CC BY
43
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
EXPERIMENTAL INVESTIGATIONS
© Коллектив авторов, 2000 УДК 616-006.04-084:612.396.11
Н. И. Шеренешева, Б.Е. Финько, Ф.Ф. Бланко, Т.А. Алиева, Е.Е. Бедрина, И.А. Гоголева
ВЛИЯНИЕ ПАЛЮСТРАНА НА ИНДУКЦИЮ МННГ ОПУХОЛЕЙ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА КРЫС
НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей
Постепенно накапливаются экспериментальные данные об антиканцерогенных свойствах пищевых волокон, полученные на разных моделях бластомогенеза [1, 2, 6—9].
В нашем ранее выполненном исследовании [5] было изучено влияние палюстрана (гетерополисахарид высокомолекулярной фракции Сотагит Ра1и,Хге, относящийся к семейству Яояасеае) на канцерогенез у крыс, индуцированный аранозой, который достоверно снижал как общую частоту новообразований, так и частоту опухолей почек.
Целью настоящей работы явилась оценка влияния палюстрана на желудочно-кишечный канцерогенез у крыс, индуцированный К-метил-К-ншро-^нитрозогуанидином (МННГ).
Материалы и методы. Использовали МННГ, приготовленный фирмой «Р1ика А. в., ВисИ Б. О.» (Швейцария), и палюстран, синтезированный в РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. Палюстран экстрагировали из растительного сырья 86% этанолом и очищали деминерализацией с помощью ионообменной смолы КУ-2 и дальнейшим переосажцением в различных растворителях.
65 белых беспородных крыс-самцов разводки РОНЦ РАМН с исходной массой тела 180—200 г содержали в пластиковых клетках по 5 особей на стандартной диете. Животные были разделены на 4 группы. Крысы 1-й и 2-й групп (по 20 самцов) получали МННГ с питьевой водой (0,01%) в течение 6 мес. Крысам 2-й и 3-й (15 крыс) групп вводили палюстран с кормом в дозе 100 мг/кг массы тела 3 раза в неделю. 10 крыс 4-й группы служили интактным контролем. Введение палюстрана начинали за 1 мес до введения МННГ и продолжали в течение всего опыта. Ежемесячно животных взвешивали. Опыт закончили через 12 мес от начала введения палюстрана. Оставшиеся в живых к концу опыта крысы были умерщвлены эфиром. Все животные были подвергнуты патологоанатомическому исследованию. Материал фиксировали в 10% растворе формалина, заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. При статистической обработке результатов использовали критерий значимости Стыодента — Фишера и метод у} с поправкой Йейтса для ограниченного числа наблюдений [3].
Результаты и обсуждение. Через 6 мес после начала опыта масса тела у животных всех опытных групп была примерно одинаковой и практически не отличалась от таковой в группе интактного контроля. Введение палюстрана не влияло на выживаемость крыс.
У крыс, получивших только палюстран (3-я группа), и у интактных крыс (4-я группа) опухолей обнаружено не было. Данные по индукции опухолей представлены в таблице.
N.I. Sherenesheva, V.E. Finko, F.F. Blanko, T.A. Aliyeva, E.N. Bedrina, I.A. Gogoleva
PALUSTRAN EFFECT ON MNNG-INDUCED GASTROINTESTINAL TUMORS IN RATS
Institute of Experimental Diagnosis and Therapy of Tumors
There is increasing experimental evidence of anticancer potential of food fibers demonstrated in various carcinogenesis models [1,2,6-8,9].
Our previous report [5] analyzed palustran (heteropolysaccharide of high-molecular weight fraction of Comarum Palustre, Rosaceae family) effect on aranose-induced carcinogenesis in rats and demonstrated the agent to reduce significantly both incidence of tumors in general and of renal tumors in particular.
The purpose of this study was to evaluate palustran effect on development of gastrointestinal tumors in rats induced by N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG).
Materials and Methods. The study was performed using MNNG supplied by Fluka A.G., Buch S.G. (Switzerland) and palustran synthesized at the N.N.Blokhin Memorial CRC, RAMS. The palustran was extracted from plant material with 86% ethanol and purified by demineralization with ion-exchange resin KU-2 and reprecipitation in various solvents.
65 white mongrel male rats with a 180-200 g bodyweight (BMCRC RAMS breeding) were kept in plastic cages (5 animals each) on a standard diet. The rats were stratified into 4 groups. Groups 1 and 2 (20 males each) received MNNG with drinking water (0.01%) for 6 months. Groups 2 and 3 received palustran with diet at a dose 100 mg per kg bodyweight 3 times a week. Group 4(10 males) was used as intact control. Palustran administration was started at 1 month before MNNG and continued through the experiment. Rat bodyweight was measured monthly. The experiment was finished at 12 months after palustran start. Rats that were alive by the end of the experiment were etherized. All the animals underwent postmortem examination. Tissues were fixed in 10% formalin solution and embedded in paraffin. Sections were stained with hematoxylin and eosin. Statistical analysis of results was performed using Student-Fisher test and (2 test with Yates correction for a limited number of observations.
Results and Discussion. Rat bodyweights were practically equal in all test groups and in the control group at 6 months after experiment start. Palustran had no effect on animal survival.
There were no tumors in rats receiving palustran alone (group 3) and in intact rats (group 4). The table summarizes data on tumor induction. As seen, 6 (31.5%) of 19 rats from group 1 and 6 (30%) of 20 rats from group 2 developed tumors. Therefore, incidence of MNNG-induced tumors was the same in rats receiving the carcinogen alone and in animals receiving MNNG plus palustran.
Экспериментальные исследования
Как видно из таблицы, опухоли развились у 6 (31,5%) крыс 1-й группы и у б (30%) из 20 крыс 2-й группы. Таким образом, показатели общей частоты индуцированных МННГ опухолей у крыс, получивших канцероген совместно с палюстраном, и у крыс, получивших только канцероген, были практически одинаковыми. Опухоли локализовались в желудочно-кишечном тракте: железистом отделе желудка и тонкой кишке. У крыс 1 -й группы латентный период развития опухолей желудка составил 311 ± 0,0 дня, опухолей тонкой кишки — 245 ± 46 дней, у крыс 2-й группы — 290 +17 и 280 ± 42 дня. Различия несущественны.
В 1-й группе у 2 (33%) из 6 крыс поражение желудочно-кишечного тракта было множественным. У крыс 2-й группы, получивших МННГ совместно с палюстраном, подобных множественных поражений не было выявлено. Опухоли желудка развились у 2 (10%) из 20 крыс 2-й группы, получивших МННГ, и у 3 (15,7%) из 19 крыс 1-й группы, получивших только МННГ, опухоли тонкой кишки — у 4 (20%) из 20 крыс и у 5 (26%) из 19 крыс соответственно. Различия показателей частоты возникновения опухолей желудка и тонкой кишки у животных 1-й и 2-й групп несущественны (р > 0,05). Локализация и морфология опухолей были характерны для канцерогенного действия МННГ при использованной схеме введения [4]. Палюстран в исследованной дозе не оказал влияния на локализацию и гистологическую структуру индуцированных МННГ опухолей.
В нашем ранее выполненном исследовании [5] был показан значительный дозозависимый ингибирующий эффект палюстрана на канцерогенез, индуцированный ара-нозой у крыс, выразившийся в достоверном снижении как общей частоты новообразований, так и частоты опухолей почек. Анализ результатов данного опыта свидетельствует о менее выраженном антиканцерогенном эффекте палюстрана в отношении индуцированных МННГ опухолей желу-дочно-кишечного тракта у крыс.
Выводы. 1. Показатели общей частоты опухолей у крыс, получивших МННГ совместно с палюстраном, и у крыс, получивших только МННГ, были практически одинаковы.
2. Различия показателей частоты индуцированных МННГ опухолей желудка и опухолей тонкой кишки в сравниваемых группах оказались несущественными.
3. Показатели средних латентных периодов развития опухолей также практически не отличались от соответствующих показателей в контроле.
4. Защитное действие палюстрана в отношении индуцированного МННГ канцерогенеза проявилось только в достоверном снижении числа случаев с множественным поражением желудочно-кишечного тракта.
ЛИТЕРА ТУРА / REFERENCES
1. Беспалов В. Г. // Экспер. онкол. — 1994. — Т. 16, № 1. — С. 3—11.
2. Бланко Ф. Ф., Дерябин В. В., Пименов А. А., Бовина Е. В. //Анти-
биотики и мед. биотехнол. — 1987. — Т. 32, № 12. — С. 925—938.
3. Турусов В. В., Парфенов Ю. Д. //Методы выявления и регла-
ментирования химических канцерогенов. — М., 1986.
4. Шеренешева Н. И. //Вопр. онкол. — 1979. — Т. 25, № 8. — С. 72—74.
5. Шеренешева Н. И., Финько В. Е., Бланко Ф. Ф. и др. //Бюл.
экспер. биол. — 1998. — Т. 125, № 5. — С. 566—568.
6. Cohen L., Zhao Z., Zanq E. et al. //Carcinogenesis. — 1996. — Vol.
17, N l.-P. 45-52.
Таблица Table
Индукция опухолей у крыс, получивших МННГ и МННГ + палюстран
Tumor induction in rats receiving MNNG and MNNG+palustran
Крысы 1 -я группа МННГ (n= 19) 2-я группа МННГ + палюстран (n = 20)
С опухолями1 With tumors1 6(31,5) 6(30)
С несколькими опухолями2 With several tumors2 2(33,3) 0(0)*
С аденокарциномой желудка With gastric adenocarcinoma 3 (15,7) 2(10)
С саркомой тонкой кишки With small intestinal sarcoma 5(26,3) 4(20)
Rats Group 1 (1=19) MNNG Group 2 (n=20) MNNG+ palustran
'По отношению к количеству крыс, доживших до обнаружения первой опухоли.
2По отношению к количеству крыс с опухолью.
Примечание. В скобках — процент. Звездочка —р< 0,05 по сравнению с 1-й группой (критерий %2).
Чп relation to rats surviving till first tumor detection.
2 In relation to rats with tumors. Numbers in parentheses are percentages.
N о t e.*, p<0.05 as compared with group 1 (%2 test).
Tumor sites were gastric glandular segment and small intestine.
In group 1 gastric tumor latency was 311+0.0 days and small intestinal tumor latency was 245+46 days against 290±17 and 280±42 days, respectively, in group 2. The differences were not statistically significant.
2 (33%) of 6 rats in group 1 had multiple gastrointestinal lesions. Rats from group 2 receiving MNNG plus palustran had no such multiple lesions. Gastrictumorsweredetectedin2(10%)of20rats in group 2 (palustran+MNNG) and in 3 (15.7%) of 19 rats from group 1 (palustran), enteric lesions were found in 4 (20%) of 20 rats from group 2 and in 5 (26%) of 19 rats from group 1. The differences in gastric and enteric tumor rates between groups 1 and 2 were not statistically significant (p>0.05). Tumor sites and morphology were specific of MNNG carcinogenesis at the dosage and schedule applied [4]. Palustran at the test dose produced no effect on MNNG-induced tumors as to sites and histology.
We demonstrated previously [5] that palustran produced a marked dose-dependent effect on aranose-induced carcinogenesis in rats as a significant reduction in incidence of all tumors and of renal tumors in particular. In the present study palustran had a less marked effect on development of MNNG-induced gastrointestinal tumors in rats.
Conclusions. 1. Rates of tumors in rats receiving MNNG together with palustran was the same as in rats receiving MNNG alone.
2. Differences in rates of MNNG-induced gastric and enteric tumor development between animal groups were not statistically significant.
3. Mean tumor latency times in test groups were equal to that in the control.
Experimental Investigations
7. Fleiszer D., Mac Farlone J., Murrey D. et al. //Lancet. — 1978. — N
1430, —P. 552—553.
8. Freeman H., Spiller G., Kim Y. //Cancer Res. — 1980. — Vol. 40. —
P. 2661-2665.
9. Furukava K., Yamamoto I., Tanida M. et al. //Cancer. — 1995. — N
6.-P. 1508-1515.
© Коллектив авторов, 2000 УДК 612.11:616-006
Л. Ю. Андреева, Н. Н. Тупицын, Г. III. Овумян,
К. Л. Чимишкян, 3. Г. Кадагидзе, В. В. Птушкин,
В. И. Кострыкина, Л. Ф. Морозова, В. Б. Ларионова,
Е. Г. Турнянская, Д. М. Мхеидзе, Н. В. Жуков, А. М. Гарин
ГЕМОПОЭТИЧЕСКИЕ ПРЕДШЕСТВЕННИКИ В КРОВИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ: ВЗАИМОСВЯЗЬ КОЛОНИЕОБРАЗОВАНИЯ И ЭКСПРЕССИИ CD34
НИИ клинической онкологии
Стволовая гемопоэтическая клетка (СГК) — клетка, способная полноценно и длительно поддерживать гемопоэз после облучения и токсических воздействий [1]. Аутологичная пересадка мононуклеарных клеток крови, обогащенных фракцией СГК, обеспечивает сокращение периода критической цитопении у онкологических больных после курсов высокодозной химиотерапии.
В норме СГКлибо практически отсутствуют в периферической крови, либо присутствуют в незначительных количествах (менее 1 %). СГК могут поступать в циркуляторное русло в период восстановления гемопоэза после цитопении, индуцированной цитостатиками, а также на фоне применения гемо-поэтических факторов роста (ГФР). Гемопоэтические предшественники, поступающие в кровь из костного мозга под влиянием ГФР или в период выхода из цитопении, носят название мобилизованных СГК, или периферических стволовых клеток (ПСК). Они могут быть собраны, криоконсерви-рованы и в дальнейшем использованы для аутологичной трансплантации в качестве гематологической поддержки [13].
Периферическая кровь как источник СГК применяется в последнее время все чаще [4, 5, 9], так как обладает рядом преимуществ по сравнению с костным мозгом: (упрощение процедуры сбора, возможность мониторинга и соответственно набор достаточного количества материала).
Поскольку пул гемопоэтических предшественников неоднороден, то часто данные клетки называют клетками-предшественницами гемопоэза (КПГ), термин СГК определяет только родоначальную истинно стволовую клетку.
КПГ обладают способностью формировать клеточные колонии in vivo и in vitro, поэтому клетки пула КГТГ иначе называют колониеобразующими единицами (КОЕ). СГК формируют колонии из бластных клеток (КОЕ-бластов), из 40—1000 бластных клеток без терминальной дифференцировки,
4. Palustran protection from MNNG-induced carcinogenesis in rats was seen only as a significant reduction in cases developing multiple gastrointestinal lesions.
Поступила 16.04.99 / Submitted 16.04.99
L.Yu.Andreyeva, N.N.Tupitsyn, G.Sh.Ovumyan, K.L.Chimishkyan, Z.G.Kadagidze, V.V.Ptushkin, V.N.Kostrykina, L.F.Morozova, VB.Larionova,
E. G. Turnyanskaya, D.M.Mkheidze, N. V.Zhukov, A.M. Garin
BLOOD HEMOPOIETIC PRECURSORS IN CANCER PATIENTS: RELATIONSHIP OF COLONY FORMATION AND CD34 EXPRESSION
Institute of Clinical Oncology
Human stem hemopoietic cells (SHC) can maintain full-value hemopoiesis for a long time after exposure to radiation and toxic agents [1]. Autologous transplantation of blood mononuclears enriched with SHC reduces critical cytopenia time in cancer patients after high-dose chemotherapy.
Normally the SHC are absent or present at small amounts (less than 1%) in peripheral blood. Circulatory SCH may be found in patients recovering after cytostatic-induced cytopenia and as a result of administration of hemopoietic growth factors (HGF). Hemopoietic precursors penetrating into blood from bone marrow under the HGF effect or during recovery from cytopenia are referred to as mobilized SHC or peripheral stem cells (PSC). They may be harvested, exposed to cryopreservation and used later for autologous transplantation as hematological support [13].
Peripheral blood as a source of SHC is currently applied more widely [4,5,9] because it has certain advantages over bone marrow such as simpler harvesting, the possibility of monitoring and availability of sufficient amount of material.
Since the hemopoietic precursor, pool is not uniform these cells are usually referred to as hemopoietic precursor cells (HPC) while the term SHC is used to define the initial true hemopoietic cell.
The HPC can form cell colonies in vivo and in vitro and therefore are termed colony-forming units (CFU). The SHC form colonies from blast cells (CFU-blasts), i.e. 40-1000 blasts without terminal differentiation generated after reinoculation. The same cells form 8- and 12-day splenic colonies in vivo. It is SHC that assure the long-term recovery of impaired hemopoiesis [7,8].
There are also polypotent cells, colony forming units of granulocyte-erythroid-macrophage-megakaryocyte lineage
