CC BY
6
Свежеотобранную пробу (50 мл) заливают в барботер, через который пропускают воздух со скоростью 100 мл/мин. Барботер помещают на кипящую водяную баню. Улавливание низкокипящих компонентов происходит в 2 поглотителях, каждый из которых заполнен 10 мл 0,001% водного раствора солянокислого 2,4-ДНФГ (рис. 1).
Как показали результаты исследования, полная отдувка низкокипящих веществ происходит через 1 ч. Из поглотителей раствор сливали в коническую колбу с притертой пробкой и оставляли на 10 ч при комнатной температуре. Последующую обработку пробы проводили так же, как и стандартных водных растворов альдегидов и кетонов разных концентраций.
Содержание отдельных компонентов определяли по калибровочным графикам, построенным для индивидуальных карбонильных соединений по методу внутреннего стандарта. Метод анализа опробован на ряде образцов воды из гермообъектов. На рис. 2_ представлена хроматограмма конденсата урины.
Чувствительность метода по формальдегиду 0,025 мг/л, по уксусному альдегиду 0,1 мг/л, по пропионовому альдегиду 0,35 мг/л, по ацетону 0,35 мг/л. Относительная ошибка определения 7%.
ЛИТЕРАТУРА Пинигина И. А. — Гиг. и сан., 1972, № 4, с. 78.
Семенов А. Д., Брызгало В. А., Лелюшенко Н. В. — В кн.: Методы определены загрязняющих веществ в поверхностных водах. М., 1976, с. 95. Barber Е. D., Lodge J. P. — Analyt. Chem., 1968, v. 35, p. 348. Dhont J. H., Dijkman G. J. C. — Analys. (Lond.), 1967, v. 92, p. 431. Fishbein L. Chromatography of Environmental Hazards. Amsterdam, 1972, v. 1, p. 94-Jones L. A., Monroe R. J. — Analyt. Chem., 1965, v. 37, p. 935. Pi as J. В., Gasco L. — Chromatographia, 1975, v. 8, p. 270. Slawinska D., Slawinski J. — Analyt. Chem., 1975, v. 47, p. 2101.
Поступила 5/XII 1978 r-
УДК 6И.774-07&
Канд. биол. наук А. Ф. Перцовская, Е. В. Филимонова
ОПЫТ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КАПЕЛЬНОГО МЕТОДА ПОСЕВОВ ПРИ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ПОЧВЫ
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
Для анализов почвы капельный метод посевов" используют в модификации Хирте (Шйе), который рекомендовал применять его при учете-общей численности микроорганизмов и бактерий группы кишечных палочек в загрязненной сточными водами почве. Эта модификация заключалась, в том, что на поверхность питательных сред в чашках Петри, содержащих определенные добавки и подвергнутых специальному режиму высушивания, наносили капли суспензии соответствующего разведения (0,01— 0,03 мл). Для приготовления разведений брали разведенный агар-агар (30 мл 2% агар-агара на 1000 мл воды).
Использование достаточно дефицитных и дорогостоящих реактивов-(паранитрофенилглицерина, твина-80), сложный режим высушивания чашек (чередование хранения в холодильнике и сушильном шкафу), применение разведений агар-агара значительно затрудняли практическое пользование этим методом и обесценивали его значительные преимущества, отмечаемые предложившими его авторами. Сделана попытка разработать упрощенную модификацию.
На первом этапе проведены исследования, показавшие, что предложенная Хирте модификация капельного посева почвенной суспензии обеспечивает результаты одного порядка с получаемыми при стандартном методе
Сравнительная оценка различных методов посева при санитарно-биологическом исследовании дерново-подзолистой почвы
посевов на плотные среды поверхностным способом (со шпателем). На следующем этапе работы изучали, насколько влияет на результаты анализов добавление в среды твина-80 и паранитрофенилглицери-на, а также применение разведенного агар-агара.
Численность микроорганизмов, тыс. на I г почвы (М±т)
Показатели
стандартный
метод посева капельный на плотные сре- метод посева ды
Бактерии группы ки-
РезультатыАисследова-ний¡указывают на то, что добавление этих реактивов и разведенного агар-агара не повышает точности метода. Практически необязателен и особый режим подсушивания чашек с
шечных палочек Энтерококки Сапрофитовые почвен
357±36 420+28 310+24 340+28
ные бактерии Споровые бактерии Актино.чицеты
2820+261 2920+202 468±37 460+24
225+19 300+21
плотной средой, достаточно использовать хорошо подсушенные чашки (1 ч при 60—70°С или 1 сут при комнатной температуре до получения «муаровой пленки»). Таким образом, получена упрощенная модификация капельного метода, которая заключается в том, что на поверхность плотной, хорошо высушенной среды в чашки Петри наносят по 6—10 капель (0,01 мл) разведенной почвенной суспензии, приготовленной на стерильной водопроводной воде, затем чашки со средой помещают в термостат крышкой вверх.
Дальнейшие исследования были посвящены сравнительной оценке разработанной нами упрощенной модификации капельного метода посева и общепринятого метода поверхностного посева на плотные питательные среды. Мы расширили круг микроорганизмов, которые рекомендованы для учета этим методом бактерий группы кишечных палочек и общей численности микроорганизмов, и изучили возможность применения этого метода также при учете в почве энтерококков, споровых и термофильных бактерий, актиномицетов и грибов.
В таблице приведены данные, которые на примере дерново-подзолистой почвы указывают на то, что при капельном методе посевов несколько полнее учитываются различные микроорганизмы в почве, чем при использовании обычного метода поверхностного посева на плотные среды. Для отдельных групп микроорганизмов (бактерий группы кишечных палочек и актиномицетов) учет происходил на 17—33% полнее, чем при обычном методе посевов. При измерении в почве количеств энтерококков, общей численности сапрофитных почвенных микроорганизмов, споровых бактерий получены практически одинаковые результаты как при использовании капельного метода посевов в разработанной упрощенной модификации, так и при применении обычного метода поверхностного посева или засеве вглубь среды (заливкой). Аналогичные результаты получены и при микробиологических анализах почв других типов: сероземов, черноземов и др.
Проведенные исследования выявили следующие преимущества капельного метода по сравнению с обычным методом посевов: значительную экономию (в 5—6 раз) питательных сред, посуды, времени на проведение анализа, возможность увеличения повторности без дополнительной затраты сред и посуды, и учета в одной чашке Петри численности микроорганизмов из разных разведений. • .
В работе показана эффективность капельного метода посевов почвенных суспензий при учете общей численности сапрофитных почвенных микроорганизмов, учитываемых на мясо-пептонном и почвенном агаре, споровых бактерий, учитываемых на смеси (1 : 1) мясо-пептонного и сусло-агара, актиномицетов, учитываемых на крахмалоаммиачном агаре и среде Вакс-
мана, бактерий группы кишечных палочек, учитываемых на среде Эндо, и энтерококков, учитываемых на среде Сланеца — Бертли и других плотных средах. В то же время установлена неприменимость капельного метода посевов при учете в почве термофилов и почвенных грибов, поскольку в данном случае не получается строго изолированных колоний.
Апробация капельного метода посевов при санитарно-микробиологи-ческих анализах почвы в полевых экспедиционных условиях показала целесообразность его применения и значительные преимущества перед общепринятым методом посева на плотные питательные среды. Особенно удобным он оказывается в экспедиционных условиях при первых посевах проб почвы, когда выбираются необходимые разведения и приходится работать с целым рядом разведений почвенных суспензий.
ЛИТЕРАТУРА Н1Пе №. Г. — г. ges. Нуй., 1969, Вс1 15, Б. 247—251.
Поступила 27/Х1 1978 г.
УДК 613.281:639.21-07:576.895.122.21.07
Кандидаты мед. наук Г. А. Глазков и А. А. Климишн, В. В. Кривенко
МЕТОД САНИТАРНО-ГЕЛЬМИНТОЛОГИ ЧЕСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ РЫБЫ НА НАЛИЧИЕ ЛИЧИНОК ОПИСТОРХОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИХ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ
Научно-исследовательский институт краевой инфекционной патологии Министерства
здравоохранения РСФСР, Тюмень
В настоящее время для проведения санитарно-гельминтологической экспертизы рыбы, пораженной метацеркариями описторхов, пользуются методами, регламентированными инструкцией «О санитарно-гельминтологической оценке зараженной личинками сибирской двуустки (возбудителя описторхоза) рыбы и ее технологической обработке на предприятиях рыбной промышленности и общественного питания», утвержденной Государственной санитарной инспекцией 5/VIII 1961 г. Рекомендуемые методы выявления метацеркариев и определения их жизнеспособности трудоемки и недостаточно эффективны, так как на основании визуального осмотра личинок описторхов и их окраски не всегда можно дать правильное заключение о жизнеспособности личинок. Биологический метод хотя и объективен, но трудоновыполним, особенно в условиях санэпидстанций.
Целью наших исследований являлось сравнение чувствительности методов выделения метацеркариев описторхов путем пептического переваривания мышечной ткани рыбы в искусственном желудочном соке и определения жизнеспособности личинок при воздействии на них различных химических веществ по сравнению с общепринятыми методами.
Для выделения метацеркариев описторхов и определения интенсивности инвазии мышечную ткань рыбы с подкожной жировой клетчаткой отделяли от костей и тщательно измельчали ножом или перемалывали в мясорубке. Навески по 10 г помещали в чашки с плоским дном и заливали в соотношении 1 : 10 искусственным желудочным соком (11 мл концентрированной соляной кислоты, 7 г пепсина, 9 г поваренной соли на 1 л воды). Банки с навесками помещали на 3 ч в термостат при температуре 36—37°С, после чего их содержимое фильтровали в стеклянные цилиндры через металлический фильтр с размером ячеек 1X1 мм. Через 15—20 мин верхний слой желудочного сока с переваренной мышечной тканью сливали, а осевших личинок переносили в чашку Петри или на часовое стекло, где подсчитывали под бинокулярным микроскопом МБС-1 при увеличении в 16 раз. Для лучшего подсчета личинок в чашку Петри наливали физиологический
