CC BY
9
УДК 577.15.08+606.61
Ханафина А.А., Ванюшенкова А. А., Савельева Е.Е., Аль Окби Хидаер Махмуд Али, Белов А.А.
ВЛИЯНИЕ МИРАМИСТИНА НА СОХРАНЕНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ИММОБИЛИЗОВАННОГО ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА ИЗ ГЕПАТОПАНКРЕАСА КРАБА В ПРОЦЕССЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Ханафина Анна Андреевна, студент 3-го курса факультета биотехнологии и промышленной экологии; Ванюшенкова Анна Алексеевна, студент 2-го курса факультета биотехнологии и промышленной экологии; Савельева Елизавета Евгеньевна, студент 4-го курса факультета биотехнологии и промышленной экологии; Аль Окби Хидаер Махмуд Али аспирант кафедры биотехнологии;
Белов Алексей Алексеевич, д.т.н., доцент кафедры биотехнологии, E-mail: ABelov2004@ yandex.ru Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева, Москва, Россия 125480, Москва, ул. Героев Панфиловцев, д. 20
Изучено действие мирамистина на протеолитическую активность ферментов протеолитического комплекса из гепатопанкреаса краба. При длительной термоинактивации в жидкой среде (до 72 ч, Т+37°С, рН 6,2) хитозан стабилизирует ферменты протеолитического комплекса, мирамистин увеличивает эффективные константы скорости термоинактивации по сравнению с ПК.
Ключевые слова: хитозан, протеолитический комплекс из гепатопанкреаса краба, термоинактивация, стабилизация, УФ-спектры, мирамистин.
INFLUENCE OF MIRAMISTIN ON THE CONSERVATION OF THE ENZYME ACTIVITY OF THE IMMOBILIZED PROTEOLITHIC COMPLEX FROM THE CRAB HEPATOPANKREAS IN THE PROCESS OF OBTAINING AND OPERATION
Khanafina A.A, Vaniushenkova A.A., Savelieva E.E., Al Okbi Hidayer Mahmoud Ali, Belov A.A.* D.I. Mendeleev University of Chemical Technology of Russia, Moscow, Russia. *e-mail: abelov2004@ yandex.ru
The effect of miramistin on the proteolytic activity of enzymes of the proteolytic complex from crab hepatopancreas was studied. With prolonged thermal inactivation in a liquid medium (up to 72 h, T + 37 ° C, pH 6.2), chitosan stabilizes the enzymes of the proteolytic complex, miramistin increases the effective rate constants of thermal inactivation compared to PC. Keywords: chitosan, proteolytic complex from crab hepatopancreas, thermal inactivation, miramistin
стимулирует местные иммунные реакции в очаге за счет усиления поглотительной и переваривающей активности фагоцитов. 3. усиливает регенераторные процессы и репаративную активность в ране; 4. обладает выраженным противовоспалительным действием; 5. активизирует процессы фибринолиза в очаге воспаления. Не обладает местно-раздражающим действием и аллергизирующими свойствами. Эффективно предотвращает
инфицирование ран и ожогов. Активизирует процессы регенерации. Стимулирует защитные реакции в месте применения, за счет активации поглотительной и переваривающей функции фагоцитов, потенцирует активность моноцитарно-макрофагальной системы. Обладает выраженной гиперосмолярной активностью, вследствие чего купирует раневое и перифокальное воспаление, абсорбирует гнойный экссудат, способствуя формированию сухого струпа. Не повреждает грануляции и жизнеспособные клетки кожи, не угнетает краевую эпителизацию.
Нами было изучено изменение
протеолитической активности при действии мирамистина на ферменты ПК (рис. 2). В отличии от панкреатического трипсина происходит снижение ферментативной активности ферментов ПК в присутствии Мир.
Мирамистин (Мир) это новый антисептик широкого спектра действия из группы четвертичных аммониевых соединений (рис. 1), активный в отношении грамположительных и грамотрицательных, аэробных и анаэробных, спорообразующих и аспорогенных бактерий в виде монокультур и микробных ассоциаций, включая госпитальные штаммы с полирезистентностью к антибиотикам.
Рис. 1. Мирамистин К мирамистину чувствительны сложные вирусы и многие грибы (возбудители микозов). Широкий спектр антимикробных свойств Мир, низкая токсичность, отсутствие раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки дает возможность на его основе создать лекарственные формы для наружного применения [1] . Доказано [1,2], что Мирамистин: 1. обладает синергидным действием на антибиотики и другие антимикробные средства, снижая устойчивость к ним бактерий и грибов; 2.
Рис. 2. Влияние мирамистина на протеолитическую активность ферментов ПК (субстрат казеин)
эффективные константы скорости инактивации при хранении возрастают по сравнению с ПК. На рис. 3 и 4 представлены УФ спектры кинетики выхода Хт или ПК-Мир из пленки полученной на следующий день после высушивания.
Рис. 3. УФ спектры растворов Хт (р-р) и выход в раствор Хт из его пленок
Рис. 1а. УФ спектры растворов ПК, мирамистина (Мир) и _ПК-Мир_
Рис. 2а. УФ спектры растворов ПК, мирамистина (Мир) и ПК-Мир
Как известно из литературы [3], ферменты ПК обладают низкой изоэлектрической точкой р1 ниже 3,5, и во внешнем окружении глобулы белка находятся отрицательно заряженные остатки аминокислот. Возможна модификация активного центра ферментов ПК, с потерей активности. При термоинактивации в растворе (рН 6,2) наличие Мир увеличивает эффективные константы скорости термоинактивации по сравнению с самим ПК, так и при увеличении концентрации Мир в растворе.
При высушивании при комнатной температуре, на воздухе растворов Хт, ПК и Мир на сохранение ферментативной активности в значительной мере влияет количество мирамистина в композиции (соотношение ПК:Мир). Эффективные константы скорости высушивания [4] практические не зависят ни от количества иммобилизованного ПК, ни от соотношения ПК:Мир. С увеличением содержания Мир (увеличение соотношение Мир:ПК) в препарате
Рис. 4. УФ спектры растворов ПК+ мирамистин и выход в раствор ПК-Мир Как видно из полученных данных, процесс выхода активного вещества растянут во времени. На ферментативную активность пленок Хт-ПК содержащих Мир влияет время выдерживания в буферном растворе при комнатной температуре. Увеличение соотношение Мир:ПК снижает ферментативную активность уже через 2 часа. Биоцидные свойства композиций содержащих Мир сохраняются по отношению к изученным тест-культурам.
Список литературы
1. Кривошеин Ю.С., Рудько А.П., Свистов В.В., Смирнов И.В. Мирамистин - антисептик широкого спектра действия //Рецепт» , 2006, № 3 (47), с.105-106.
2. Белов, А.А. Текстильные материалы, содержащие иммобилизованные гидролазы для медицинских и косметологических целей. Получение. Свойства. Применение / А.А. Белов.- LAP LAMBERT: Acad. Pub., GmbH &Co. KG, Germany, 2012.- 242 c.
3. Rudenskaya G.N., Isaev V.A., Shmoylov A.M. et al Preparation of proteolytic enzymes from kamchatka crab paralithodes camchatica hepatopancreas and their application // App.Biochem.Biotech. - 2000. - Vol.22. -p.175-184.
4. Dosadina E.E., Savelyeva E.E., Belov A.A. The effect of immobilization, drying and storage on the activity of proteinases immobilized on modified cellulose and chitosan// Process Biochemistry, 2018, vol. 64, January, p.213-220.
