CC BY
22
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
живающих в Санкт-Петербурге. Из образцов крови или буккального эпителия с помощью коммерческих наборов (Интерлабсервис, РФ) выделяли геномную ДНК. Генотип CCR5 определяли методом пиросеквенирования на пиросеквенаторе PyroMark Q24 (Qiagen), используя коммерческие наборы (Интерлабсервис, РФ), по рекомендации фирмы-производителя.
Результаты. Не было выявлено достоверного влияния пола и возраста на частоту распределения изучаемых аллелей. Распределение частот генотипов в исследуемой популяции не отличается от распределения Харди-Вайн-берга. У 346 человек выявили генотип дикого типа. 72 человека были гетерозиготами по делеции изучаемого гена. В обследуемой популяции выявлено пять человек, являющимися гомозиготами по делеции. Таким образом, частота генотипа CCR5 дикого типа составляла 81,8% (346/423), гетерозигот по делеции — 17,0% (72/423), гомозигот CCR5del32/CCR5del32 — 1,2% (5/423). Частота аллеля дикого типа была 0,9, делеции — 0,1.
Заключение. Полученные результаты по частоте аллелей CCR5del32 совпадают с частотой аллелей в северной Европе и Северо-Запада РФ, где частота этих аллелей одна из самых высоких в мире. Высокая частота встречаемости аллели CCR5del32 делает обоснованным скрининг ВИЧ-инфицированных и группу риска по ВИЧ-инфекции.
ОЦЕНКА ГЕМОПОЭЗА У ПАЦИЕНТОВ С ЦИРРОЗОМ ПЕЧЕНИ РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Меледина И.В., Старостина Н.М., Шипунов М.В., Меняева Е.В., Филимонов П.Н., Черных Е.Р., Шевела Е.Я.
Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
Введение. При исследовании периферической крови у 80-88% больных циррозом печени (ЦП) регистрируется цитопенический синдром, степень выраженность которого не всегда коррелирует со спленомегалией, тяжестью заболевания, проведением противовирусной терапии (ПВТ). Цитопения имеет клиническое значение при развитии осложнений ЦП, а также ограничивает возможность проведения ПВТ. Кроме того, учитывая возможность использования аутологичных мононуклеарных и мезенхимальных стромальных клеток костного мозга в терапии больных ЦП, представляется актуальной оценка костномозгового кроветворения у этой группы пациентов.
Цель и задачи. Оценка особенностей гемопоэтиче-ского плацдарма и развития линий клеточных элементов крови у больных ЦП различной этиологии.
Материалы и методы. Исследование клеточного состава костного мозга и периферической крови проведено у 19 пациентов (средний возраст 45,8±10,6 лет) с подтвержденным ранее диагнозом ЦП различного генеза: как исход вирусного гепатита (n = 11), токсического гепатита (n = 6), первичного билиарного цирроза (ПБЦ) и аутоиммунного гепатита (АИГ) (n = 2). Пациентам выполнялась трепано-биопсия подвздошной кости с последующим патогисто-логическим и цитологическим исследованием биоптата. Статистическую обработку проводили при помощи пакета прикладных программ Statistica 6.0 для Windows.
Результаты. Цитопенический синдром был диагностирован у 97.4% пациентов исследуемой группы. При пато-гистологической оценке трепанобиоптата подвздошной
кости нарушение соотношения гемопоэтической и жировой ткани было зарегистрировано у 66,7% пациентов.
Наиболее выраженные изменения гемопоэза выявлены у пациентов с ЦП вирусной этиологии. Так, при оценке гранулоцитарного ряда, у 90,9% пациентов этой группы снижено количество промиелоцитов, у 63% — сегментоядерных нейтрофилов. У 36,4% регистрируется увеличение количества плазматических клеток. Количество мегакариоцитов снижено у 54,5% пациентов, преобладают мелкие формы. В группе больных ЦП вирусной этиологии эритроидный ряд гиперплазирован у 63,6% пациентов, снижение количества эритробластов и про-нормоцитов регистрируется у 100 и 45,5% соответственно, более зрелые формы — нормоциты — представлены в нормальном количестве. У 64% пациентов снижен индекс созревания эритробластов.
В группе пациентов с ЦП токсической этиологии наблюдается преимущественно супрессия кроветворения — в 100% случаев был выявлен миелофиброз 1 ст, у 66,7% (п = 4) — гипоплазия эритроидного ростка за счет снижения количества эритробластов, при оценке грану-лоцитарного ряда регистрируется снижение количества промиелоцитов (100%) и миелоцитов (66,7%), количество мегакариоцитов снижено у 83,3% пациентов.
У пациентов с аутоиммунным генезом ЦП (ПБЦ и АИГ) имеется реактивная гиперплазия эритроидного ростка, особенностью мегакариоцитарного ростка является преобладание мелких гипосегментированных форм, у 1 пациента зарегистрирован миелофиброз 1 степени, также у 1 пациента — гиперплазия плазматического ряда, ассоциированная с увеличением количества В-лимфоцитов периферической крови и гиперпродукцией IgG.
Заключение. Таким образом, у больных циррозом печени с высокой частотой регистрируются изменения костномозгового кроветворения, имеющие особенности в зависимости от этиологии заболевания печени, в связи с чем для рациональной коррекции гемопоэза могут требоваться различные подходы. В развитии нарушений костномозгового кроветворения обсуждается роль активной вирусной инфекции, резервуаром которой являются в т.ч. монону-клеарные и полиморфноядерные клетки периферической крови и костного мозга, опосредованной Т-лимфоцитами миелосупрессии, аутоиммунных реакций, влияния ци-токинов (1КЫу, ТОТа, хемокинов М1Р 1 а/в, СЖХ-10, СХСЬ-3, ВСА-1). Представляется целесообразным дальнейшее уточнение генеза нарушений гемопоэза и оценка их влияния на структурные и функциональные характеристики гемопоэтических стволовых клеток.
ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО РИСКА НА СОСТОЯНИЕ ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ ХГС ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ПРОТИВОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ
Никитин В.Ю., Сухина И.А., Яременко М.В., Жданов К.В., Иванов А.М., Никитин Ю.В., Ширина И.В., Козлов К.В., Жанарстанова Г.А.
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
Введение. В настоящее время активно изучается взаимосвязь хронического гепатита С (ХГС) и метаболического синдрома. Коморбидные заболевания, такие как ожирение, сахарный диабет, гипертоническая болезнь, ишемическая болезнь сердца (ИБС), часто сопровождающие ХГС являются предикторами метаболического
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов Immunology of HIV and viral hepatitis
синдрома. Эти факторы метаболического риска могут влиять на его течение и ответ на противовирусную терапию (ПВТ).
Цель и задачи. Целью данного исследования явилось изучение влияния факторов метаболического риска на состояние иммунитета больных ХГС при проведении ПВТ и достижения устойчивого вирусологического ответа (УВО).
Материалы и методы. Проведено первичное иммунологическое обследование периферической крови (ПК) 73 больных ХГС, как с метаболическими факторами риска, так и без них. В динамике через 24 недели после противовирусной терапии (ПВТ) пегилированным интерфероном-а и рибавирином иммунологическое обследование было проведено повторно у 25 больных с ХГС, из них у 7 больных не был достигнут УВО. Иммунологическое обследование включало определение содержания субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов IgA, IgM, IgG и циркулирующих иммунных комплексов высокомолекулярных (ЦИК выс.), среднемолекулярных (ЦИК сред.) и низкомолекулярных (ЦИК низ.). Иммунофенотипирование лимфоцитов ПК осуществляли на проточном цитометре Cytomics FC500 (фирма Beckman Coulter, США) с использованием 4-х цветных комбинаций прямых моноклональных антител той же фирмы: CD19/CD5/CD27/CD45, CD4/CD8/CD3/ CD45, CD16/CD56/CD3/CD45, CD3/CD25/HLA-DR/ CD45, CD4/CD127/CD25/CD45, CD8/CD38/CD3/CD45. Определение концентраций IgA, IgM, IgG в сыворотке крови проводили турбидимитрическим методом на полуавтоматическом анализаторе BTS-350 фирмы BioSystems с помощью наборов той же фирмы, уровней ЦИК — методом, предложенным Ю.А. Гриневичем и А.Н. Алферовым (1981). Средние значения исследуемых показателей представлены медианой (Ме).
Результаты. Иммунологическое обследование показало, что относительное содержание TNK-клеток (CD3+CD16+CD56+) (до ПВТ 5,85%; УВО 4,45%), NK-клеток (CD3CD56+) (до ПВТ 7,30%; УВО 5,30%), NK-клеток цитолитических (CD3-CD16+/highCD56dim) (до ПВТ 8,00%; УВО 5,95%), достоверно снижалось (р < 0,05) у больных ХГС с метаболическими факторами риска, достигших УВО, в отличие от его отсутствия. Снижение активированных NK-лимфоцитов (CD3CD8dimCD38+) было зафиксировано у больных после ПВТ, как достигших (до ПВТ 24,80%; УВО 14,00%), так и не достигших УВО (до ПВТ 24,80%; без УВО 15,05%). В то же время у этой категории больных в ПК статистически значимо повышалось (р < 0,05) содержание активированных Т-лимфоцитов (CD3+CD25+), как при достижении УВО (до ПВТ 0,08%; УВО 0,25%), так и при его отсутствии (до ПВТ 0,08%; без УВО 0,21%). Уровни этих показателей у больных ХГС без метаболических факторов риска, как достигших, так и не достигших УВО, не имели значимых различий, что может свидетельствовать о влиянии метаболических факторов риска на функциональность TNK- и NK-клеток при ХГС. Количество В-клеток CD19+ у больных с метаболическими факторами риска повышалось у больных не достигших УВО (до ПВТ 12,4%; без УВО 20,9%), тогда как при достижении УВО их количество практически не изменялось (до ПВТ 12,4%; без УВО 13,65%). В то же время выявлено статистически значимое снижение сред. ЦИК у больных ХГС без метаболических факторов риска достигших УВО (до ПВТ 187%; УВО 114%) по сравнению с теми, у кого произошел рецидив заболевания (до ПВТ 187%; УВО
194%). Уровень ЦИК низ. достоверно снижался у больных с УВО в обеих группах (с и без метаболических факторов риска) (до ПВТ 699%; УВО 367%) и (до ПВТ 799%; УВО 398%) соответственно. У больных, не достигших УВО ЦИК низ., также имели тенденцию к снижению, но статистически значимых отличий не было получено. Исследование содержания IgA, IgM, IgG не показало какой-либо взаимосвязи с метаболическими факторами риска и вирусологическим ответом.
Заключение. Исследования показали, что метаболические факторы риска влияют на состояние иммунитета больных при ХГС. У пациентов с ХГС и метаболическими факторами риска при достижении УВО после ПВТ снижается количество Т- и NK-киллерных клеток, тогда как при отсутствии УВО увеличивается содержание В-клеток. Таким образом, у больных ХГС с метаболическими факторами риска снижение содержания популяций истинных киллеров и Т-киллеров во время терапии можно считать благоприятным признаком, а повышение числа В-клеток неблагоприятным.
РЕЗУЛЬТАТЫ ПИЛОТНОГО КЛИНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕНДРИТНО-КЛЕТОЧНЫХ ВАКЦИН В ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОЙ HCV-ИНФЕКЦИИ
Олейник Е.А., Леплина О.Ю., Курочкина Ю.Д., Останин А.А., Старостина Н.М.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
Введение. Многочисленными исследованиями показано, что ключевую роль в патогенезе и исходе инфекции, обусловленной вирусом гепатита С (HCV), играют антиген-специфические CD4+ и CD8+T-клетки. Развитие сильного устойчивого и мультиэпитопного Т-клеточного ответа приводит к элиминации вируса, тогда как несостоятельность адаптивного Т-клеточного ответа ассоциируется с персистенцией вируса. Дендритные клетки являются профессиональными антиген-презентирующими клетками, которые играют доминирующую роль в прими-ровании Т-клеток и поддержании сильного Т-клеточного ответа.
Цель и задачи. Изучение безопасности ДК, нагруженных рекомбинантными белками Core (1-120) и NS3 (11921457) HCV генотипа 1b, и способности ДК-вакцин индуцировать антиген-специфический Т-клеточный ответ.
Материалы и методы. В исследование были включены 10 пациентов с хроническим гепатитом С 1-го генотипа с вирусной нагрузкой — РНК >104 МЕ/мл, без трансформации в цирроз. Иммунотерапия проводилась в виде инициирующего (4 вакцинации с кратностью 1 раз в неделю) и поддерживающего (4-6 вакцинаций с кратностью 1 раз в месяц) курсов. Обследование пациентов проводилось до начала терапии, после 1-го, 2-го курса и последующего 6-месячного наблюдения. IFN-ДК получали путем культивирования прилипающей фракции моно-нуклкеарных клеток (МНК) больных ХГС в присутствии ГМ-КСФ и IFNa с последующей часовой нагрузкой вирусными антигенами. Специфический пролифератив-ный Т-клеточный ответ на вирусные антигены оценивали радиометрически по включению Н3 тимидина. Th1 и Th2 Т-клеточный ответ оценивали по продукции цитоки-нов IFNy и IL-4 в антиген-стимулированных культурах Т-клеток.
