CC BY
4
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ВЛИЯНИЕ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА НА ТЕЧЕНИЕ СИНЕГНОЙНОЙ ИНФЕКЦИИ ПРИ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОМ ПРОЦЕССЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Н.А. Кувакина, С.П. Перетягин, А.А. Стручков
ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, Нижний Новгород ООО «Лаборатория ТОНУС», Нижний Новгород Ассоциация российских озонотерапевтов, Нижний Новгород
Abstract
In an experiment in 95 mice (a model of a burn disease caused by a thermal burn (20% PT), the effect of the systemic effect of ozonized physiological saline on the course of Pseudomonas infection was studied. A study of the contamination of the internal organs of experimental animals convincingly showed that parenteral administration of FGR led to a significant decrease in dissemination Pseudomonas aeruginosa in the body of mice and increased their chances of survival.This indicated the effect of inhibiting the development of generalization ovannoy infection, due to the reduction of pathogenic and virulent properties of resistant microbial flora, which certainly belongs to ozone
Key words: ozonized saline, generalized infection, microbial virulence
Абстракт
В эксперименте на 95 мышах (модель ожоговой болезни, вызванной термическим ожогом 20% ПТ) исследовано влияние системного воздействия озонированного физиологического раствора на течение синегнойной инфекции. Изучение обсемененности внутренних органов экспериментальных животных убедительно свидетельствовало о том, что парентеральное введение ОФР приводило к достоверному уменьшению диссиминации синегнойной палочки в организме мышей и увеличивало их шансы на выживание. Это свидетельствовало об эффекте сдерживания развития генерализованной инфекции, за счёт снижения патогенных и вирулентных свойств резистентной микробной флоры, который безусловно принадлежит озону
Ключевые слова: озонированный физиологический раствор, генерализованная инфекция, микробная вирулентность
Несмотря на определенные успехи, достигнутые за последние 20 лет в лечении тяжелообожженных, летальность от инфекционных осложнений среди больных с ожогами до настоящего времени остается высокой.
По данным ВОЗ, ежегодно обращается за медицинской помощью с ожогами примерно 6 миллионов человек. При этом частота ожогов в настоящее время достигает 1:1000 населения в год. Смертность, ассоциированная с ожоговой травмой, на 1000 населения в США составляет от 3,9 до 4,5, в Европе этот показатель колеблется от 2,8 до 35,4, на северо-востоке Азии - 184, соответственно, и составляет около 195000 смертей в год.
Около 100 тыс. пострадавших от термических поражений (около 30% случаев от всех ожогов) ежегодно проходят лечение в условиях ожогового стационара. Из числа обожженных, госпитализируемых в стационар, 60-80% больных также имеют поверхностные и пограничные ожоги.
Ожоговая болезнь уже в стадии шока приводит к разнообразным морфофункциональным изменениям внутренних органов и систем пострадавшего, ослаблению защитных механизмов, нарушению сосудистой проницаемости, аэро- и энтерогематических барьеров, а при наличии обширной раневой поверхности все это создает предпосылки к развитию так называемого раннего сепсиса. Сепсис ранних периодов ожоговой болезни, характеризующийся быстротечностью, вплоть до молниеносного развития, тяжелым течением и крайне высокой летальностью, представляет серьезную опасность для пострадавших. Патологоанатомические данные вскрытий погибших в Российском ожоговом центре (Вазина И.Р. и соавт.,1995; 2000) показали, что у 1/3 умерших выявлен сепсис, причем 47,5% из них умерли от раннего сепсиса в первые 5-7 суток ожоговой болезни. Ранняя генерализованная инфекция наиболее часто вызывается синегнойной палочкой (Пылаева С.И. и соавт., 1986; Алексеев А.А., 1993, 1998; Вазина И.Р., 1993; Gang R. et al., 1999).
Высокая этиологическая значимость Pseudomonas aeruginosa в развитии госпитальной инфекции в ожоговых стационарах и полирезистентность возбудителя к антибактериальным препаратам, побуждают постоянно искать новые методы лечения.
В Ожоговом центре при ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России для местного лечения ран и комплексной терапии ожоговой болезни многочисленными исследованиями была показана целесообразность парентерального применения ОФР при ожоговой болезни. Она основана на нормализации кислородного гомеостаза организма, приводящего к положительным изменениям в деятельности различных систем и органов.
В то же время микробиологические аспекты действия озона остаются малоизученными, до настоящего времени не проводилось исследований по влиянию небактерицидных насыщающих концентраций озона в ОФР, применяемых для парентеральной озонотерапии, на патогенные свойства гемокультур высоковирулентной госпитальной микрофлоры, а также на развитие и течение инфекционного процесса.
В исследованиях in vitro, проведенных нами, определено, что ОФР способен ослаблять патогенность госпитальных штаммов гемокультур синегнойных бактерий. Максимальная эффективность отмечена у ОФР с насыщающей концентрацией озона 1000 мкг /л. Поэтому следующим этапом работы
исследовано влияние ОФР этой концентрации на течение синегнойной инфекции у 110 животных с ожогом.
Материал и методы
Моделирование инвазивного типа синегнойной инфекции на фоне термической травмы проводили по методу, разработанному в отделе бактериологии университетской клиники института травматологии Н.А. Гординской и С.И. Пылаевой (1999). Животным (95 мышей) под наркозом (1 мг нембутала на 10,0 г. массы тела) на предварительно депилированную кожу спины наносили контактный термический ожог 20% поверхности тела с помощью электронагревателя с металлической пластиной необходимой площади. Температура обжигающей пластины была 100 0С, время нанесения ожога 10 с. Для индукции септического процесса у обожженных мышей использовали стандартный патогенный для животных штамм Pseudomonas aeruginosa «Тесаков» (получен из ГИСК им. Л.А. Тарасевича). Взвесь стандартного штамма вводили подструпно по 0,1 мл (50 млн МТ), трёхкратно через сутки двое и трое после ожога
Параллельно с инфектом в те же сроки животным контрольной группы внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл вводили стерильный физиологический раствор, а животным опытной группы - 0,2 мл ОФР с концентрацией озона 1000 мкг/л. Оценку летальности проводили на 7 сутки. Выживших животных забивали. Погибших и забитых мышей вскрывали с соблюдением правил асептики. У всех животных проводили бактериологические и гистоморфологические исследования внутренних органов: сердца, легких, печени, почек, селезенки.
Озонированный физиологический раствор получали из стандартного раствора хлорида натрия изотонического 0,9% для инъекций (изготовитель ОАО «Красфарма», г. Красноярск) с помощью аппарата озонотерапии с деструктором озона АОТ-Н-01 -Арз-01 (ТУ 9444-001-07513518-97), Концентрацию растворенного в физиологическом растворе озона определяли с помощью оптического анализатора концентрации озона в жидкой среде ИКОЖ-5 (№2970805 в Государственном реестре средств измерений).
Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере с помощью пакета программ "Statistica" (StatSoft-Russia,1998). При статистическом анализе выполняли парные групповые сравнения с использованием критериев Стьюдента и Фишера. Результаты считали достоверными при р<0,05.
Результаты
Установлено, что после введения взвеси Pseudomonas aeruginosa через сутки, двое и трое после ожога в контрольной группе на 7 сутки погибало 23 животных из 55, (табл. 1), а в опытной группе соответственно 14 животных из 40.
При сравнительном анализе прослеживалась незначительная тенденция к уменьшению летальности в опытной группе против контрольной, статистически достоверных различий не получено (р = 0,2). Из той же таблицы видно, что количество животных доживших до 7 суток в опытной группе с введением ОФР с концентрацией 1000 мкг/л практически в 2 раза превышало число погибших (26 и
14), что свидетельствовало о некотором положительном эффекте озона при синегнойной инфекции.
Таблица 1. Соотношение числа погибших и выживших к 7 суткам животных с синегнойной инфекцией на фоне ожога 20% поверхности тела и введения ОФР с
Группы животных Число мышей в опыте Число мышей, погибших к 7 суткам Число мышей, доживших до 7 суток
Контрольная 55 23 32
Опытная 40 14 26
Морфологические исследования тканей внутренних органов животных контрольной и опытных групп подтверждали генерализованный характер инфекции. Во всех случаях в органах отмечались гемоциркуляторные нарушения, кровоизлияния, нарушения сосудистой проницаемости,отек, а также образование септических очагов. Наиболее часто септические очаги обнаруживались в печени и почках, реже - в селезенке, легких и сердце (что согласовывалось с данными бактериологических исследований) и имели вид от мелко-очаговых лейкоцитарных инфильтратов, до очагов гнойно-некротического воспаления, нередко с наличием микробных колоний в центре и микробных эмболов в сосудах. Характер морфологических проявлений генерализованной инфекции в контрольной и опытной группах существенно не отличался.
У погибших животных контрольной группы при бактериологическом исследовании регистрировалась 100% обсемененность внутрениих органов в сравнении погибшими животными опытной группы, где P. aeruginosa выделялась в 78,5 % случаев (табл. 2).
Таблица 2. Обсемененность внутренних органов экспериментальных животных, _погибших к 7 суткам_
Количество животных в Число случаев выделения P. aeruginosa из
группе внутренних органов
всего с выделением P. aeruginosa печень почки легкие сердце селезенка
Контроль 23 23 23 23 23 23
n =23
Опыт 11 11 11 10 11 11
n=14
Микробиологические посевы внутренних органов показали статистически значимые различия (р < 0,05) при определении числа случаев выделения возбудителя у погибших животных опытной группы в сравнении с контрольной (табл. 2).
Таблица 3. Обсемененность внутренних органов экспериментальных животных,
Количество животных в группе Число случаев выделения P. aeruginosa из
внутренних органов
всего с выделением P. aeruginosa печень почки легкие сердце селезенка
Контроль n =31 18 18 16 13 12 15
Опыт n=26 5 5 5 4 4 4
Сравнительный анализ высеваемости синегнойной палочки из внутренних органов животных, доживших до 7 суток (табл. 3), показал более четкую закономерность уменьшения числа случаев выделения P.aeruginosa в опытной группе по сравнению с контрольной 19% и 56% соответственно. Между группами животных выявлены достоверные различия при исследовании обсемененности печени, почек, легких селезенки (р<0,05). Это можно расценить как эффект сдерживания распространения синегнойной инфекции из раневого очага гематогенным путем под влиянием озона.
Полученные данные свидетельствовали о тормозящем влиянии ОФР на течение синегнойной инфекции, что выражалось в снижении вероятности обнаружения P.aeruginosa во внутренних органах обожженных животных опытной группы. Это позволяет говорить о снижении вирулентности возбудителя, связанной с изменением биологических свойств штамма Pseudomonas aeruginosa « Тесаков», пребывающего в организме опытных животных.
В экспериментах in vitro по изучению прямого влияния ОФР на этот штамм было определено снижение ростовых свойств, адгезивной способности, повышение фагоцитабельности, увеличение содержания суммарной плазмидной ДНК, при этом антибиотикограмма и биохимические свойства существенно не изменялись.
Мы исследовали чувствительность к антибиотикам и биологические свойства штамма Pseudomonas aeruginosa «Тесаков», выделенного из органов экспериментальных животных контрольной группы и опытной группы с введением ОФР с концентрацией озона 1000 мкг/л.
Сравнительный анализ не показал изменения чувствительности к антибиотикам и биологических свойств у штамма, выделенного из организма мышей контрольной группы (с ожогом и синегнойной инфекцией) и у того же штамма, до введения его животным.
Парентеральное введение ОФР с концентрацией озона 1000 мкг/л экспериментальным мышам с ожогом и синегнойной инфекцией приводило к изменению свойств синегнойной палочки.
При изучении чувствительности к антибактериальным препаратам Pseudomonas aeruginosa « Тесаков» (рис. 1), мы отмечали, что в отношении азтреонама, нетилмицина и цефтриаксона штамм становился вместо умеренно-устойчивого - чувствительным, кроме того увеличивалась зона задержки роста
практически возле всех дисков с тестируемыми антибиотиками, за исключением цефоперазона и ципрофлоксацина.
Рис. 1. Изменение чувствительности к антибиотикам у P.aeruginosa "Тесаков", выделенного из организма животного с ожогом и синегнойной инфекцией после введения ОФР с концентрацией озона 1000 мкг/л
Таблица 4 свидетельствует об изменении некоторых биохимических свойств у штамма Pseudomonas aeruginosa «Тесаков», подвергнутого действию озона in vivo. Определено, что у синегнойной палочки, выделенной из внутренних органов животных с применением ОФР, из 28 анализируемых признаков изменялось семь.
Ферментативная нестабильность Pseudomonas aeruginosa « Тесаков» и изменение чувствительности к антибиотикам свидетельствуют о нарушении метаболизма и функциональных особенностей микробной клетки.
Синегнойная палочка, ослабленная действием озона и факторов неспецифической резистентности в условиях макроорганизма изменяла биологические свойства и тем самым изменяла свой фенотип.
Проведенные исследования по оценке влияния ОФР на течение синегнойной инфекции у животных с термической травмой показали перспективность дальнейшего исследования данного метода для применения в клинике.
При оценке летальности в опытной группе отмечалась лишь незначительная тенденция к ее снижению по сравнению с контрольной группой. Однако данные по изучению обсемененности внутренних органов экспериментальных животных убедительно свидетельствовали о том, что парентеральное введение ОФР приводило к достоверному уменьшению диссиминации синегнойной палочки в организме мышей и увеличивало их
шансы на выживание. Таким образом, имел место эффект сдерживания развития генерализованной инфекции, который безусловно принадлежит озону.
Таблица 4. Характеристика основных признаков экспериментальных штаммов
Наименование признака Штамм
P. aeruginosa (К) P. aeruginosa (О)
Оксидаза + +
Каталаза + +
Подвижность + +
Сахароза - -
Глюкоза + +
Инозит - -
Фруктоза - +*
Лизин - +*
Уреаза - +*
Аргинин + +
Индол - +*
Галактоза + +
Целобиоза - -
Ксилоза + +
Манитол + +
NAG - -
BGL - -
ONP - +*
Фосфотаза + -*
Ц. Симманса + +
Трегалоза - +*
Мальтоза - -
Лактоза - -
GGT + +
Эскулин - -
NO2 + +
NO3 - -
Гемолиз + +
Желатина + +
Примечание: (К) - штамм P. aeruginosa, выделенный от животного контрольной группы; (О) - штамм P. aeruginosa, выделенный от животного опытной группы с введением ОФР1000 мкг/л; *- изменение признака
Исследуя биологические свойства и чувствительность к антибактериальным препаратам у штамма Pseudomonas aeruginosa « Тесаков», подвергнутого действию озона in vivo, мы определили существенное увеличение чувствительности его практически ко всем антибиотикам с антисинегнойной
направленностью и изменение некоторых биологических свойств, что свидетельствовало о стрессовом воздействии озона на бактериальную клетку и изменении ее фенотипа
Проведены исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крови, полученной от обожженных мышей на фоне трехкратного внутрибрюшинного введения ОФР с насыщающими концентрациями озона 200 мкг/л, 600 мкг/л и 1000 мкг/л в отношении стандартного штамма синегнойной палочки.
В результате выявлено достоверное повышение ИЗФ у мышей опытных групп, которое было прямо пропорционально увеличению концентрации озона в ОФР. У интактных животных ИЗФ был равен 1,8 ед. В группе животных с ожогом без применения ОФР ИЗФ составил 0,7 Ед. Парентеральное введение ОФР с насыщающей концентрацией озона 200 мкг/л приводило к увеличению ИЗФ до 1,1 ЕД, 600 мкг/л - до 1,5 Ед. Максимальный эффект наблюдали в группе животных с введением ОФР с насыщающей концентрацией озона 1000 мкг/л, при этом уровень ИЗФ у животных был 1,7 Ед.
Максимальный эффект наблюдали в группе животных с введением ОФР с насыщающей концентрацией озона 1000 мкг/л.
Парентеральное введение ОФР животным значительно стимулирует фагоцитарную активность нейтрофилов крови при термической травме, таким образом, активация фагоцитоза синегнойной палочки под влиянием озона зависит от его воздействия как на бактериальную клетку, так и нейтрофилы.
Экспериментально-клиническими исследованиями доказано, что озонированный физиологический раствор при местном применении способен снижать бактериальную обсемененность инфицированных ожоговых ран и ускорять репаративные процессы (Дмитриев В.П., 2002; Перетягин С.П. с соавт., 2004; Стручков А.А. с соавт., 2004), а при парентеральном введении - оказывать многокомпонентное воздействие на нарушенный при ожоговой болезни гомеостаз организма (Верхнев В.А. с соавт., 2004; Горбунов С.Н. и соавт., 2004; Ермакова А.И. с соавт., 2001; Костина О.В. с соавт., 1999; Костина О.В. с соавт., 2003; Носенко В.М., 2004; Перетягин С.П., 1999; Перетягин С.П. с соавт., 2004).
Z.B. Zamora еt al. (2001) на модели септического шока у крыс оценивали профилактический эффект озона, но в сочетании с антибиотиками: цефотаксимом, цефтазидимом, левофлоксацином и
пиперациллином/тазобактамом и отметили, что в группах опытных животных выживаемость была выше, в сравнении с группами, леченными только антибиотиками. Озон способствовал увеличению активности антибактериальных препаратов, за счет чего, по мнению авторов, и был достигнут положительный результат.
Учитывая полученные нами результаты экспериментов in vitro, представилось интересным определить способность одного озонированного физиологического раствора, применяемого парентерально, влиять на развитие синегнойной инфекции из первичного очага.
У животных с ожогом и синегнойной инфекцией на фоне введения ОФР оценивали летальность в контрольной и опытной группах. Достоверных
изменений летальности не наблюдалось, зарегистрирована лишь тенденция (р = 0,2) к ее снижению.
Вместе с тем, у животных на фоне введения ОФР выявлено достоверное снижение обсемененности внутренних органов как у погибших к 7 суткам животных, так и у переживших этот срок. Бактериологические исследования показали что P.aeruginosa выделялась у 100% погибших животных контрольной группы и у 78,5% погибших животных опытной группы (р<0,05). Среди животных, доживших до 7 суток синегнойная палочка высевалась у 56% животных контрольной группы и лишь у 19% животных опытной группы (р<0,05). Результаты эксперимента показали, что у животных с термической травмой, осложненной госпитальной синегнойной инфекцией парентеральное введение ОФР дает больше шансов на выживание.
Очевидно, что эффект сдерживания развития синегнойной инфекции был связан с изменением биологических свойств P. aeruginosa «Тесаков» под влиянием системного введения ОФР. С целью проверки этого предположения у вариантов культур P. aeruginosa «Тесаков» выделенных из внутренних органов экспериментальных животных без введения и с введением ОФР, а также варианта до эксперимента сравнивались антибиотикограммы и биохимические свойства.
Системное воздействие ОФР с концентрацией озона 1000 мкг/л приводило к нарушению метаболизма микробной клетки. Исследование основных ферментативных свойств P. aeruginosa «Тесаков» показало нестабильность семи признаков из 28 анализируемых. Анализ антибиотикограммы выявил увеличение зон задержки роста культуры практически возле всех дисков с антипсевдомонадными антибиотиками, за исключением цефоперазона и ципрофлоксацина, и что особенно важно, в отношении азтреонама, нетилмицина и цефтриаксона штамм становился вместо умеренно - устойчивого -чувствительным. Расширение спектра чувствительности к антибиотикам стало результатом изменений, происходящих в клеточной стенке микроба под действием озона, за счет чего, по - видимому, упростилось проникновение антибиотика внутрь. Определено, что действие неблагоприятных факторов на микробные клетки приводит к изменениям мембран, синтезу протекторных соединений ( углеводов, аминокислот и др.) и специальных белков (
Сопоставляя полученные данные, можно заключить, что максимальной эффективностью in vitro и in vivo обладал ОФР с насыщающей концентрацией озона 1000 мкг/л. Прямое воздействие ОФР in vitro на госпитальные штаммы синегнойных бактерий приводило к снижению ростовых свойств, утрате адгезивной способности, увеличению фагоцитабельности, модификационным изменениям плазмид. Под действием системного влияния ОФР in vivo P. aeruginosa изменяла ферментативную активность и чувствительность к антибактериальным препаратам.
Заключение
Таким образом, действие озона, используемого в виде ОФР на госпитальные штаммы P. aeruginosa как in vitro так и in vivo, сопровождается снижением у них патогенных и вирулентных свойств, что свидетельствует о серьезных фенотипических изменениях.
Список литературы
1. Алексеев А.А. Ожоговый сепсис: диагностика, профилактика, лечение: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М.,1993. 40 с.
2. Алексеев А.А., Лавров В.А. Ожоговая септикотоксемия: этиология, патогенез, клиника, лечение // Российский медицинский журнал. 1998. №1. С. 4144.
3. Андреев В.С., Богрянцева Е.А., Осипов Г.А. с соавт. Экскреция и активация регуляторов стрессустойчивости микроорганизмов при различных внешних воздействиях на культуру // Биотехнология. 1991. №6. С. 28-32.
4. Баснакьян И.А., Мельникова В.А. Стрессорные белки у бактерий // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1996. №6. С. 99-103.
5. Баснакьян И.А. Стресс у бактерий. М.: Медицина, 2003. 136 с.
6. Вазина И.Р., Бугров С.Н. Основные причины смерти обожженных в восьмидесятые и девяностые годы 20 века // Тез. междунар. конф. «Актуальные проблемы термической травмы». СПб., 2000. С. 40-41.
7. Вазина И.Р., Бушуев Ю.И., Сосин Е.Ю. с соавт. Ранний сепсис -тяжелое осложнение острого периода ожоговой болезни // Межрегион. науч. -практ. конф., посвящ. ХХ-летию образ. Краснодар. ожог. центра. - Краснодар, 1993. С. 11-13.
8. Вазина И.Р., Верещагина Е.С. Сепсис - как причина смерти тяжелообожженых детей // Восьмая науч. конф. по пробл. «Ожоги»: Тез. докл. СПб., 1995. С.41-42.
9. Вазина И.Р., Верещагина Е.С., Пылаева С.И. с соавт. Сепсис у обожженых и вопросы его патогенеза // Междунар. конгр. «Комбустиология на рубеже веков». М., 2000. С.43-44.
10. Вазина И.Р., Сосин Е.Ю., Бушуев Ю.И. Особенности сепсиса у обожженных в настоящее время // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 1995. Т. 155, №12. С. 66-68.
11. Верхнев В.А., Ведерникова О.Л., Васин Н.И. с соавт. Применение плазмофереза и озонированных растворов у больных с термической травмой // Мат. 2 науч. -практ. конф. «Анестезиология и интенсивная терапия в неприспособленных условиях». Голицино, 1999. С. 60.
12. Верхнев В.А., Моисеева Е.Н., Глухарева Ю.В. Комплексная терапия эндотоксикоза у ожоговых больных // Междунар. конгр. «Комбустиология на рубеже веков». М., 2000. С.69.
13. Гординская Н.А., Пылаева С.И. Влияние ПО на течение генерализованной инфекции при ожогах // Иммунология. 1999. №2. С. 60-61.
14. Дмитриев В.П. Применение озона на догоспитальном и госпитальном этапах для улучшения результатов лечения ран, открытых переломов и ожогов конечностей: автореф. дис. .канд. мед. наук. Саранск, 2002. 24 с.
15. Ермакова А.И., Глухов А.А., Есипенко В.В. с соавт. Применение озона при лечении хирургической инфекции // Второй конгр. Ассоциации хирургов им. Н.И. Пирогова: Мат. конгр. СПб, 1998. С.35-36.
16. Костина О.В., Перетягин С.П., Сидоркина А.Н., Стручков А.А. Корригирующее действие озонированного физиологического раствора на
уровень глюкозы в крови обожженных // Нижегородский медицинский журнал. 2003. Прил. « Озонотерапия». С. 225.
17. Костина О.В., Перетягин С.П., Иванова И.И. с соавт. Оценка эффективности применения озонированного физиологического раствора при лечении обожженных // Мат. VII Всерос. науч.-практ. конф. по пробл. термических поражений. Челябинск, 1999. С.122-123.
18. Носенко В.М., Чеглаков Е.В. Парентеральная озонотерапия в комбустиологии // Нижегородский медицинский журнал. 2004. Прил. «Комбустиология». С. 94-95.
19. Перетягин С.П., Стручков A.A., Вилков CA. с соавт. Озонотерапия в системе реабилитации тяжелообожженных // Нижегородский медицинский журнал. 2004. Прил. «Комбустиология». С. 211-212.
20. Перетягин С.П., Тихонов В.Н., Вилков CA. с соавт. Иммуномодулирующие свойства глобулинотерапии и озона в комплексной терапии раненых и пострадавших с огнестрельными ранениями и термической травмой // Мат. конгр.« Человек и его здоровье». СПб.,1999. С. 288-289.
21. Перетягин С.П., Стручков A.A., Вилков CA. с соавт. Озонотерапия в системе реабилитации тяжелообожженных // Нижегородский медицинский журнал. 2004. Прил. «Комбустиология». С. 211-212.
22. Пылаева С.И., Матусис З.Е., Пахомов С.П. с соавт. К проблеме профилактики гнойно-септических осложнений у тяжелообожженных // Третья всесоюз. конф. по пробл. «Современные средства первой помощи и методы лечения ожоговой болезни»: Тез. конф. М., 1986. С. 200-201.
23. Рощина Е.К., Петров Л.Н. Выделение белка во внеклеточное пространство как неспецифическая реакция Escherichia coli на стресс // Микробиология. 1997. Т. 66, №2. С.179-184.
24. Стручков A.A., Перетягин С.П., Пылаева С.И., Кувакина НА. результаты комплексного применения методик озонотерапии для борьбы с анаэробной инфекцией у ожоговых больных// Нижегородский медицинский журнал. 2004. Прил. «Комбустиология». С. 179.
25. Феофилова Е.П. Трегалоза, стресс и анабиоз // Микробиология. 1992. Т. 61, №5. С. 741-755.
26. Gang R.K., Bang R.L., Sanyal S.C. et al. Pseudomonas aeruginosa seticaemia in burns // Burns. 1999. Vol.25, №7. P. 611-616.
27. Zamora Z.B., Menendez S., Bette M. et al. Ozone prophylactic effect and antibiotics as a modulator of inflamatory septic process in rats // Abstr. book 15-th Ozone World Congress. London, England. 2001. P.56-59.
