CC BY
6
УДК 613.31-078:576.8.083
Л. К. Леесмент
ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ МЕТОДИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ
САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ВОДЫ ВОДОЕМОВ
Таллинский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и гигиены
Нередко бактериологические показатели качества воды определяются с некоторой ошибкой, связанной с условиями отбора, хранения и методами анализа проб. Это обусловливает некоторую вариабельность полученных результатов (Г. П. Калина и Г. Н. Чистович). Целью данной работы являлись оценка адекватности отдельных проб воды и выяснение точности результатов санитарно-бактериологического анализа некоторых из использованных методов.
Опыты проводили на материале, взятом из водных объектов Эстонской ССР и в экспериментальных условиях, исходя из конкретных целей и в количестве, достаточном для статистической обработки результатов. Данные анализировали корреляционно-регрессионным и дисперсионным методами. Тесноту корреляционной связи двух признаков проверяли, применяя коэффициенты корреляции г, а значимость различий между регрессионными коэффициентами — критерия Стьюдента. В некоторых методических опытах определяли коэффициент вариаций показателей V (в процентах).
В пробах подсчитывали общее количество бактерий по выросшим на питательном агаре колониям при температуре 20 и 37°С. На среде Эндо учитывали количество оксидазотрицательных и оксидазположительных колоний, выросших при температуре 37°С, используя для этой цели как мембранные фильтры, так и метод прямого посева. Энтерококки определяли на среде Сланеца при температуре инкубации 37°С с параллельным применением мембранных фильтров и прямого посева. Основные результаты указанного анализа сводятся к следующему.
При исследовании параллельных проб воды, отобранных одновременно из одной точки водотоков на 2—3 створах (участках) разной степени загрязнения, установлен более высокий коэффициент вариации (88—146%, в среднем 112 %) численности всех изученных групп бактерий в загрязненных створах. В более чистых створах V между отдельными пробами ниже — в пределах 8—40% (в среднем 20%). Полученные данные необходимо учитывать при оценке достоверности результатов бактериологического анализа, особенно при загрязненных участках водоема.
В наших опытах в загрязненных створах общее число бактерий колебалось: примерно 104—10& в 1 мл, коли-индекс 10е—10е, индекс энтерококков 104—10е. В условно чистых створах общее число бактерий —103—104 в 1 мл, коли-индекс— 10®—104, индекс энтерококков— 102—103.
Кроме того, установлена зависимость достоверности средних арифметических величин указанных групп микроорганизма от численности ко~ лоний, выросших на чашках или мембранных фильтрах. При определении общего числа сапрофитов на питательном агаре г являлся наименьшим (±10—20%) при 60—200 колониях и достигал ±40% и более при крайних значениях, т. е. от единичных до нескольких десятков или же свыше 250 колоний на чашке. Эти показатели колеблются чаще всего в зависимости от вида микроорганизма, т. е. особенностей их роста. Колонии энтерококков — компактные с небольшим диаметром, в то время как колонии на среде Эндо и питательном агаре более крупные, что определяет более вероятный эффект их наложения или слияния и снижает точность их количественного определения.
Уровень достоверности средних величин зависит также от степени разведения проб воды перед посевом, так как при параллельных посевах из нескольких последовательных десятикратных разведений одной пробы не
получено одинаковых результатов. При слишком большом разведении, когда на чашке вырастает до 20 колоний, результат, как правило, выше на 10— 20 %, а при недостаточном разведении (колоний более 250) — ниже на 50— 100%, чем при оптимальном числе колоний на чашке.
На уровень достоверности среднего результата влияет и число параллельных посевов на чашках или фильтрах, т. е. повторностей в пространстве. По нашим данным, для получения результатов с 90% степенью достоверности при определении количества бактерий, выросших на питательном агаре и среде Эндо, требовалось 4—5, а для энтерококков 3—4 параллельных посева из одного и того же разведения. Отсюда следует практический вывод, что с целью получения данных определенного уровня значимости необходимо производить посевы на таком числе чашек и из таких разведений, при которых могут быть получены средние величины с наименьшим коэффициентом вариации. Однако, как показал дисперсионный анализ, вариация результатов в параллельных пробах значительно выше, чем при параллельных посевах одной и той же пробы, что подчеркивает важность отбора нескольких параллельных проб в подлежащем изучению участке водоема.
Метод фильтрации проб через мембранные фильтры, в частности проб из чистых вод, следует использовать для количественного определения бактерий группы кишечных палочек, энтерококков, клостридий, стафилококков в водах, где необходимо концентрирование этих микроорганизмов. Однако при анализе проб воды, которые не требуют концентрирования бактерий (а часто наоборот — разведения), можно применять прямой посев.
При сравнении результатов выращивания бактерий на среде Эндо с результатами применения фильтров и прямого посева на среду выяснилось, что на мембранных фильтрах иногда вырастает при температуре 37°С несколько меньше колоний, чем непосредственно на среде. Это может быть связано с ростом на среде бактерий, не относящихся к группе кишечных палочек, которые на фильтре не дают видимых колоний. Presswood и Brown предполагают, что через поры фильтров не поступает оптимального количества питательных веществ для роста бактерий.
При выращивании энтерококков на среде Сланеца разница между результатами, полученными при прямом посеве и на фильтрах, как правило, недостоверна. Результат количественного определения энтерококков в большей степени зависит от питательной ценности ингредиентов в составе среды Сланеца. Рыбный концентрированный гидролизат Дагестанского института питательных сред хорошо заменяет дефицитный ингредиент — триптозу, предусмотренную в зарубежных рецептах среды Сланеца. Нам кажется, что внедрение метода индикации энтерококков в окружающей среде требует наличия стандартизированной среды, которую можно приготовлять централизованно в сухом виде.
При сравнении отечественных № 3 и чешских (фирмы «Хемапол») мембранных фильтров по способности выращивания на них бактерий группы кишечных палочек и энтерококков при температуре 37°С выяснилось, что результаты, полученные при параллельном использовании названных фильтров, достоверно не различались. Но следует отметить, что при использовании в повседневной работе отечественных фильтров № 3 из разных партий воспроизводимость результатов иногда была низкой, так как фильтры бывали разной толщины и качества.
По данным Hufham, Schaffer и соавт., высеваемость бактерий фекальных кишечных палочек оказалась статистически неодинаковой при параллельном использовании Gelman- и Millipore-фильтров. В связи с различным качеством применяемых за рубежом мембранных фильтров в литературе обращается внимание на необходимость разработки стандартной процедуры для оценки качества фильтров разных фирм.
Мы считаем, что в каждом конкретном случае при использовании фильтров новой партии целесообразно определить соотношение данных,
полученных с использованными новыми марками (партиями) фильтров. Для контроля следует применять прямой посев на соответствующие среды. Целесообразно сопоставлять соответствующие регрессионные уравнения для оценки полученных разными методами данных, так как на основании регрессионного анализа можно предсказать и рассчитать неизвестное значение функции от известного значения аргумента.
Приведенные данные могут быть использованы при выборе и усовершенствовании методических приемов для санитарно-бактериологических исследований воды водоемов.
Требуемая чувствительность и точность применяемого метода достигаются в конкретных опытах при проведении традиционных анализов в зависимости от возможной затраты времени и материалов. При обычных санитарно-бактериологических анализах вод часто можно удовлетворяться методами определения, позволяющими получить результаты с относительным стандартным отклонением ±10—20%.
•ЛИТЕРАТУРА. Калина Г. П., Чистович Г. Н,—В кн.: Санитарная микробиология. М., 1969, с. 18—27.— Press wood W. G., Brown L. R.— Appl. Microbiol., 1973, v. 26, p. 332—336.— Hufham J. В.— Ibid., 1974, v. 27, p. 771—776,— S с h a f f e r D. J., Long M.C., J a n a d -ran K. G.— Ibid., 1974, v. 28, p. 605—607.
Поступила 17/11 1978 r.
УДК 614.7:615.285.7.015.25
Кандидаты хим. наук Р. И. Роэвага и Н. И. Киселева
К ВОПРОСУ ДЕТОКСИКАЦИИ ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ ТЕРПЕНОВ
Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
В связи с разработкой мероприятий по охране окружающей среды важное значение приобретает изучение вопросов детоксикации наиболее стойких пестицидов, в частности полихлорированных терпенов, нашедших широкое применение в сельском хозяйстве. Большую опасность для работающих с этими препаратами представляют остатки ядов в бочках, контейнерах, различных резервуарах и складских помещениях. Загрязненные ядами объекты могут явиться причиной острых и хронических отравлений людей.
Ранее (М. А. Клисенко и Н. И. Киселева; Н. И. Киселева) нами было показано, что полихлорпинен (ПХП) и полихлоркамфен (ПХК) в природных условиях под воздействием УФ-излучения, щелочной среды, высокой температуры и других факторов, а также, возможно, и микроорганизмов, подвергаются разложению с образованием продуктов дехлорирования. Необходимо отметить, что сведения о детоксикации остатков полихлортер-пенов химическими агентами, о природе продуктов дехлорирования этих ядов крайне ограничены (Casida).
Нами изучены процессы превращения полихлортерпенов в малотоксичные продукты с помощью нуклеофильных агентов, в частности с помощью 2-метоксиэтилата калия, который получают в довольно мягких условиях из монометилового эфира этиленгликоля (метилцеллозольва) и углекислого калия (Loder и Lee).
Детоксикацию ядов проводили в круглодонной колбе с герметичной крышкой, в которую предварительно помещали термостатированные растворы хлортерпена и алкилирующего агента в метил цел лозольве. Установлено, что детоксикация ядов протекает в течение 30—60 мин. Степень разложения полихлортерпенов определяли разработанным ранее методом тонкослойной хроматографии (Н. И. Киселева и М. А. Клисенко). При этом
