аллергизирующего фактора в лейкоцитах крови, что сопровождается усилением их адгезивности при воздействии специфического агента.
Влияние пестицидов на аллергическую реактивность проявлялось в статистически достоверном увеличении интенсивности кожно-аллерги-ческих реакций после сенсибилизации морских свинок вакциной БЦЖ (см. табл. 2). Несколько более выраженное увеличение интенсивности кожных реакций наблюдалось после введения пестицидов в период формирования аллергии. Подобное действие токсического фактора на чувствительность сенсибилизированного организма не носило строго специфического характера, хотя влияние ДДТ было несколько более выражено. Применявшиеся пестициды с различным механизмом действия (хлорсо-держащие и фосфорорганические) оказывали в общем однотипное влияние на интенсивность кожно-аллергических реакций.
Увеличение туберкулиновой чувствительности кожи у животных, которым энтерально вводили пестициды, сопровождалось закономерным увеличением ППН. Особенно резко увеличился ППН при действии токсического фактора, введенного до сенсибилизации животных вакциной БЦЖ.
Определение ППН на 7-й день сенсибилизации морских свинок непосредственно после введения пестицидов в период формирования аллергии показало четкий подавляющий эффект по сравнению с ППН у животных, которым пестициды вводили до сенсибилизации. Однако уровень деформации нейтрофилов у морских свинок все же в 1,5—1,9 раза превышал показатели ППН у животных, которым не вводили пестициды.
При анализе показателей туберкулиновой лейкергии обнаружены обратные соотношения. Введение пестицидов наряду с увеличением интенсивности кожно-аллергических реакций и ППН закономерно сопровождалось снижением содержания лейкергических лейкоцитов при контакте крови со специфическим антигеном. Статистически достоверное подавление туберкулиновой лейкергии наблюдалось при введении ДДТ и хлорофоса как до сенсибилизации, так и в период формирования аллергии. Приведенные данные свидетельствуют о том, что введение пестицидов увеличивает аллергическую чувствительность организма и в то же время подавляет иммунобиологические механизмы приспособительных реакций клеточной защиты. Действие токсических факторов проявляется в изменении интенсивности ответных аллергических реакций кожи не только на введение специфических антигенов, но и на формирование в клетках белой крови «аллергизирующего фактора».
Представляло интерес выяснить возможные механизмы токсического действия пестицидов на характер деформации нейтрофилов, определяя оба фактора — специфический и неспецифический — цитолейколиза. Специфический цитолейколиз наблюдался при контакте клеточных элементов крови с туберкулином, а неспецифическая повреждаемость выявлялась после параллельного выдерживания в аналогичных условиях этих же проб крови с 5% раствором цитрата натрия, на котором приготовляли туберкулин в разведении 1:10. Соответствующие данные, выраженные в процентах поврежденных к общему числу подсчитанных нейтрофилов на следующий день после введения животным пестицидов, приведены в табл. 3. Как видно, введение пестицидов несенсибилизированным животным приводит к увеличению неспецифической деформации нейтрофилов крови почти в 2 раза, что свидетельствует об определенном повреждающем действии малых доз пестицидов на клеточные элементы белой крови, более выраженном у ДДТ. В то же время туберкулиноцитолиз меняется незначительно.
В период формирования туберкулиновой аллергии у контрольных животных, не получавших пестицидов, специфический цитолейколиз уве-
Таблица 3
Влияние энтерального введения пестицидов на специфический и неспецифический цнтолейколиз крови при экспериментальной туберкулиновой аллергии
Средние значения показателей цитолейколиза (в %):
Время введения пестицидов Пестицид до введения пестицидов после введения пестицидов
специфический неспецифический специфический неспецифический
До сенсибилизации В период формирования аллергии После аллергической перестройки ДДТ Хлорофос Контроль ДДТ Хлорофос Контроль 1 ДДТ Хлорофос Контроль 1 9,1±и 10,1± 1,5 9,2±0,7 8,6± 1,3 9,0± 1,4 9,1 ±2,4 55,0±4,2 56,0± 8,5 53,6±3,1 5,3±0,8 5,6± 1,0 5,5± 0,46 5,5±0,9 5,0±0,9 6,0± 1,6 8,0± 0,3 9,2±2,1 7,6±0,9 14,5±0,8 10,5± 1,5 33,6±3,4 23,3±4,0 19,0±3,6 43,8±3,5 39,8±2,8 53,0±3,0 10,5± 1,4 8,1± 1,6 9,8± 1,1 9,0± 1,4 6,0± 1,1 15,0± 1,7 15,8± 1,6 8,4± 0,9
1 Контрольные животные пестицидов не получали, но исследовались в те же сроки, что и животные опытных групп.
Примечание. Во всех сериях 0,05>Р<0,01
личивается в 2 раза (до 19%). В то же время повреждаемость нейтрофилов под влиянием цитрата натрия остается неизменной (6%). При введении пестицидов в этот период отмечается увеличение туберкулинолейколиза в 2,6 раза у животных, получивших хлорофос, и в 3,9 раза у животных, получивших ДДТ, так же как и некоторое возрастание неспецифической повреждаемости нейтрофилов (в 1,8 раза).
У животных с повышенной аллергической чувствительностью (3-я группа) более половины всех нейтрофилов крови деформировалось при соприкосновении с туберкулином. Непосредственно после введения пестицидов у животных опытных групп интенсивность специфической повреждаемости снижалась на 20,3—28,8%, а интенсивность неспецифического цитолиза, напротив, увеличивалась в 1,7—1,9 раза.
Возможно, что циркуляция в крови сенсибилизированных животных малого количества пестицидов вызывает изменения в степени поглощения сенсибилизогенов лейкоцитами. Соответственно изменяется интенсивность деформации лейкоцитов при их контакте со специфическим агентом (туберкулином), что последовательно влияет на возникновение кожно-аллер-гических реакций замедленного типа. Полученные нами данные свидетельствуют, что пестициды могут оказывать определенное влияние на механизмы возникновения аллергии замедленного типа, свойства клеточных элементов белой крови, ответственных за степень специфичности ответных реакций сенсибилизированного организма на введение специфического антигена. Повышение интенсивности неспецифической повреждаемости лейкоцитов, наблюдающееся как у сенсибилизированных, так и у не-сенсибилизированных животных, следует, по-видимому, объяснить определенным токсическим действием пестицидов на эти функциональноактивные и лабильные клеточные элементы организма. Возможно, в механизме подобного действия имеет значение прежде всего неблагоприятное действие ядохимикатов на клеточные оболочки нейтрофилов. Неблагоприятный эффект пестицидов при их введении в период формирования аллергии сказывается в увеличении интенсивности цитолейколиза при контакте со специфическими и неспецифическими активными факторами. В процессе формирования повышенной чувствительности сенсибилизированного орга-
низма, получившего пестициды, происходит возникновение гиперчувствительности, что может привести к патологическим реакциям. Усиление реактивных свойств и деформации лейкоцитов, а также подавление специфической лейкергии, наступающее под влияние пестицидов, свидетельствуют о нарушении иммунологических механизмов клеточных реакций.
Установлено, что введение пестицидов животным с измененной аллергической реактивностью влечет за собой различную степень подавления кожных аллергических реакций. Изучение реактивных свойств лейкоцитов при действии пестицидов на фоне измененной аллергической реактивности показало, что соответственно с угнетением аллергической инфильтрации кожи подавляется специфический туберкулинолейколиз. Вместе с тем усиливается интенсивность неспецифической деформации нейтрофилов, что можно связать с непосредственным действием малых доз ядохимикатов, которые не вызывают никаких видимых признаков отравлений.
Таким образом, дифференцированный подход к изучению степени аллергизации различных систем организма может оказаться полезным для выяснения механизма действия того или иного фактора на аллергическую реактивность организма.
ЛИТ ЕРАТУРА
А. д о А. Д. Врач, дело, 1963, № 6, с. И. — М а ц А. Н. Лабор. дело, 1964, № 11, с. 651,— Стоянов Б. Г. Сов. мед., 1963, №4, с. 33,— Т у г а н о в а В. Е., М а ц А. Н., Ю с и п о в а И. П. Клин, мед., 1965, № 12, с. 19. — Ф р а д к и н В. А. Вестн. АМН СССР, 1963, № 4, с. 77. — Фридман Г. И. В кн.: Сборник докладов 6-й научной конференции Таллинск. научно-исслед. ин-та эпидемиологии, микробиологии и гигиены. Таллин, 1966, с. 353. — Фридман Г. И.,Недопрядко Д. М. В кн.: Лечение на курортах Карпат. Ужгород, 1967, с. 255. — Fleck L., Ann. Inst. Pasteur., 1957, v. 92, p. 380.
Поступила 13/X11 1968 r.
EFFECT OF PESTICIDES ON SPECIFIC CYTOLEUCOLYSIS AND LEUKERGY OF BLOOD IN EXPERIMENTAL TUBERCULIN
ALLERGY
D. M. Nedopryadko, G. I. Fridman
An experimental study of tuberculin allergy in guinea pigs showed the intensification of.the skin allergic reaction in the course of the development of a slow type of high sensitivity to^be accompanied by a simultaneous augmentation of specific blood cytoleucolysis and leu-kergy. The appearance of the allergic factor in leucocytes and the intensification of their adhesive property precedes the development of the skin allergic reaction. The introduction of pesticides (chlorophose, DDT) in doses, that cause no poisoning, to animals before their sensitization and at the period of formation of allergy increased the intensity of the allergic reaction and that of cytoleucolysis and diminished specific leukergy. The administration of pesticides to animals with an altered allergic reactivity brought about an inhibition of allergic infiltration of the skin and a supression of specific cytoleucolysis and leukergy and an increase of nonspecific cytoleucolysis of neutrophiles. A differential study of the extent of allergi-zation of various body systems makes it possible to define the mechanism of action of individual external factors on the allergic-reactivity of the body.
